液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定蔬菜中氟蟲腈及其代謝物的殘留量

◎ 王紅梅

（德州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)中心，山東 德州 253015）

氟蟲腈是一種苯基吡唑類殺蟲劑，是一種極性較強(qiáng)的農(nóng)藥，對(duì)害蟲以胃毒作用為主，兼有觸殺和一定的內(nèi)吸作用，已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)和獸醫(yī)等多個(gè)領(lǐng)域[1-2]。但由于氟蟲腈進(jìn)入生物體以后，經(jīng)代謝作用轉(zhuǎn)化為氟甲腈、氟蟲腈砜、氟蟲腈硫醚，這些代謝物的毒性高于氟蟲腈[3-4]，此外，氟蟲腈還可以通過濾滲、雨水、農(nóng)業(yè)徑流等進(jìn)入水體，對(duì)水生動(dòng)物造成危害[5-6]，對(duì)人體也有一定的危害性，除用于旱地作物拌種使用外，我國(guó)于2009年10月1日起禁止在蔬菜、水果上和其他作物上使用。

目前，檢測(cè)氟蟲腈方法很多，有氣相色譜法[7-8]、氣相色譜-質(zhì)譜法[9-12]、液相色譜-質(zhì)譜法[13-17]，這些方法應(yīng)用的基質(zhì)多是茶葉、雞蛋、乳、植物油等，涉及蔬菜基質(zhì)多是檢測(cè)氟蟲腈本體，對(duì)其代謝物研究的不多。本研究綜合以上考慮，建立液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定蔬菜中氟蟲腈及其代謝物農(nóng)藥殘留，為蔬菜中農(nóng)藥殘留提供準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便快速的檢測(cè)手段。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

LCMS8050液相色譜-三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀（日本Shimadzu公司），百分之一電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)公司），氮吹儀（organomation N-EVAPTM112），高速組織勻漿機(jī)（IKA?T25 digital ULTRA TURRAX?德國(guó)），TGL-20B高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），一次性使用無菌注射器5 mL（湖南康利來醫(yī)療器械有限公司），蔬菜農(nóng)藥殘留凈化管（青云實(shí)驗(yàn)耗材有限公司）。

甲醇、乙腈為色譜純（美國(guó)Fisher公司），水（杭州娃哈哈純凈水），無水硫酸鎂、氯化鈉為分析純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），0.22 μm有機(jī)針式濾膜。

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：氟蟲腈、氟甲腈、氟蟲腈硫醚、氟蟲腈砜。標(biāo)準(zhǔn)樣品均購(gòu)買于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心（天津）。蔬菜樣品為黃瓜、韭菜、芹菜、番茄、茄子。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制：將氟蟲腈類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用甲醇配制成100 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃冰箱中儲(chǔ)存。分別吸取合適體積的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇配制成5 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用前用流動(dòng)相稀釋配成所需濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。取陰性樣品制備空白基質(zhì)溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Shim-pack Giss C18（2.1×50 mm，1.9 μm，日本島津公司）。柱溫：35 ℃，進(jìn)樣量：1.0 μL，流動(dòng)相A為水，流動(dòng)相B為乙腈，流速：0.3 mL·min-1。梯度洗脫見表1。

表1 梯度洗脫程序表

1.4 樣品的前處理

準(zhǔn)確稱取樣品10.0 g（精確至0.1 g）于50 mL具塞離心管中，加入10.0 mL乙腈，劇烈振搖1 min，然后向離心管中加入3 g氯化鈉，4 g無水硫酸鎂，高速均質(zhì)2 min，10 000 r·min-1離心3 min。將上清液轉(zhuǎn)移至15 mL的凈化管（1 200 mg硫酸鎂，400 mg PSA，400 mg GCB），渦旋混勻1 min，以10 000 r·min-1離心3 min，吸取2.0 mL過0.22 μm濾膜于進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的選擇

離子源：電噴霧離子源；掃描方式：負(fù)離子掃描；離子源溫度：300 ℃；霧化器流速：3.0 L·min-1；干燥氣流速：10.0 L·min-1；脫溶劑管溫度：200 ℃；加熱塊溫度：400 ℃；加熱氣流速：10.0 L·min-1；離子源電壓：-3.5 kV；采用分段多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。其他質(zhì)譜條件見表2[18]。

表2 氟蟲腈及其代謝物的質(zhì)譜參數(shù)表

2.2 流動(dòng)相的選擇

試驗(yàn)選擇甲醇-水、乙腈-水分別作為流動(dòng)相，經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn)，乙腈-水作為流動(dòng)相時(shí)，乙腈-水體系洗脫化合物的能力更強(qiáng)，氟蟲腈及其代謝物出峰快，峰形尖銳，分析時(shí)間短，所以本方法選用乙腈-水作為流動(dòng)相。圖1為此儀器條件下韭菜空白基質(zhì)中氟蟲腈及其代謝物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖。

圖1 韭菜空白基質(zhì)中氟蟲腈及其代謝物農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的（0.05 ㎎·L-1）總離子流色譜圖

2.3 鹽析條件的選擇

在鹽析時(shí)，比較了氯化鈉、硫酸鎂與單用氯化鈉作為鹽析試劑時(shí)的萃取效果。經(jīng)過對(duì)比發(fā)現(xiàn)，無水硫酸鎂具有強(qiáng)吸水性，但如果用量過多，容易造成溶液凝結(jié)成固體，將農(nóng)藥包裹，影響提取效率。經(jīng)過試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用3 g氯化鈉、4 g無水硫酸鎂提取，溶液分層明顯，并且溶液也不結(jié)塊，準(zhǔn)確度高。氯化鈉雖然也能起到很好的鹽析作用，但當(dāng)硫酸鎂與氯化鈉共同使用時(shí)，回收率與精密度、準(zhǔn)確度比單獨(dú)用氯化鈉更適合方法要求。所以本試驗(yàn)選用氯化鈉、硫酸鎂作為鹽析試劑。

2.4 定容溶液的選擇

比較了凈化后直接吸取溶液過濾膜上機(jī)和氮吹轉(zhuǎn)化溶劑后上機(jī)效果。吸取2.0 mL上清液過0.22 μm濾膜，待測(cè)定；另吸取2.0 mL上清液于小燒杯，40 ℃水浴中氮?dú)獯抵两桑尤?.0 mL 60%的乙腈水溶液，上機(jī)測(cè)定[18]，結(jié)果表明，上機(jī)溶液類型對(duì)4種農(nóng)藥殘留峰型、出峰時(shí)間并沒有顯著影響。所以為了簡(jiǎn)便快捷，采用凈化后過膜直接上機(jī)。

2.5 方法驗(yàn)證

2.5.1 線性范圍和定量限

以韭菜空白樣品作為基質(zhì)，將氟蟲腈及其代謝物 農(nóng) 藥 配 制 成 濃 度 為0.005 mg·L-1、0.010 mg·L-1、0.15 mg·L-1、0.20 mg·L-1、0.50 mg·L-1的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以10倍信噪比（S/N）計(jì)算定量限。如表3所示，氟蟲腈及其代謝物在0.005～0.50 mg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（R2＞0.999），4種農(nóng)藥的定量限1.0 μg·kg-1。

表3 韭菜空白基質(zhì)中氟蟲腈及其代謝物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量限表

2.5.2 方法的回收率和精密度

以黃瓜、韭菜、番茄、芹菜、茄子為研究對(duì)象，分別在相應(yīng)的空白樣品中進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)量為10 μg·kg-1、20 μg·kg-1、50 μg·kg-1，每個(gè)添加水平做6次平行。如表4所示，氟蟲腈及其代謝物的平均回收率在92%～118%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～7.4%。方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，能夠滿足同時(shí)檢測(cè)氟蟲腈及其代謝物的要求。

表4 氟蟲腈及其代謝物的平均回收率表

3 結(jié)論

本文以乙腈-水為流動(dòng)相，乙腈為提取溶劑，氯化鈉、硫酸鎂進(jìn)行鹽析，經(jīng)過凈化包提取凈化，建立蔬菜中氟蟲腈及其代謝物殘留量的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)方法。該方法前處理簡(jiǎn)單，靈敏度高，重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高，分析時(shí)間短，適用于蔬菜中氟蟲腈及其代謝物含量的測(cè)定。