觀光木果實黃酮類成分的初步鑒定及抗氧化活性分析

羅佳 馬若克 符韻林 韋鵬練

摘?要：為探究觀光木果實純化后黃酮的純度、抗氧化活性以及黃酮類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，本文采用D101大孔樹脂和不同體積分數(shù)的乙醇對觀光木果實的黃酮類化合物進行純化，得到5個洗脫物，分別為水洗脫物、10%洗脫物、30%洗脫物、50%洗脫物和70%洗脫物，研究洗脫物黃酮純度以及對1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和2，2-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸（ABTS）的清除能力，通過傅里葉變換紅外光譜儀（FT-IR）進行初步結(jié)構(gòu)表征，進一步使用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用技術 （Q-EXCTIVE-MS）鑒定純化后洗脫物的組成和結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明，30%洗脫物黃酮純度最高，且DPPH和ABTS的清除能力最強，半抑制質(zhì)量濃度分別為106.95、71.57 mg/L。傅里葉變換紅外光譜儀顯示樣品含有羥基、酚羥基、CO以及甲基等黃酮類特征官能團，對純化后的果實進行UPLC分析，共鑒定出5種黃酮類化合物，分別為4′，5，6，7-四甲氧基黃酮、三葉豆苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、異金雀花素、橘皮素。DPPH和ABTS抗氧化試驗表明純化后的觀光木果實具有較好的抗氧化能力，研究可為觀光木的保護和資源利用提供一定的參考。

關鍵詞：觀光木;黃酮;傅里葉變換紅外光譜儀;抗氧化活性;化學成分

中圖分類號：S792.11?文獻標識碼：A?文章編號：1006-8023（2021）06-0053-09

Abstract：To explore the purity of flavonoids， antioxidant activity and the structure of flavonoids after purification of T. odorum fruit， D101 macroporous resin and different concentrations of ethanol were used to purify the flavonoids of the determined T. odorum fruit， and 5 eluates were obtained， namely， water eluate， 10% eluate， 30% eluate， 50% eluate and 70% eluate， the eluate flavonoid purity and the scavenging ability of 1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl （DPPH） and 2， 2 -azino-bis （3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid） （ABTS） were studied. Preliminary structural characterization was carried out by Fourier infrared spectroscopy （FT-IR）， and the composition and structure of the purified eluate were further identified using ultra performance liquid chromatography mass Spectrometry （Q-EXCTIVE-MS）. The results showed that the 30% eluate had the highest purity of flavonoids and the strongest scavenging ability of DPPH and ABTS. The half-inhibitory concentrations were 106.95 mg/L and 71.57 mg/L， respectively. Fourier infrared spectroscopy showed that the sample contained characteristic functional groups of flavonoids such as hydroxyl， phenolic hydroxyl， CO and methyl. UPLC analysis of the purified fruit revealed a total of 5 flavonoids， 4 ， 5， 6， 7-tetramethoxyflavonoids， trifolin， isorhamnetin-3-O-glucoside， isoscoparin， tangeretin. The antioxidant tests of DPPH and ABTS showed that the purified T. odorum?fruit had good antioxidant capacity， which provided a certain reference for the protection and resource utilization of T. odorum.

Keywords：Tsoongiodendron odorum; flavonoids; Fourier transform infrared spectroscopy; antioxidant activity; chemical constituents

0?引言

觀光木（Tsoongiodendron odorum）又名香花木，是我國珍稀瀕危樹種，主要分布地區(qū)為廣東、廣西、海南、貴州和福建[1]。觀光木樹形優(yōu)美，分枝整齊，花多而美觀，葉和果也具有一定的特色，常用于園林觀賞樹種和行道樹種[2]。其木材紋理通直，材質(zhì)優(yōu)良，易加工，不易開裂，多用于建筑和家具，是較好的用材樹種[3]，樹皮和根皮在民間被用于治療癌癥[4]、木材材性[8]以及群落結(jié)構(gòu)[9-10]等，關于其化學成分和生物活性的研究較少。

黃酮類化合物廣泛存在于植物中，具有較強的抗氧化活性和抗炎活性，還能抑制腫瘤生長。大量研究證明木蘭科植物也具有抗腫瘤活性、抗真菌活性、抗炎活性和抗氧化活性的效果[11-14]，可供藥用。了解觀光木的化學成分對于主動保護觀光木以及開發(fā)利用藥用價值有重要的意義。因此，本研究以觀光木的果實為研究對象，采用D101型大孔樹脂和不同體積分數(shù)的乙醇進行洗脫和純化，并探究不同洗脫物的抗氧化能力，采用傅里葉紅外光譜儀對純化后的洗脫物進行初步結(jié)構(gòu)表征，并進一步利用超高效液相色譜串聯(lián)四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜儀聯(lián)用技術（Q-EXACTIVE-MS）鑒定黃酮類化學成分，為提高觀光木的利用價值以及后續(xù)觀光木果實黃酮類化合物開發(fā)創(chuàng)新和分離提供一定的參考。

1?材料與方法

1.1?材料與試劑

觀光木果實于2019年11月采自廣西壯族自治區(qū)南寧市良鳳江國家森林公園試驗林區(qū)，將果實自然風干，用磨粉機磨碎，過40～60目篩，備用。

1.2?儀器與設備

超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（ Q-EXCTIVE-MS，美國熱電公司）;傅里葉變換紅外光譜儀（IRTracer-100，島津公司）;B電子天平（SA124S-CW，賽多利斯科學儀器有限公司）;粉碎機（DFT-200，溫嶺市林大機械有限公司）;可見紫外分光光度計（SP∶754，上海光譜有限公司）。

1.3?實驗方法

1.3.1?黃酮的提取與純化

采用80%乙醇回流提取3次 ，第1次5倍量提取2 h，第2次4倍量提取2 h，第3次4倍量提取2 h，提取液合并過濾濃縮至無醇味，加水稀釋至提取物的3倍，靜置過夜，400目絨布過濾，濾液上處理好的D101大孔吸附樹脂，樹脂用量為提取物的3倍。徑高比為1∶8，先用蒸餾水沖洗至無色，再分別用2倍柱體積水、10%乙醇、30%乙醇、50%乙醇和70%乙醇進行洗脫，分別收集洗液，真空濃縮干燥即得到不同乙醇洗脫物。

1.3.2?蘆丁標準曲線的繪制

參考王俊青等[15]研究方法。

1.3.3?純化后黃酮化合物純度的計算

取大孔樹脂純化后黃酮粉末各0.050 g 放入10 mL容量瓶中，用70%的乙醇定容，得到質(zhì)量濃度為5 mg/L的黃酮類化合物標準溶液;取適量黃酮溶液加入0.3 mL的5% NaNO2 溶液，搖勻，靜置6 min，再加入0.3mL的10%AlCl3 溶液，搖勻，靜置6 min，最后再加入4 mLNaOH 溶液，用70%乙醇定容至10 mL，搖勻，靜置15 min，在波長為510 nm 處測定上述樣品溶液的吸光度，將所得吸光度帶入建立的回歸方程中，得到純化后黃酮類物質(zhì)的質(zhì)量純度。

1.3.4?DPPH法測定黃酮類物質(zhì)的抗氧化活性

參考何禮等[16]研究方法。取3 mL不同濃度的樣品溶液，加入3 mL的2×10-4mol/L DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼），混合均勻，避光反應30 min，以無水乙醇為空白測吸光度A1;3 mL不同濃度的樣品溶液和3 mL無水乙醇的吸光度為A2; 3 mLDPPH溶液和3 mL無水乙醇的吸光度為A3，在517 nm波長下分別測其吸光度。計算IC50值，即DPPH清除率達到50%時各組分樣品的質(zhì)量濃度。IC50值越小，則表示其DPPH自由基清除能力越強。

1.3.5?ABTS法測定黃酮類物質(zhì)的抗氧化活性

參考王富豪等[17]研究方法。取1 mL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液，加入4 mL ABTS（2，2-聯(lián)氮-雙-3-乙基苯并二氫噻唑啉-6-磺酸）溶液，混合均勻，避光反應15 min，以無水乙醇為空白，吸光度為B1;1 mL不同質(zhì)量濃度的樣品溶液和4 mL無水乙醇的吸光度為B2; 4 mLABTS溶液和1 mL無水乙醇的吸光度為B3，在734 nm波長下分別測其吸光度。計算IC50值，即ABTS清除率達到50%時各組分樣品的質(zhì)量濃度。IC50值越小，則表示其ABTS自由基清除能力越強。

1.3.6?紅外光譜分析

取適量蘆丁和純化后樣品分別與溴化鉀混合后壓片，在500～4 000 cm-1范圍內(nèi)掃描[18]。

1.3.6?超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜鑒定觀光木果實中黃酮類成分

采用Q-EXACTIVE-MS對黃酮化學成分進行鑒定。超高效液相色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLCBEHC18（2.1 mm×50 mm×1.7 μm）。流動相：A為0.1%甲酸水，B為甲醇，柱溫為30 ℃，進樣體積為1 μL，梯度洗脫見表1。

高分辨質(zhì)譜條件：采用ESI 離子源;溫度300 ℃;傳輸毛細管溫度320 ℃;鞘氣206 kPa;輔助氣流速69 kPa;正離子模式下噴霧電壓為3.0 kV;掃描模式為Full MS和Full MS/dd-MS2，質(zhì)量范圍100～1 000 ua，一級掃描和二級掃描分辨率分別為70 000、17 500。

1.4?數(shù)據(jù)處理

每個樣品重復3次實驗，采用IBM SPSS Statistics 19統(tǒng)計分析軟件計算IC50值，采用Origin繪圖。

2?結(jié)果與分析

2.1?觀光木果實總黃酮標準曲線

以蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，擬合曲線，得到蘆丁質(zhì)量濃度和吸光度之間的回歸方程：y=0.009 5x+0.004 1， 相關系數(shù)R2=0.999 7。

2.2?黃酮純度

觀光木果實經(jīng)D101大孔樹脂和不同體積分數(shù)乙醇洗脫后得到5個洗脫物，其黃酮純度見表2。30%洗脫物中黃酮純度最高，水洗脫物黃酮純度最低，初步認為30 %乙醇對觀光木果實的黃酮類物質(zhì)具有較強的富集效果。

2.3?DPPH自由基清除能力

由圖1可知，5個洗脫物對DPPH自由基均具有一定的清除作用，隨著溶液質(zhì)量濃度的增加，DPPH自由基清除能力也呈增加的趨勢。由表2可知，IC50的大小依次為：水洗脫物、70%洗脫物、50%洗脫物、10%洗脫物、30%洗脫物，IC50值越小，表明清除能力越強。其中，30%洗脫物對DPPH自由基清除能力最強，觀光木果實黃酮質(zhì)量濃度為16.67～216.67 mg/L，隨著溶液質(zhì)量濃度的增加，清除DPPH自由基能力加強，當溶液質(zhì)量濃度為183.33 mg/L時清除率達到70.15%。

2.3?ABTS自由基清除能力

由圖2可知，5個洗脫物對ABTS自由基的清除能力隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而增加。10%洗脫物、30%洗脫物、50%洗脫物對ABTS自由基具有較強的清除能力，IC50分別為62.54、71.57、75.29 mg/L（表2），均表現(xiàn)出較強的ABTS自由基清除能力。其中，30%洗脫物對ABTS自由基表現(xiàn)出較強的抗氧化活性，溶液質(zhì)量濃度為25～200 mg/L，隨著溶液質(zhì)量濃度的增加，清除ABTS自由基的能力也增強，當溶液質(zhì)量濃度為200 mg/L時，觀光木果實總黃酮對ABTS自由基的清除能力高達92.10%。

2.4?觀光木果實黃酮類化學成分初步鑒定

2.4.1?紅外光譜分析

紅外光譜通過樣品吸收譜帶的位置、形狀和強度等，來推測官能團的種類[19]。圖3為蘆丁和觀光木果實黃酮類物質(zhì)純化產(chǎn)物的紅外光譜，標準品蘆丁和樣品分別在3 428.3、3 427.5 cm-1出現(xiàn)寬而強的吸收峰，為O—H的伸縮振動，表明有酚羥基的存在[20];蘆丁在2 938.4 cm-1處，樣品在2 927.9 cm-1處均有一個強度較小的吸收峰，為亞甲基的C—H的反對稱伸縮振動峰，說明飽和碳上的氫較少;1 654.1～1 457.8 cm-1為蘆丁標準品的苯環(huán)的骨架震動特征吸收峰分布區(qū)域，樣品在1 656.9 cm-1和1 504.5 cm-1處有吸收峰，表明樣品可能存在苯環(huán);蘆丁樣品在1 500～1 300 cm-1均出現(xiàn)一些特征峰，這屬于O—H的彎曲振動峰;1 300～1 200 cm-1屬于CO的伸縮振動吸收峰，蘆丁和樣品有出現(xiàn)一定的特征峰。依據(jù)以上推斷，初步判斷觀光木果實中的黃酮主要為黃酮醇類，具體的結(jié)構(gòu)需要進一步進行UPLC-MS/MS檢測。

2.4.2?UPLC-MS-MS法鑒定黃酮類物質(zhì)成分

為了探討觀光木果實中具有抗氧化作用的主要化學成分，本文進一步對黃酮純度較高和抗氧化活性較強的30%洗脫物進行了UPLC-MS-MS分析。根據(jù)保留時間、質(zhì)譜圖的碎片斷裂模式、軟件（Compound discoverer 3.1）的對比分析以及參考文獻，推斷出的5種黃酮類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，這些化合物可能是觀光木果實具有較好清除DPPH和ABTS自由基的活性物，結(jié)果見表3。

表3中的幾種化合物的分子結(jié)構(gòu)如圖4所示。

化合物1準分子離子峰[M+H]+m/z 343.172 9，分子式為C19H18O6，二級質(zhì)譜碎片有[M+H-O]+m/z 327.119 7， [M+H-2CH3-CO]+m/z285.111 7，根據(jù)文獻[21]及質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫推斷化合物1可能為4′，5，6，7-四甲氧基黃酮。

化合物2準分子離子峰[M+H]+m/z 449.107 9，推斷分子式為C21H20O11，二級質(zhì)譜碎片離子有[M+H- C6H11O5]+m/z 287.054 6，[M+H- C6H11O5-OH]+m/z 270.075 6，再根據(jù)文獻[22]報道，推斷為三葉豆苷。

化合物3準分子離子峰[M+H]+m/z 479.118 4，推斷分子式為C22H22O12，二級質(zhì)譜特征碎片離子為 [M+H- C6H11O5]+m/z ?317.065 4，通過與mzcloud（賽默飛-未知物鑒定的新型數(shù)據(jù)庫）質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫和參考文獻[23]對比，化合物3被鑒定為異鼠李素-3-O-葡萄糖苷。

化合物4在高分辨質(zhì)譜下的準分子離子峰[M+H]+m/z 463.123 5，推斷分子式為C22H22O11，二級質(zhì)譜特征碎片離子為 [M+H- C6H11O5]+m/z ?301.070 4，結(jié)合文獻報道[24]，推斷為異金雀花素。

化合物5在高分辨質(zhì)譜下的準分子離子峰[M+H]+m/z 373.124 3，推斷分子式為C20H20O7，二級質(zhì)譜碎片離子有 [M+H- CH3]+m/z ?358.1040，[M+H- 2CH3]+m/z ?343.080 8，[M+H-2CH3-O]+m/z ?327.085 8，結(jié)合文獻[25]報道，推斷為橘皮素。

3?結(jié)論

本文利用D101型大孔樹脂和不同體積分數(shù)的乙醇純化觀光木果實的黃酮，得到5個洗脫物，發(fā)現(xiàn)不同洗脫物的黃酮純度和抗氧化活性均存在一定的差異，其中，30%洗脫物的黃酮純度最高，水液洗脫物最低。5個洗脫物DPPH和ABTS的抗氧化活性均隨著溶液質(zhì)量濃度的增加而逐漸增加，30%洗脫物對二者的清除能力最強，最大清除率分別達到70.15%和92.10%，表明觀光木果實總黃酮具有較強的抗氧化活性。通過FT-IR進行了初步的結(jié)構(gòu)表征，觀光木果實提取物以羥基、酚羥基、羧基以及甲基為主。用UPLC-MS/MS進一步推斷了出觀光木果實的黃酮中可能含有4′，5，6，7-四甲氧基黃酮、三葉豆苷、異鼠李素-3-O-葡萄糖苷、異金雀花素、橘皮素。

【參?考?文?獻】

[1]劉曉玲，吳道念，符韻林.溶膠-凝膠法調(diào)控木材表面附著二氧化硅薄膜的研究[J].林產(chǎn)工業(yè)，2016，43（8）：13-17.

LIU X L， WU D N， FU Y L. Research on silicon dioxide film adhered wood surface modified by Sol-gel method[J]. China Forest Products Industry， 2016， 43（8）： 13-17.

[2]劉曉濤，張?zhí)﹦?，李蕓瑛，等.3年生觀光木夏季的光合生理特性初探[J].華南師范大學學報（自然科學版），2017，49（6）：65-70.

LIU X T， ZHANG T J， LI Y Y， et al. Photosynthetic physiological characteristics of 3-year-old Tsoongiodendron odorum seedlings in summer[J]. Journal of South China Normal University （Natural Science Edition）， 2017， 49（6）： 65-70.

[3]潘陸榮，亢亞超，潘虹，等.生物質(zhì)炭對鋁脅迫下觀光木幼苗生長生理特性的影響[J].西南林業(yè)大學學報（自然科學），2021，41（5）：18-26.

PAN L R， KANG Y C， PAN H， et al. Effects of biochar on the growth and physiological characteristics of Tsoongiodendron odorum seedlings under aluminum stress[J]. Journal of Southwest Forestry University （Natural Sciences）， 2021， 41（5）： 18-26.

[4]宋曉凱，吳立軍，屠鵬飛.觀光木樹皮的生物活性成分研究[J].中草藥，2002，33（8）：676-678.

SONG X K， WU L J， TU P F. Studies on bioactive constituents in bark of?Tsoongiodendron odorum[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs， 2002， 33（8）： 676-678.

[5]亢亞超.氮磷鉀配比施肥對觀光木幼苗生長生理及光合特性的影響[D].南寧：廣西大學，2020.

KANG Y C. Effects of different NPK ratio fertilization on growth， physiology and photosynthetic characteristics of Tsoongiodendron odorum seedlings[D]. Nanning： Guangxi University， 2020.

[6]張應明，吳林芳，欒福臣，等.高光照強度下不同時間觀光木光合生理特征對比[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2019，47（14）：116-117.

ZHANG Y M， WU L F， LUAN F C， et al. Comparison of photosynthetic physiological characteristics of Tsoongiodendron odorum at different time under high light intensity[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences， 2019， 47（14）： 116-117.

[7]林寧，謝安德，王凌暉，等.低溫脅迫對觀光木幼苗離體葉片生理特性的影響[J].湖北農(nóng)業(yè)科學，2012，51（16）：3524-3527.

LIN N， XIE A D， WANG L H， et al. Effects of low-temperature stress on physiological characteristics of in vitro Tsoongiodendron odorum seedlings leaves[J]. Hubei Agricultural Sciences， 2012， 51（16）： 3524-3527.

[8]符韻林，邱炳發(fā)，韋鵬練，等.觀光木木材干燥特性研究[J].浙江農(nóng)林大學學報，2011，28（5）：767-770.

FU Y L， QIU B F， WEI P L， et al. Drying characteristics of Tsoongiodendron odorum wood[J]. Journal of Zhejiang A & F University， 2011， 28（5）： 767-770.

[9]許秀平，鄧元德，嚴銘海.福建梁野山自然保護區(qū)觀光木群落特征研究[J].長江大學學報（自然科學版），2019，16（11）：69-74.

XU X P， DENG Y D， YAN M H. Characteristics of Michelia odora forest community in Liangyeshan national nature reserve in Fujian Province[J]. Journal of Yangtze University （Natural Science Edition）， 2019， 16（11）： 69-74.

[10]張信堅，邱建勛，胡瑋珊，等.江西信豐細逕坑自然保護區(qū)觀光木群落研究[J].亞熱帶植物科學，2016，45（4）：343-350.

ZHANG X J， QIU J X， HU W S， et al. Tsoongiodendron odorum community in Xijingkeng nature reserve from Xinfeng， Jiangxi Province[J]. Subtropical Plant Science， 2016， 45（4）： 343-350.

[11]鄭燕菲.瀕危植物單性木蘭的有效成分及其生物活性研究[D].南寧：廣西大學，2016.

ZHENG Y F. Study on effective component and bioactivity of Magnolia kwangsiensis figlar & noot[D]. Nanning： Guangxi University， 2016.

[12]宋曉凱.觀光木化學成分及抗癌活性的研究[D].沈陽：沈陽藥科大學，2001.

SONG X K. Studies on the chemical constituents and bioactivities of Tsoongiodendron odorum Chun[J]. Shenyang： Shenyang Pharmaceutical University， 2001.

[13]郭磊，高然，田野，等.樺褶孔菌不同溶劑萃取物抗氧化活性研究[J].西部林業(yè)科學，2020，49（2）：17-23.

GUO L， GAO R， TIAN Y， et al. Evaluation of the antioxidant properties of various solvent extracts from Lenzites betulina[J]. Journal of West China Forestry Science， 2020， 49（2）： 17-23.

[14]耿文慧，盧紹基，明艷林.鐵皮石斛化學成分及其抗氧化活性研究[J].亞熱帶植物科學，2020，49（6）：438-442.

GENG W H， LU S J， MING Y L. The chemical constituents and antioxidant activities of Dendrobium officinale[J]. Subtropical Plant Science， 2020， 49（6）： 438-442.

[15]王俊青，汪全，焦陽陽，等.響應面法優(yōu)化南方紅豆杉葉總黃酮提取工藝研究[J].食品研究與開發(fā)，2019，40（2）：86-90.

WANG J Q， WANG Q， JIAO Y Y， et al. Study on optimization of extraction process of total flavonoids leaves from Taxus chinensis（pilger） rehd. by response surface methodology[J]. Food Research and Development， 2019， 40（2）： 86-90.

[16]何禮，陳克玲，何建，等.低溫貯藏下塔羅科血橙抗氧化性能研究[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2015，28（6）：2666-2671.

HE L， CHEN K L， HE J， et al. Antioxidant properties of blood orange tarocco during cold temperature storage[J]. Southwest China Journal of Agricultural Sciences， 2015， 28（6）： 2666-2671.

[17]王富豪，黃璐，薛晨晨，等.不同品種大豆異黃酮組分及體外抗氧化活性分析[J].食品工業(yè)科技，2021，42（17）：247-255.

WANG F H， HUANG L， XUE C C， et al. Analysis on the isoflavone profile and antioxidant activity in vitro of different soybean varieties[J]. Science and Technology of Food Industry， 2021， 42（17）： 247-255.

[18]張曉南，普楠，張瀟元，等.大豆異黃酮納米粉體的反溶劑法制備及表征[J].中國食品學報，2019，19（9）：103-108.

ZHANG X N， PU N， ZHANG X Y， et al. Preparation and characterization of soy isoflavone nanoparticles by antisolvent precipitation method[J]. Journal of Chinese Institute of Food Science and Technology， 2019， 19（9）： 103-108.

[19]范艷麗，韓麗娜，孟雪梅，等.枸杞葉黃酮提取物的組成及初步結(jié)構(gòu)表征[J].食品工業(yè)科技，2017，38（14）：46-50.

FAN Y L， HAN L N， MENG X M， et al. Composition analysis and preliminary structural characterization of the flavonoids from Lycium barbarum leaves[J]. Science and Technology of Food Industry， 2017， 38（14）： 46-50.

[20]陳瑾，陳晶華，劉利平，等.枸杞葉黃酮提取物的純化及組成結(jié)構(gòu)分析[J].食品工業(yè)科技，2019，40（18）：28-34.

CHEN J， CHEN J H， LIU L P， et al. Purification and structural analysis of flavonoids from Lycium barbarum leaves[J]. Science and Technology of Food Industry， 2019， 40（18）： 28-34.

[21]XING T T， ZHAO X J， ZHANG Y D， et al. Fast separation and sensitive quantitation of polymethoxylated flavonoids in the peels of Citrus using UPLC-Q-TOF-MS[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry， 2017， 65（12）： 2615-2627.

[22]郭群，萬軍梅.液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法分析喜樹果中苷類化學成分[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2012，8（1）：26-29.

GUO Q， WAN J M. Analysis of glycosides in the fruits of Camptotheca acuminata by hplc-esi-（ms）n[J]. Asia-Pacific Traditional Medicine， 2012， 8（1）： 26-29.

[23]鄭文惠，白海英，王麗瑤，等.UPLC-QTOF-MS法分析沙棘果實、葉和枝的成分[J].中成藥，2020，42（11）：2940-2947.

ZHENG W H， BAI H Y， WANG L Y， et al. Analysis of constituents in the fruit， leaf and twig of Hippophae rhamnoides by UPLC-QTOF-MS[J]. Chinese Traditional Patent Medicine， 2020， 42（11）： 2940-2947.

[24]付林，古銳，張彩虹，等.藏藥大花龍膽正丁醇部位的化學成分研究[J].中草藥，2018，49（5）：1002-1006.

FU L， GU R， ZHANG C H， et al. Chemical constituents of n-butanol fraction from Tibetan medicine Gentianae szechenyi spray[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs， 2018， 49（5）：1002-1006.

[25]ZHENG Y Y， ZENG X， PENG W， et al. Characterisation and classification of Citri reticulatae Pericarpium varieties based on UHPLC-Q-TOF-MS/MS combined with multivariate statistical analyses[J]. Phytochemical Analysis， 2019， 30（3）： 278-291.