婦陰康洗劑生產(chǎn)工藝改進探究

唐英武，翟科峰，牛 影*

（1.宿州億帆藥業(yè)有限公司，安徽宿州 234000；2.宿州市天然產(chǎn)物與功能性食品工程技術(shù)研究中心，安徽宿州 234000；3.宿州學院，安徽宿州 234000）

婦陰康洗劑的產(chǎn)品處方由秦皮、魚腥草、苦參、仙鶴草、大青葉、紫花地丁6味藥材組成.以上諸藥材按一定比例混合均勻加水煎煮3 次、合并煎液，濾過，濾液濃縮至在60℃檢測的相對密度為1.12時，加乙醇4倍量，靜置24 h，濾過，濾液回收乙醇至60℃檢測的相對密度為1.14?1.18，加水稀釋至1000 mL，靜置24 h，取上清液，分裝，滅菌制得［1］.婦陰康洗劑具有清熱燥濕、除癢止帶的作用，常用于細菌性陰道病、滴蟲性陰道炎、念珠菌陰道炎等癥的治療，可顯著改善陰部瘙癢、疼痛、帶下量多、尿頻、尿急、尿痛等癥狀［2］.

目前婦陰康洗劑的生產(chǎn)工藝中仍存在一些亟待解決的問題，如在中藥提取工藝優(yōu)化前存在有效成分秦皮乙素轉(zhuǎn)化率低、制劑有效期內(nèi)含量下降幅度較大及上市產(chǎn)品在貯存期內(nèi)含量下降快等問題.中藥提取工藝是將中藥有效成分從藥材固相轉(zhuǎn)移到溶劑液相的傳質(zhì)過程，影響轉(zhuǎn)移率的因素有提取加水量、煎煮次數(shù)、煎煮時間、煎煮溫度及提取溶媒的pH 等因素［3］.針對溶媒pH 的影響因素，本研究分別采用pH為5.7的純化水［4］和pH為7.3的飲用水［5］作為婦陰康洗劑中藥提取的溶媒并進行對比實驗，分析研究秦皮乙素在不同pH 溶媒的轉(zhuǎn)化率及提取濃縮液pH 值的變化情況，然后進一步分析制劑市售樣品在貯存期內(nèi)有效成分的含量和pH 值的穩(wěn)定性，旨在為優(yōu)化提取工藝，提高婦陰康洗劑質(zhì)量控制水平提供實驗依據(jù).

1 實驗藥品、試劑與實驗儀器

1.1 實驗藥品與試劑

本實驗藥品及試劑主要有婦陰康洗劑，宿州億帆藥業(yè)有限公司；秦皮、魚腥草、苦參、仙鶴草、大青葉、紫花地丁，芍花堂國藥股份有限公司；乙醇，安徽安特食品股份有限公司；飲用水，宿州市自來水公司（GB5749?2006）；純化水是飲用水經(jīng)過多介質(zhì)過濾器、活性炭過濾器、軟化器、二級反滲透、純化水儲罐制備而成的［6］.秦皮乙素對照品（純度99.9%），中國食品藥品檢定研究院；乙腈（色譜純），美國天地有限公司；甲醇（色譜純），美國天地有限公司；磷酸（色譜純），阿拉丁試劑上海有限公司；乙酸乙酯（分析純），西隴科學股份有限公司；娃哈哈純凈水，杭州娃哈哈集團有限公司.

1.2 實驗儀器

實驗儀器包括MS105DU分析天平，梅特勒?托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司；FE20 pH計，梅特勒?托利多國際貿(mào)易（上海）有限公司；LC?20AT高效液相色譜儀，島津企業(yè)管理（中國）有限公司.

2 實驗方法

2.1 生產(chǎn)樣品的制備

2.1.1 原生產(chǎn)工藝（pH為7.3飲用水溶媒）

分別稱取中藥材秦皮60.00 kg、魚腥草40.00 kg、苦參30.00 kg、仙鶴草30.00 kg、大青葉30.00 kg、紫花地丁50.00 kg投入提取罐中攪拌混勻，按料液比1∶10加入藥材總質(zhì)量10倍質(zhì)量pH為7.3的飲用水，煎煮1.5 h后，放出煎煮液，過濾；按料液比1∶8向藥材濾渣中加入藥材總質(zhì)量8倍質(zhì)量pH為7.3的飲用水，煎煮1 h，放出煎煮液；重復第二次煎煮操作，合并3次煎煮液，過濾，將濾液吸入雙效濃縮器中，控制蒸汽壓力≤0.2 MPa，真空度＞?0.08 MPa，溫度70～90℃，濃縮至在60℃檢測液體相對密度為1.12.將上述濃縮液加入醇沉罐中，放冷至室溫，按料液比1∶4邊攪拌邊緩慢加入乙醇，靜置沉淀24 h，取上清液、濾過，將上清液吸入真空濃縮罐，控制蒸汽壓力≤0.15 MPa，真空度＞?0.05MPa，溫度≤85℃，回收乙醇至無醇味，濃縮至在60℃檢測液體相對密度為1.14?1.18，在D級潔凈區(qū)收取濃縮液.依據(jù)上述工藝分別制備180101、180102兩批提取濃縮液樣品.

2.1.2 改進后的工藝（pH為5.7純化水溶媒）

采用“2.1.1”項下相同的工藝方法，分別稱取相同數(shù)量、同一批號上述6味藥材，按料液比1∶10加入藥材總質(zhì)量10 倍質(zhì)量pH 為5.7 的純化水，采用樣品制備方法“2.1.1”中所用提取、濃縮、醇沉設(shè)備，工藝參數(shù)、工藝條件順序均保持不變.分別制備181001、181002兩批提取濃縮液樣品.

2.2 樣品中秦皮乙素含量測定

2.2.1 色譜條件

以Inertil ODS?3 C18色譜柱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），柱溫40 ℃，以乙腈?0.025mol/L 磷酸溶液（8∶92）為流動相，檢測波長為350 nm［7］，理論塔板數(shù)按秦皮乙素峰計算，應(yīng)不低于7000.

2.2.2 對照品溶液、對照品儲備液的制備、供試品溶液的制備

2.2.2.1 對照品儲備液制備

精密稱取秦皮乙素標準品16 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為母液.

2.2.2.2 對照品溶液制備

精密稱取秦皮乙素對照適量，加甲醇溶解，制成每1 mL含6μg的秦皮乙素標準品溶液，作為對照品溶液.

2.2.2.3 供試品溶液制備

精密量取裝量差異項下本品溶液1 mL 置分液漏斗中，加水10 mL，搖勻，加乙酸乙酯提取4次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，用水20 mL 洗滌，棄去水洗液.將乙酸乙酯液水浴蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，定量轉(zhuǎn)移至10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL，至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得.

3 結(jié)果與分析

3.1 色譜分離效果

分別精密量取對照品溶液與供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀中，按“2.2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果見圖1.由圖1可知，婦陰康洗劑供試樣品溶液與標準品中的秦皮乙素保留時間基本相同，供試品溶液色譜圖中各峰分離度較好，符合要求，說明該色譜圖方法對秦皮乙素具有較好的分離效果.

圖1 秦皮乙素對照品（A）和婦陰康洗劑樣品（B）HPLC色譜圖（1為秦皮乙素）

3.2 線性關(guān)系考察

精密量取“2.2.2”項標準儲備液0.2、0.5、1.0、1.5、1.8 mL 置于50 mL 量瓶中，以甲醇為溶劑稀釋至刻度，搖勻，精密吸取標準品梯度溶液各10μL，注入液相色譜儀，按“2.2.1”項色譜條件，每個梯度濃度重復3次，記錄色譜圖；以對照品進樣濃度（μg/mL）為橫坐標，以秦皮乙素峰面積為縱坐標，制作標準曲線，計算回歸方程及相關(guān)系［8?9］.結(jié)果，秦皮乙素在1.31～11.86μg/mL 時其濃度與峰面積呈良好線性關(guān)系，結(jié)果見表1.

表1 秦皮乙素對照品的線性關(guān)系考察結(jié)果線性

3.3 不同批次樣本檢測結(jié)果

對上述原生產(chǎn)工藝（pH 為7.3 飲用水溶媒）以及改進后的工藝（pH 為5.7 純化水溶媒）所制備的4 種不同編號的樣品濃縮液分別使用電子秤稱量提取重量.精密量取4 種不同編號的樣品各10 mL 于4 個不同的50 mL 容量瓶中，加入對應(yīng)的溶劑稀釋至刻度.以高效液相色譜儀和pH 計按“2.2.1”項下色譜條件取上述稀釋后的樣品進樣10μL分別檢測4種不同的提取濃縮液含量和pH值，分析其差異情況.結(jié)果表明，改進工藝后的產(chǎn)品相較于原生產(chǎn)工藝的產(chǎn)品中秦皮乙素含量明顯增高，秦皮乙素轉(zhuǎn)化率調(diào)高近30%，結(jié)果見表2.由此表明，使用pH 為5.7 的純化水較pH 為7.3的飲用水提取秦皮藥材中的秦皮乙素效果更佳.

表2 不同批次樣本秦皮乙素含量以及pH的檢測

3.4 制劑樣品穩(wěn)定性考察

分別取生產(chǎn)批號為180101、181001 提取濃縮液加入液體配制罐，邊攪拌邊加入純化水定容至300 L，用NaOH 或HCl 調(diào)節(jié)配制液pH 至5.2，調(diào)整裝量后進行藥液灌裝，用10 kGy 輻照劑量γ射線進行滅菌，包裝成180126、181027（制劑批號）2 批市售樣品.依據(jù)《中華人民共和國藥典》2015 年四部通則9001 原料藥與制劑穩(wěn)定性試驗指導原則.對180126、181027 兩批樣品在溫度25±2℃，相對濕度60%±10%進行穩(wěn)定性考察［10］，對生產(chǎn)后的產(chǎn)品在0，6，12 個月依據(jù)“2.2.1”項下色譜條件進樣10μL檢測產(chǎn)品中秦皮乙素含量以及pH值.結(jié)果如圖2顯示，兩個批次樣品的秦皮乙素含量均隨著時間減少.生產(chǎn)后6 個月時間內(nèi)，工藝改進前后秦皮乙素含量分別下降24%、3.8%；生產(chǎn)后12 個月內(nèi)，工藝改進前后秦皮乙素含量分別下降40.4%、10.8%；二者pH 值（見表3）則基本沒有變化.由此可見，純水提取工藝更加適合秦皮乙素的保存.

表3 產(chǎn)品pH值變化

圖2 不同提取溶媒所對應(yīng)生產(chǎn)制劑藥品穩(wěn)定性

4 討論

采用pH 為7.3 的飲用水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮中的活性成分秦皮乙素兩批的轉(zhuǎn)移率分別為33.97%和34.48%，pH 分別為6.3 和6.4 見表2，在制劑配制過程中需用HCl 調(diào)節(jié)pH 至5.2；采用pH 為5.7 的純化水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮中的活性成分秦皮乙素兩批的轉(zhuǎn)移率分別為66.51%和72.94%，pH 分別為5.0 和5.2.優(yōu)化工藝后采用pH 為5.7 的純化水提取秦皮乙素轉(zhuǎn)移率提高了30%以上，兩批提取濃縮液pH分別為5.0、5.2，制劑配制液pH為5.2，基本不需進行pH 調(diào)節(jié)，簡化了生產(chǎn)工藝.使用180101 和181001 兩批提取濃縮液制備成180126、181027 兩批市售樣品，依據(jù)2015 版藥典四部通則進行0，6，12 個月穩(wěn)定性考察、檢測分析，12 個月數(shù)據(jù)飲用水提取制備樣品含量下降40.4%，純化水提取制備樣品含量下降10.8%，兩批樣品含量下降速率相差29.5%，pH 值在考察期內(nèi)無明顯變化見表3.綜上所述，通過調(diào)整提取溶劑，有助于提高產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性，從而為企業(yè)生產(chǎn)提供重要理論和實踐基礎(chǔ).

以pH 較低的純化水替代pH 較高的飲用水提取婦陰康洗劑處方中的中藥材，秦皮乙素轉(zhuǎn)化率能提高30%以上，用優(yōu)化提取工藝生產(chǎn)的市售樣品在貯存期內(nèi)含量穩(wěn)定性較優(yōu)化前有較大提高.由此可見優(yōu)化后工藝既能提高產(chǎn)品收率，也能保證藥品質(zhì)量穩(wěn)定性.