豉香型白酒中二元酸二乙酯含量的測(cè)定方法

◎ 招原春，曾莉雅

（1.廣東省食品工業(yè)研究所有限公司，廣東 廣州 511442；2.廣東省食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，廣東 廣州 511442；3.廣東省食品工業(yè)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 511442）

自1979年白酒的香型學(xué)說誕生以來，至今已經(jīng)有12種白酒香型。豉香型的白酒起源于珠三角一帶，1996年豉香型白酒國家標(biāo)準(zhǔn)的制訂及實(shí)施，使得其成為繼濃香、清香、米香、鳳香4種香型白酒后成立的第5個(gè)香型白酒國家標(biāo)準(zhǔn)，豉香型白酒至今有近130年的生產(chǎn)歷史，是具有南國特色的地方性產(chǎn)品，以其獨(dú)特的豉味，及“玉潔冰清，豉香獨(dú)特，醇和甘滑，余味爽凈”的風(fēng)格深受粵桂兩省、港澳及南陽華僑的青睞[1-3]。

二元酸二乙酯是豉香型白酒中重要的微量物質(zhì)和特征成分之一，通過流入陳肥豬肉池中醞浸而產(chǎn)生[4]，它們?cè)诰企w中對(duì)豉香型白酒的口感與風(fēng)味都有著非常大的促進(jìn)作用。故此，二元酸二乙酯已成為國家標(biāo)準(zhǔn)《豉香型白酒》[5]（GB/T 16289—2018）規(guī)定例行檢驗(yàn)的指標(biāo)之一。其檢驗(yàn)方法為《白酒分析方法[附修改單]》[6]（GB/T 10345—2007），取用十四醇作內(nèi)標(biāo)對(duì)豉香型白酒中的二元酸二乙酯進(jìn)行檢測(cè)，但由于十四醇在低度酒中溶解度不高，出現(xiàn)渾濁情況，在氣相色譜的檢驗(yàn)過程中常出現(xiàn)非線性分流，檢測(cè)的重現(xiàn)性不佳，不能滿足微量跟蹤分析的要求。余劍霞[7]選用肉桂酸乙酯作為內(nèi)標(biāo)物，直接進(jìn)樣對(duì)白酒中的二元酸二乙酯進(jìn)行檢測(cè)，但白酒內(nèi)可能存在肉桂酸乙酯物質(zhì)，導(dǎo)致檢測(cè)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確。本文參考《白酒分析方法[附修改單]》（GB/T 10345—2007）二元二酸二乙酯含量的測(cè)定方法，內(nèi)標(biāo)采用十四醇，降低內(nèi)標(biāo)濃度，采用內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行校正，建立回收率高、穩(wěn)定性強(qiáng)的豉香型白酒中二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯的分析方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：辛二酸二乙酯，純度99.8%，庚二酸二乙酯，純度97.8%，壬二酸二乙酯，純度99.9%；內(nèi)標(biāo)物質(zhì)：十四烷，純度99.5%；乙醇（色譜純）；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均采購上海安譜公司。

實(shí)驗(yàn)室用水為Milli-Q Tntegral 超純水；白酒樣品：廣州市市場(chǎng)上流通的10種豉香型白酒，酒精度在（30±2）%vol，生產(chǎn)日期在2018—2020年；安捷倫7890B氣相色譜儀（配氫火焰離子化檢測(cè)器FID，美國安捷倫公司）；電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；移液器（0.1～1.0 mL，德國艾本德公司）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 溶液配制

30%乙醇溶液：量取30 mL乙醇，用水定容至100 mL，超聲混勻。

內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液：稱取0.4 g（精確至0.01 mg）的十四醇至100 mL容量瓶中，用乙醇定容至100 mL，混勻。0～4 ℃低溫冰箱密封保存。

二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯混合儲(chǔ)備液：分別移取1 mL的二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯組分至100 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至100 mL，混勻。0～4 ℃冰箱密封保存。

1.2.2 氣相色譜條件

色譜柱：安捷倫DB-WAX UI聚乙二醇毛細(xì)管柱（60 m×0.25 mm×0.25 μm）。色譜柱溫度：初溫35 ℃，保持1 min，以3.0 ℃·min-1升到70 ℃，以3.5 ℃·min-1升到180 ℃，再以15 ℃·min-1升到210 ℃，保持15 min。檢測(cè)器溫度：250 ℃。進(jìn)樣口溫度：250 ℃。恒壓模式-色譜柱壓力：165.47 kPa。進(jìn)樣量：1.0 μL。分流比：10∶1。

2 結(jié)果與分析

2.1 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的選擇

參考標(biāo)準(zhǔn)《白酒分析方法[附修改單]》（GB/T 10345—2007）中二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯檢測(cè)方法，吸取二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯混合儲(chǔ)備液0.100 mL，移入10 mL容量瓶，加入內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液0.2 mL，分別加入25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%乙醇溶液，定容至刻度。搖勻，上機(jī)進(jìn)行色譜分析，計(jì)算二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯校正因子，結(jié)果見圖1。從圖1可以看出，隨著乙醇濃度的增大，校正因子不停變大，直到50%乙醇濃度，校正因子方趨于穩(wěn)定，說明不同濃度的酒精度，對(duì)同一濃度的校正因子有一定的影響，特別樣品為低度豉香型白酒時(shí)，運(yùn)用GB/T 10345—2007方法檢測(cè)二元酸二乙酯時(shí)，會(huì)出現(xiàn)較大的偏差。故本方法采用低度酒精度（30%vol）內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線方法進(jìn)行校正，有效解決上述問題，

圖1 不同乙醇濃度的二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯校正因子圖

2.2 方法的線性范圍及檢出限

分別吸取10 μL、20 μL、50 μL、80 μL、100 μL和120 μL二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯混合儲(chǔ)備液移入10 mL容量瓶，分別加入0.1 mL十四醇內(nèi)標(biāo)，30%乙醇定容刻度線，得6個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度點(diǎn)，分別平行測(cè)定3次，取平均值；由圖2可知，標(biāo)準(zhǔn)品組分與內(nèi)標(biāo)物均得到完全的分離。以信噪比為3（S/N=3）計(jì)算檢出限，線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限見表1。結(jié)果表明目標(biāo)物各成分都有很好的分離，標(biāo)準(zhǔn)曲線具有很好的線性關(guān)系。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)圖譜圖

表1 線性范圍、相關(guān)系數(shù)及檢出限表

2.3 樣品前處理

吸取少量樣品至10 mL容量瓶中，加入0.1 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，再加入樣品至刻度，充分渦旋搖勻，超聲至氣泡消失，上氣相色譜測(cè)試。由色譜圖3可知，白酒樣品中的待測(cè)組分、內(nèi)標(biāo)物均得到完全的分離，無干擾物。

圖3 豉香型白酒色譜圖

2.4 回收率及精密度試驗(yàn)

稱取同一瓶豉香型白酒樣品，分別加入高中低3個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)。每個(gè)濃度加標(biāo)取6份平行樣，進(jìn)行加標(biāo)試驗(yàn)，結(jié)果見表2。由表2可知，二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯在豉香型白酒中的加標(biāo)回收率86%～116%，RSD在1.03%～3.54%，該方法滿足試驗(yàn)分析要求。

表2 回收率、精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果表（n=6）

2.5 實(shí)際樣品測(cè)定

對(duì)市場(chǎng)上流通的10個(gè)豉香型白酒樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表3。結(jié)果表明，十四醇內(nèi)標(biāo)在低度酒溶解不佳，造成GB/T 10345—2007測(cè)定二元酸二乙酯的含量比本文方法測(cè)得二元酸二乙酯的含量偏大，根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)《豉香型白酒》（GB/T 16289—2018）的要求，豉香型白酒二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯的含量應(yīng)≥1.0 mg·L-1，本次方法檢測(cè)市場(chǎng)上流通的10個(gè)豉香型白酒樣品，有3個(gè)不合格，合格率為70%。

表3 豉香型白酒檢測(cè)結(jié)果表

3 結(jié)論

通過優(yōu)化標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用30%乙醇內(nèi)標(biāo)標(biāo)曲方法，建立了回收率高、穩(wěn)定性強(qiáng)的豉香型白酒中二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯的分析方法，解決了內(nèi)標(biāo)十四醇在低度酒中溶解度不高產(chǎn)生渾濁，使得氣相色譜的檢驗(yàn)過程中常出現(xiàn)非線性分流造成檢測(cè)的重現(xiàn)性差問題，本方法滿足豉香型白酒中二元酸（庚二酸、辛二酸、壬二酸）二乙酯微量跟蹤分析的要求，本方法僅適用酒精度為（30±1）%vol的豉香型白酒樣品二乙酸二乙酯含量的測(cè)定。