厭食康顆粒薄層色譜鑒別方法改進(jìn)研究

劉永逸,楊 婧,符傳武,覃華亮,洪 薇,覃子龍

(柳州市質(zhì)量檢驗檢測研究中心,廣西 柳州545006)

厭食康顆粒為常用甲類非處方中成藥,具有健脾、開胃、消食等功效,用于治療脾胃氣虛所致的小兒厭食癥[1]。厭食康顆粒由廣山楂、小槐花、白術(shù)、茯苓、麥芽、陳皮6味中藥組成,其中小槐花為主要處方藥味之一。小槐花為豆科植物小槐花Desmodium caudatum(Thunb.)DC.的干燥全株,分布于長江以南各省,全年可采,全株入藥,主要用于感冒發(fā)熱、小兒疳積、脘腹疼痛、疹出不透等病癥的治療[2-4],其含有苦參堿、山柰酚、豆甾醇、檸檬酚、樺木醇、槐果堿等化學(xué)成分[5-8],其醇提物和水提取物具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜催眠、抗氧化等方面的藥理作用[9-10]。

厭食康顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]小槐花薄層色譜鑒別方法存在有樣品前處理乳化現(xiàn)象嚴(yán)重,指標(biāo)成分斑點不穩(wěn)定,重現(xiàn)性差等問題。除此之外,其樣品及對照藥材前處理及展開劑中使用的三氯甲烷試劑,易分解而生成劇毒的光氣(碳酰氯)[11],不僅對檢測人員的身體健康構(gòu)成較大威脅,也不符合當(dāng)前綠色環(huán)保的檢驗理念。謝東等[12]在研究厭食康顆粒的質(zhì)量控制所用的提取溶液及展開劑中同樣也含有三氯甲烷。基于現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)方法的不足,作者進(jìn)行深入研究,建立了可用于厭食康顆粒質(zhì)量控制的新的薄層色譜鑒別方法。

1 儀器與試藥

ATS4薄層自動點樣儀(瑞士CAMAG公司);TLC Visualizer薄層色譜數(shù)碼成像系統(tǒng)(瑞士CAMAG公司);SK8200HP超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);AE200電子分析天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司);雙槽展開缸(上海信宜儀器廠)。

小槐花(餓螞蝗)對照藥材(購自中國食品藥品檢定研究院,批號為0954-200204);硅膠G板(青島海洋化工有限公司,規(guī)格為20 cm×20 cm);水為純化水;三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇、氨水等其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

厭食康顆粒(規(guī)格:每袋裝7 g,批號:607003;608012;609002);缺小槐花陰性樣品;小槐花(Desmodiumcaudatum(Thunb.)DC.)藥材及其莖和葉,均由廣西純正堂制藥廠提供,其中小槐花藥材經(jīng)柳州市食品藥品檢驗所李玲主任中藥師鑒定為正品。

2 方法與結(jié)果

2.1 現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法

取本品內(nèi)容物14 g,研細(xì),加水30 m L使溶解,濾過,濾液用氨試液調(diào)p H至9,加三氯甲烷提取2次,每次15 m L,合并三氯甲烷液,蒸干,殘渣加甲醇1 m L使溶解,作為供試品溶液。另取小槐花對照藥材4g,分別加水煎煮30 min,濾過,濾液濃縮至30 m L,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(2010年版《中國藥典》一部附錄VI B)試驗,吸取上述兩種溶液各10μL分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-丙酮-二乙胺(6∶4∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化秘鉀試液。觀察供品色譜,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,未顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較淺。薄層色譜如圖1所示(本次實驗同時取缺小槐花陰性樣品14g,小槐花藥材的葉4 g,小槐花藥材的莖4g,小槐花藥材4g,小槐花對照藥材4g,同法分別制成相應(yīng)的試驗溶液,各吸取10μL分別點于上述同一硅膠G薄層板上;T:23℃;RH:59%;展距13 cm)。

圖1 厭食康顆粒的薄層色譜(現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)方法)

2.2 改進(jìn)的方法

取本品內(nèi)容物28 g,研細(xì),置于裝有二氯甲烷60 m L及2m L氨水的具塞三角瓶中,超聲10 min,傾倒出提取液,濾過,向具塞三角瓶再次加入二氯甲烷60m L及2m L氨水,超聲10 min,濾過,合并提取液,蒸干,殘渣加甲醇1 m L使溶解,作為供試品溶液。另取小槐花對照藥材2 g,分別加水煎煮30min,濾過,濾液蒸干,同法制成對照藥材溶液。按照薄層色譜法(2015年版《中國藥典》四部通則0502)試驗,吸取上述兩種溶液各20μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以二氯甲烷-甲醇-氨水(20∶2∶0.5)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以稀碘化秘鉀試液。觀察供試品色譜,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也明顯比標(biāo)準(zhǔn)方法深。薄層色譜如圖2所示(本次實驗同時取缺小槐花陰性樣品28 g,小槐花藥材的葉2 g,小槐花藥材的莖2g,小槐花藥材2 g,同法分別制成相應(yīng)的試驗溶液,各吸取20μL分別點于上述同一硅膠G薄層板上;T:23℃;RH:59%;展距10 cm)。

圖2 氣厭食康顆粒的薄層色譜(改進(jìn)的方法)

3 討論

3.1 現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不足

本研究曾多次采用現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)測定同一批樣品,發(fā)現(xiàn)樣品斑點不穩(wěn)定,時有時無,重現(xiàn)性較差,為了保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠,厭食康顆粒現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下小槐花的薄層色譜鑒別方法急需改進(jìn)。

3.2 前處理方法的確立

本研究前處理方法采用超聲提取法替換了現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的萃取法,較好地解決了現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)處理樣品時發(fā)生乳化的現(xiàn)象,且從圖1及圖2中可見,采用超聲提取法處理樣品和對照藥材時,在供品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較深,而采用萃取法處理樣品和對照藥材時,在供品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,未顯相同顏色的斑點,且對照藥材色譜上的斑點顏色也較淺。可見,改進(jìn)后的前處理方法明顯優(yōu)于現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的方法。

3.3 溫濕度對測定結(jié)果的影響

本研究分別考察了薄層板展開過程中溫度和相對濕度對結(jié)果的影響。結(jié)果表明:溫度對指標(biāo)成分斑點幾乎無影響;但當(dāng)相對濕度大于90%時,會影響指標(biāo)成分斑點的顯現(xiàn)。

3.4 展開系統(tǒng)的選擇

本研究考察了正丁醇-冰醋酸-水、三氯甲烷-丙酮-濃氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-濃氨4種展開劑系統(tǒng)。結(jié)果顯示:正丁醇-冰醋酸-水的展開效果較差,且展開時間較長;三氯甲烷-丙酮-濃氨、三氯甲烷-丙酮-二乙氨、二氯甲烷-甲醇-濃氨經(jīng)調(diào)整展開劑的配比,均能獲得較好的展開效果,但考慮三氯甲烷性質(zhì)不穩(wěn)定,易分解生成劇毒的光氣,對檢驗人員身體健康構(gòu)成威脅,此外,還考慮到三氯甲烷和丙酮是易制毒試劑[13-14],購買及保管都有比較嚴(yán)格的規(guī)定,為了今后使用方便,改進(jìn)方法選用甲烷-甲醇-濃氨展開劑系統(tǒng)。

3.5 其他建議

經(jīng)實驗表明,指標(biāo)斑點的成分只存在于小槐花的莖中,葉中未含有或其含量極低,建議廠家在確保足額投料的同時,還應(yīng)重點關(guān)注所投小槐花藥材的莖葉比并及時對厭食康顆?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)項下小槐花的薄層色譜鑒別方法進(jìn)行修訂,以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠。