連花清瘟制劑化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展

成 蕾，劉 洪，王婷婷，吳新玉，鄧 艷，李 煉，徐永壽，葉林虎,3*

(1.畢節(jié)市第一人民醫(yī)院，貴州 畢節(jié) 551700；2.貴陽市第四人民醫(yī)院，貴州 貴陽 550000；3.遵義醫(yī)科大學(xué)，貴州 遵義 563000)

連花清瘟制劑是以中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)研制的現(xiàn)代中藥復(fù)方制劑，由魚腥草、廣藿香、大黃、紅景天、連翹、石膏、板藍(lán)根、甘草、綿馬貫眾、炙麻黃、炒苦杏仁、薄荷腦、金銀花提取加工而成，功能主治清瘟解毒、宣肺泄熱，用于治療流行性感冒屬熱毒襲肺證，證見發(fā)熱或高熱，惡寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，頭痛，咽干咽痛，舌偏紅，苔黃或黃膩[1]，目前相關(guān)臨床劑型有片劑、膠囊、顆粒，主要用于治療流行性感冒、新型冠狀病毒肺炎、手足口病等[2-5]。近年來，國內(nèi)學(xué)者陸續(xù)開展了連花清瘟制劑化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用的研究，尤其是在新型冠狀病毒肺炎發(fā)生后，其抗病毒作用更是受到廣泛關(guān)注，但至今鮮有全面綜述報(bào)道[6-7]。因此，本文對(duì)連花清瘟制劑化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用的研究進(jìn)展進(jìn)行梳理，以期為其深入研究開發(fā)和臨床合理應(yīng)用提供依據(jù)。

1 化學(xué)成分

1.1 環(huán)烯醚萜 連花清瘟制劑中環(huán)烯醚萜的結(jié)構(gòu)主要分為環(huán)烯醚萜苷、裂環(huán)環(huán)烯醚萜[8-11]，包括五?；ㄜ账?(adoxosidic acid,1)、馬錢酸 (loganic acid,2)、馬錢苷 (loganin,3)、開聯(lián)番木鱉苷二甲基乙縮醛 (secologain dimethyl acetal,4)、連花萜苷A (lianhua iridoid A,5)、莫諾苷 (morroniside,6)、當(dāng)藥苷 (sweroside,7)、斷氧化馬錢子苷 (secoxyloganin,8)、vogeloside (9)、epi-vogeloside (10)等，見圖1。

圖1 連花清瘟制劑中環(huán)烯醚萜結(jié)構(gòu)

1.2 木脂素 從連花清瘟制劑中鑒定出8個(gè)木脂素[9-12]，結(jié)構(gòu)包括雙環(huán)氧木脂素、雙四氫呋喃，其中前者主要包括連翹苷(phillyrin,11)，后者主要包括為松脂醇 (pinoresinol,12)、松脂素單甲醚 (pinoresinol monomethyl ether,13)、(+)-松脂素[(+)-pinoresinol,14]、表松脂醇 (epi-pinoresinol,15)、表松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷 (epipinoresinol-4′-O-β-D-glucoside,16)、鵝掌楸苷 (liriodendrin,17)、羅漢松脂素-4′-O-β-D-葡萄糖苷 (matairesinol-4′-O-β-D-glucoside,18)等，見圖2。

圖2 連花清瘟制劑中木脂素結(jié)構(gòu)

1.3 黃酮 黃酮連花清瘟制劑中一類重要的化合物[8,10-11]，主要包括山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷 (kaempferol-3-O-α-L-rhamnoside,19)、槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷 (quercetin-3-O-α-L-rhamnoside,20)、山柰酚 (kaempferol,21)、槲皮苷 (quercitrin,22)、刺芒柄花素 (formononetin,23)、柚皮素 (naringenin,24)、芹糖甘草苷 (liquiritin apioside,25)[6]、異甘草素 (isoliquiritigenin,26)[8]，見圖3。

圖3 連花清瘟制劑中黃酮結(jié)構(gòu)

1.4 蒽醌 連花清瘟制劑中含有多種蒽醌[9-11,13]，分別為大黃酸 (rhein,27)、ω-羥基大黃素 (citreorosein,28)[8]、蘆薈大黃素 (aloe-emodin,29)、大黃素甲醚 (physcion,30)、大黃素 (emodin,31)、大黃酚 (chrysophanol,32)、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (emodin-8-O-β-D-glucopyranoside,33)、大黃酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(chrysophanol-8-O-β-D-glucopyranoside,34)、大黃酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (chrysophanol-1-O-β-D-glucopyranoside,35)、蘆薈大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(aloe emodin-8-O-β-D-glucoside,36)、大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 (physcion-8-O-β-D-glucopyranoside,37)等，見圖4。

圖4 連花清瘟制劑中蒽醌結(jié)構(gòu)

1.5 苯乙醇苷 苯乙醇苷是連花清瘟制劑中一類重要的化合物[12]，主要包括calceolarioside C (38)、lianqiaoxinoside C (39)、1ugrandoside (40)、連翹酯苷A (forsythoside A,41)、連翹酯苷I (forsythoside I,42)、連翹酯苷H (forsythoside H,43)、連翹酯苷E (forsythoside E,44)、ferruginoside B (45)、isolugrandoside (46)、ferruginoside A (47)、cornoside (48)，見圖5。

圖5 連花清瘟制劑中苯乙醇苷結(jié)構(gòu)

1.6 氰苷 目前，從連花清瘟制劑中鑒定出3種氰苷[12]，分別為D-苦杏仁苷 (D-amygdaloside,49)、L-苦杏仁苷 (L-amygdaloside,50)、sambunigrin (51)，見圖6。

圖6 連花清瘟制劑中氰苷結(jié)構(gòu)

1.7 酚酸 目前，從連花清瘟制劑中只鑒定出4種酚酸[10,12]，分別為沒食子酸 (gallic acid,52)、苯甲酸 (benzoic acid,53)、3,4-二羥基苯甲醛 (3,4-dihydroxy benzaldehyde,54)，反式對(duì)羥基肉桂酸乙酯[(E)-ethyl 3-(4-hydroxyphenyl)acrylate,55]，見圖7。

圖7 連花清瘟制劑中酚酸結(jié)構(gòu)

1.8 生物堿 目前，從連花清瘟制劑中只鑒定出2種生物堿[11]，分別為cepharanone B (56)、胡椒內(nèi)酰胺A (piperolactam A,57)，見圖8。

圖8 連花清瘟制劑中生物堿結(jié)構(gòu)

1.9 其他成分 此外，還在連花清瘟制劑中鑒定出咖啡酸乙酯(caffeic acid ethylester,58)[8]、4-hydroxy-4-methylenecarbomethoxy-cyclohexa-2,5-dienone (59)[12]、β-谷甾醇 (β-sitosterol,60)[10]等，見圖9。

圖9 連花清瘟制劑中其他化合物結(jié)構(gòu)

2 藥理作用

2.1 抗病毒 連花清瘟膠囊對(duì)流感病毒、呼吸道合胞病毒、SARS-CoV病毒都有一定抑制作用，連花清瘟顆粒對(duì)體外嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒(SARS-CoV)、中東呼吸綜合征冠狀病毒 (MERS-CoV)也呈現(xiàn)出抑制活性，并被《中東呼吸綜合征病例診療方案 (2015年版)》納為治療藥物[14]。

2.1.1 流感病毒 研究表明，連花清瘟在體外能抑制流感病毒的增殖及病毒誘導(dǎo)的NF-κB活化，下調(diào)病毒誘導(dǎo)的IL-6、IL-8、TNF-α、IP-10、MCP-1表達(dá)，臨床上可用于對(duì)抗常規(guī)季節(jié)性流感病毒[15]。文獻(xiàn)[16]報(bào)道，連花清瘟的抗流感病毒作用與其活性成分抑制流感病毒的蛋白酶有關(guān)。

2.1.2 呼吸道合胞病毒 丁月文等[17]建立BALB/c小鼠呼吸道合胞病毒 (RSV)感染模型，觀察小鼠肺內(nèi)病毒滴度、肺內(nèi)炎癥因子mRNA表達(dá)、肺組織病理變化，發(fā)現(xiàn)連花清瘟顆粒可有效抑制小鼠肺內(nèi)RSV感染，改善小鼠病毒性肺炎，其作用機(jī)制與降低肺內(nèi)炎癥因子白細(xì)胞介素IL-6、IL-1β mRNA表達(dá)有關(guān)。

2.1.3 SARS-CoV病毒 朱舜亞等[18]通過體外病毒株培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊對(duì)SARS-CoV病毒有一定的抑制作用。Li等[19]發(fā)現(xiàn)，連花清瘟可通過抑制病毒復(fù)制，引起病毒顆粒形體改變，抑制宿主細(xì)胞炎癥因子表達(dá)，從而發(fā)揮抗SARS-CoV-2病毒的作用。陳爽等[20]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，連花清瘟制劑中的連翹和金銀花是治療COVID-19的關(guān)鍵藥物，可通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵靶點(diǎn)、調(diào)控炎癥反應(yīng)、調(diào)控細(xì)胞凋亡、介導(dǎo)免疫反應(yīng)等過程抑制病毒復(fù)制，引起病毒顆粒形體改變及抑制宿主細(xì)胞炎癥因子表達(dá)，從而發(fā)揮抗SARS-CoV-2病毒的作用，最終減輕肺損傷來緩解COVID-19。Chen等[21]采用ACE2生物色譜法，對(duì)連花清瘟中具有潛在ACE2靶向能力的成分進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)估，發(fā)現(xiàn)方中大黃酸、連翹酯苷A、連翹酯苷I、新綠原酸及其異構(gòu)體對(duì)ACE2具有較高的抑制作用，并可通過影響ACE2與S蛋白之間的結(jié)合來對(duì)SARS-CoV-2起到抑制作用，從而緩解COVID-19癥狀。馬穎等[22]報(bào)道，連花清瘟膠囊可影響ACE2表達(dá)來阻斷SARS-CoV-2入侵，并通過抑制炎癥、減輕肺損傷來治療COVID-19。Zhang等[23]采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)對(duì)連花清瘟制劑中活性成分、宿主靶標(biāo)、SARS-CoV-2靶標(biāo)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)方中槲皮素、漢黃芩素、山奈酚等黃酮與SARS-CoV-2 3-CL pro結(jié)合后可抑制SARS-CoV-2，進(jìn)而緩解COVID-19癥狀。王旭杰等[24]通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接的方法對(duì)連花清瘟膠囊中各成分及其入血物質(zhì)所對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)大黃素、蘆薈大黃素、山奈酚、蘆丁等可能通過調(diào)節(jié)IL-6、IL1-0、TNF、CCL2、MAPK14等來改善COVID-19患者的相關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)。研究表明，連花清瘟制劑能減少SARS-CoV-2宿主細(xì)胞胞膜和胞漿中病毒含量及宿主細(xì)胞炎癥因子的過度激活，從而發(fā)揮抗SARS-CoV病毒的作用[25]。Liu等[26]通過Meta分析發(fā)現(xiàn)，連花清瘟制劑能通過抑制SARS-CoV-2病毒繁殖和調(diào)節(jié)免疫功能來減輕COVID-19癥狀。

2.2 抗炎作用 崔雯雯等[27-28]采用脂多糖(LPS)誘發(fā)小鼠急性肺損傷(ALI)模型，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊可減輕肺超微結(jié)構(gòu)損傷，發(fā)揮對(duì)肺組織的保護(hù)作用，其機(jī)制與該制劑增加肺內(nèi)連接蛋白表達(dá)、抑制炎癥細(xì)胞聚集、降低多種炎癥因子水平、抑制NF-κB信號(hào)通路激活有關(guān)。許寧等[29]采用細(xì)顆粒物(PM2.5)致大鼠肺部炎性損傷模型，發(fā)現(xiàn)連花清瘟制劑可通過降低支氣管肺泡灌洗液及血清中TNF-α、IL-6、IL-1、TNF-α水平來發(fā)揮保護(hù)作用，并呈劑量依賴性。夏敬文等[30]利用香煙熏吸法建立大鼠慢性阻塞性肺病(COPD)模型，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊能通過顯著降低血清、肺組織及支氣管肺泡灌洗液中IL-8、TNF-α水平來發(fā)揮抗COPD氣道炎癥的作用。唐思文等[31]報(bào)道，連花清瘟膠囊能改善汽車尾氣造成的肺組織病理損傷，其作用機(jī)制可能與降低血液里炎性因子水平，降低肺部炎性因子的蛋白和mRNA表達(dá)有關(guān)。陳之力等[32]將自體血凝塊反復(fù)注入主肺動(dòng)脈建立急性肺栓塞(APE)家兔模型，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊能通過顯著降低肌鈣蛋白(cTnI)、NT-N端前腦鈉肽(NT-proBNP)、TNF-α、IL-6、IL-1β水平來減少機(jī)體炎癥水平。

2.3 抗菌作用 雷洪濤等[33-34]采用微量稀釋法發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊可抑制金黃色葡萄球菌生物膜的形成。史利克等[35]報(bào)道，連花清瘟制劑能降低美羅培南的最小抑菌濃度(MIC)，提高耐碳青霉烯類鮑氏不動(dòng)桿菌 (CR-AB)對(duì)美羅培南的敏感性，兩者聯(lián)用具有協(xié)同作用，其作用機(jī)制可能破壞鮑氏不動(dòng)桿菌細(xì)胞膜后，美羅培南再進(jìn)入其細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。王藝竹等[36]研究表明，連花清瘟膠囊水提物不但可抑制耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)生物膜形成，破壞成熟膜，還能顯著減少生物膜中活菌和死菌數(shù)量。

2.4 抗腫瘤作用 文翔昊等[37]通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊具有抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡的作用。

3 臨床應(yīng)用

3.1 肺部疾病

3.1.1 COVID-19 余平等[38]報(bào)道，連花清瘟顆粒聯(lián)合阿比多爾能下調(diào)COVID-19患者的C反應(yīng)蛋白和降鈣素原表達(dá)，有效緩解臨床癥狀，降低臨床轉(zhuǎn)重癥率，提高療效。Liu等[39]發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊聯(lián)合阿比多爾可以更有效地改善COVID-19患者癥狀，加速SARS-CoV-2清除。姚開濤等[40]通過回顧性研究表明，連花清瘟顆粒能明顯改善COVID-19患者發(fā)熱、咳嗽、咳痰、氣促癥狀。柳麗麗等[41]研究連花清瘟膠囊治療COVID-19的療效及安全性的過程中，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊聯(lián)合阿比多爾治療COVID-19時(shí)患者耐受性良好，能縮短患者住院時(shí)間及治療時(shí)間。Hu等[42]采用多中心、前瞻性、隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)連花清瘟膠囊可顯著改善COVID-19患者的臨床癥狀，而且未報(bào)告嚴(yán)重不良事件。此外，多項(xiàng)臨床療效、網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與系統(tǒng)評(píng)價(jià)研究也表明，連花清瘟治療COVID-19具有較好的臨床療效[43-46]。

3.1.2 社區(qū)獲得性肺炎 胡小清等[47]報(bào)道，連花清瘟膠囊聯(lián)合注射用頭孢呋辛鈉時(shí)可顯著降低社區(qū)獲得性肺炎患者TNF-α、超敏C反應(yīng)蛋白、降鈣素原等血清標(biāo)志物水平，有效緩解臨床癥狀，不良反應(yīng)少。周珍等[48]通過Meta分析發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊輔助治療社區(qū)獲得性肺炎效果良好，可縮短癥狀緩解時(shí)間、影像轉(zhuǎn)歸時(shí)間，不良反應(yīng)少。

3.1.3 上呼吸道感染伴肺炎 趙明敬等[49]觀察連花清瘟膠囊在1 000例外感風(fēng)熱急性上呼吸道感染患者中的療效及不良反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)該制劑療效顯著，安全性較好。王衛(wèi)紅[50]報(bào)道，連花清瘟膠囊對(duì)上呼吸道感染所致肺炎療效顯著，在改善發(fā)熱、咳嗽等癥狀和控制肺部感染方面具有良好的效果。張捷等[51]通過Meta分析也表明,連花清瘟膠囊治療上呼吸道感染的臨床效果顯著，安全性較好。

3.1.4 小兒肺炎支原體肺炎 陳列強(qiáng)等[52]報(bào)道，連花清瘟顆?？煽焖倬徑庑悍窝字гw肺炎患兒臨床癥狀，降低血清炎癥因子水平，而且較為安全。吳麗引等[53]通過Meta分析發(fā)現(xiàn)，連花清瘟制劑聯(lián)合西藥治療小兒肺炎支原體肺炎較用西藥有一定的優(yōu)勢(shì)。

3.2 急性化膿性扁桃體炎 陳雷[54]發(fā)現(xiàn)，連花清瘟膠囊可改善急性化膿性扁桃體炎患者病情，促進(jìn)體溫恢復(fù)。

3.3 小兒皰疹性咽峽炎 張凌云[55]報(bào)道，連花清瘟顆粒聯(lián)合抗病毒西藥治療小兒皰疹性咽峽炎療效顯著，安全性較好。原全利[56]通過臨床觀察研究也表明，連花清瘟顆粒在治療皰疹性咽峽炎方面療效確切。

3.4 手足口病 盛雄等[57]通過臨床隨機(jī)分組觀察連花清瘟顆粒治療369例手足口病的臨床療效，發(fā)現(xiàn)該制劑可緩解癥狀，縮短病程，療效確切。何煒等[58]通過臨床隨機(jī)分組觀察蓮花清瘟顆粒治療EV71手足口病療效，發(fā)現(xiàn)該制劑在體溫持續(xù)時(shí)間、進(jìn)食改善時(shí)間、皮疹結(jié)痂時(shí)間方面均明顯優(yōu)于對(duì)照，療效顯著。莫慶儀等[59]報(bào)道，連花清瘟顆粒聯(lián)合單磷酸阿糖腺苷后兒童手足口病患兒血清TNF-α、IL-6、C反應(yīng)蛋白水平顯著降低，表明該制劑可減輕機(jī)體炎癥反應(yīng)，迅速緩解相關(guān)癥狀體征，療效確切。

4 不良反應(yīng)

4.1 胃腸道 施麗霞等[60]報(bào)道，連花清瘟制劑主要不良反應(yīng)表現(xiàn)為腹瀉、腹痛、惡心、嘔吐、上腹部不適、腹脹等，與方中連翹、金銀花、石膏、板藍(lán)根、綿馬貫眾、魚腥草、大黃等寒涼藥材有關(guān)[61]，它們?nèi)菀讚p傷脾胃，如果空腹服用則對(duì)胃腸道刺激更明顯，嚴(yán)重時(shí)會(huì)引起胃痛、胃寒、食欲不振等，幼兒脾胃功能尚未健全，更容易發(fā)生上述不良反應(yīng)[62]。因此，為了降低胃腸道反應(yīng)，建議臨床使用連花清瘟制劑時(shí)最好在餐后服用。

4.2 其他 除了胃腸道不良反應(yīng)外，還有少量關(guān)于連花清瘟膠囊致皮疹和過敏性蕁麻疹、瘙癢、神經(jīng)系統(tǒng)損害等報(bào)道[60-61,63]，但其過敏原因尚不明確。

5 質(zhì)量控制

目前，《中國藥典》僅以連翹苷為連花清瘟制劑質(zhì)量控制指標(biāo)，尚未涉及其他成分的定量測(cè)定和限量標(biāo)準(zhǔn)。李洪斌等[64]采用RP-HPLC法測(cè)定連花清瘟膠囊中鹽酸麻黃堿含量，發(fā)現(xiàn)該方法準(zhǔn)確穩(wěn)定，重復(fù)性好，可用于該制劑質(zhì)量控制。許紅輝等[65]通過TLC法對(duì)連花清瘟制劑中大黃、金銀花、薄荷腦、甘草、麻黃進(jìn)行定性鑒別，并采用HPLC法測(cè)定連翹苷含量。陳蕾等[66]通過HPLC法測(cè)定連花清瘟膠囊中苦杏仁苷含量，為該制劑質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。陳靜嫻等[13]通過分散固相萃取-HPLC法聯(lián)用技術(shù)，建立測(cè)定金銀花及連花清瘟膠囊中環(huán)烯醚萜苷類成分的提取和分析方法，可為中藥及其復(fù)方制劑復(fù)雜基質(zhì)中成分的提取、純化、分析和質(zhì)量控制研究提供新思路。蘇愛國等[67]通過HPLC法建立連花清瘟膠囊多成分含量測(cè)定和指紋圖譜分析方法,可為該制劑質(zhì)量控制提供更可靠的評(píng)價(jià)依據(jù)。

6 展望

近年來，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)連花清瘟制劑化學(xué)成分、藥理作用、臨床應(yīng)用進(jìn)行了大量研究，雖然目前從中鑒定了60種成分，但仍有許多種類不明確，并且在藥理作用及機(jī)制、臨床聯(lián)合用藥(尤其是藥物相互作用)方面有待于進(jìn)一步考察。此外，還應(yīng)開展連花清瘟制劑中多種藥材和成分分析方法的研究，對(duì)建立、完善、提高其質(zhì)量控制水平具有重要意義。