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    兒童卵黃囊瘤病因研究進(jìn)展

    2021-12-23 03:46:17許恬逸綜述審校
    臨床小兒外科雜志 2021年12期
    關(guān)鍵詞:囊瘤生殖細(xì)胞甲基化

    許恬逸 綜述 董 瑞 審校

    卵黃囊瘤(yolk sac tumor,YST),又稱內(nèi)胚竇瘤(endodermal sinus tumor),是一種分化為尿囊、胚胎卵黃囊和胚胎外間葉的生殖細(xì)胞腫瘤,60%~70%于3歲以前發(fā)?。?]。YST作為兒童惡性生殖細(xì)胞腫瘤中最常見(jiàn)的一種類型,其惡性程度高、病情進(jìn)展快,且極易血行轉(zhuǎn)移[2]。YST可廣泛發(fā)生在人體各個(gè)部位,以性腺最為常見(jiàn),除性腺外,盆腔和骶尾部為多見(jiàn),還可以發(fā)生于大腦、脊髓、縱隔、腹膜后、頭頸部等部位[1,3]。諸多學(xué)者對(duì)該病致病機(jī)理及治療進(jìn)行了大量研究,但其確切病因至今尚不明確。本文就目前國(guó)內(nèi)外兒童卵黃囊瘤的病因?qū)W研究進(jìn)行綜述。

    一、遺傳因素

    (一)基因突變

    1.SALL4基因突變:人類SALL4基因位于20q13.13-q13.2。其中SALL4A(編碼1053個(gè)氨基酸)具有全部4個(gè)外顯子,包含4個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域(Zinc Finger,ZF1~ZF4);SALL4B(編碼617個(gè)氨基酸)是通過(guò)另一個(gè)剪接供體位點(diǎn)產(chǎn)生的,該位點(diǎn)可導(dǎo)致大量外顯子2和只包含ZF1與ZF4的蛋白缺失;SALL4C(編碼277個(gè)氨基酸)沒(méi)有外顯子2,它編碼的版本只有ZF1[4]。

    關(guān)于SALL4的具體突變形式,相關(guān)研究較少。已有報(bào)道中SALL4突變都是雜合的,且均位于外顯子2和外顯子3中,而在外顯子1或外顯子4中尚未發(fā)現(xiàn)突變。這些是無(wú)意義的突變、短重復(fù)或缺失。除此之外,還有2例在ZF4基因簇編碼區(qū)發(fā)生的SALL4錯(cuò)義突變。尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道人類SALL4基因內(nèi)的純合突變,可能是因?yàn)檫@種突變會(huì)導(dǎo)致早期的胚胎致死。

    Sal-like蛋白4(spalt like transcription factor 4,SALL4)是一種在胚胎干細(xì)胞中表達(dá)的鋅指轉(zhuǎn)錄因子,在早期胚胎發(fā)育過(guò)程中具有重要作用,能聯(lián)合其他多能性相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子八聚體結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子4(recombinant octamer binding transcription factor 4,OCT4)、Nanog同源框(nanog homeobox,NANOG)和Y染色體性別決定盒基因轉(zhuǎn)錄因子2(SRY-Box transcription factor 2,SOX2)等,構(gòu)成復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò),從而維持胚胎干細(xì)胞的多能性和自我更新能力[5,6]。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)SALL4在卵黃囊瘤中呈高表達(dá)[2]。且已有多次實(shí)驗(yàn)證明,相比傳統(tǒng)標(biāo)記物甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、胎盤(pán)堿性磷酸酶(placental alkaline phosphatase,PLAP)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3)等,SALL4是一個(gè)非常敏感的新興標(biāo)記物,不論YST是發(fā)生在性腺還是性腺外,其敏感度均接近100%[7,8]。

    一方面,SALL4在癌細(xì)胞中充當(dāng)細(xì)胞增殖和凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑。小鼠實(shí)驗(yàn)證實(shí),SALL4敲低會(huì)誘導(dǎo)人類多種癌細(xì)胞大量凋亡或顯著抑制其生長(zhǎng)。此外,SALL4的下調(diào)導(dǎo)致癌細(xì)胞的細(xì)胞周期停滯和凋亡,而過(guò)表達(dá)SALL4的癌細(xì)胞會(huì)通過(guò)細(xì)胞周期蛋白D1和D2的上調(diào),表現(xiàn)出細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)和G1期細(xì)胞數(shù)量減少的特征。

    比如,SALL4通過(guò)募集核小體改構(gòu)復(fù)合體(nucleosome remodeling complex,NuRD)復(fù)合物,與NuRD元件組蛋白去乙酰化酶2(histone deacetylase2,HDAC2)共同占據(jù)其靶基因PTEN啟動(dòng)子區(qū)域,抑制PTEN基因轉(zhuǎn)錄和翻譯形成的mRNA以及蛋白的水平。而PTEN基因是一種抑癌基因,可在許多癌癥中抑制磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphoinositide 3-Kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein Kinase B,AKT)經(jīng)典信號(hào)通路。有實(shí)驗(yàn)證明,SALL4被阻斷時(shí)PTEN表達(dá)明顯上調(diào),即PTEN與SALL4呈負(fù)相關(guān)。因此,當(dāng)SALL4上調(diào)時(shí),PTEN基因表達(dá)下降,則PTEN對(duì)PI3K/AKT信號(hào)的抑制作用減弱,從而減弱了在G1期阻滯細(xì)胞周期的D1循環(huán)水平,促進(jìn)了腫瘤增殖[9]。

    另一方面,SALL4對(duì)于維持癌癥干細(xì)胞的特性也至關(guān)重要。有研究表明,SALL4可以與β-連環(huán)蛋白(β-catenin)結(jié)合并上調(diào)WNT(Wingless Int1)/βcatenin途徑靶基因的表達(dá),即SALL4可能通過(guò)與βcatenin的相互作用促進(jìn)干細(xì)胞自我更新并抑制干細(xì)胞分化。此外,STAT3有激活介導(dǎo)胚胎干細(xì)胞的自我更新和多能性的功能,SALL4可與STAT3相互作用以調(diào)節(jié)干細(xì)胞的自我更新和分化;刺猬信號(hào)通路在器官發(fā)生和分化過(guò)程中起關(guān)鍵作用,SALL4可以調(diào)節(jié)音猬因子(sonic hedgehog,SHH)信號(hào)傳導(dǎo),以防止干細(xì)胞分化[10]。

    SALL4作為一種轉(zhuǎn)錄因子可以激活OCT4,并通過(guò)形成蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)復(fù)合物與NANOG相互作用。當(dāng)OCT4與SALL4啟動(dòng)子的-290至+1之間的區(qū)域結(jié)合后,OCT4的表達(dá)會(huì)顯著上調(diào)SALL4啟動(dòng)子的活性,即OCT4與SALL4形成了可以相互激活的正反饋回路[11]。而OCT又具有維持干細(xì)胞多能性并促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用,所以SALL4也可以通過(guò)這一途徑加速癌癥進(jìn)程。因此,SALL4基因發(fā)生突變后,可能會(huì)通過(guò)多種途徑加速卵黃囊瘤細(xì)胞增殖,提高其發(fā)病率[12]。

    2.SOX家族基因突變:在哺乳動(dòng)物中,SOX基因從A到H分為八類[13]。SOX2基因位于3q26.33[14]。有研究表明,SOX2可以協(xié)同轉(zhuǎn)化正常細(xì)胞,使其變?yōu)槟[瘤細(xì)胞。同時(shí),它還是腫瘤中的擴(kuò)增基因,其過(guò)表達(dá)可導(dǎo)致惡性過(guò)程的發(fā)生,從而誘發(fā)腫瘤形成。SOX2還參與了一些復(fù)雜的信號(hào)傳導(dǎo)途徑,Chen等[15]研究表明,SOX2可以與β-catenin協(xié)同上調(diào)腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期蛋白D1(cyclin D1),從而促進(jìn)細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生。其他研究還表明,NANOG、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)和OCT4也被作為SOX2的靶標(biāo),而這些物質(zhì)又能夠促進(jìn)癌癥干細(xì)胞的自我更新和癌癥細(xì)胞的增殖[16,17]。除此之外,SOX2還與微小RNA(microRNA,miRNA)有緊密聯(lián)系,它主要受miRNA-145、miRNA-126和miRNA-9基因家族的控制[18-20]。同時(shí)SOX2也可以調(diào)控miRNA,包括下調(diào)miR-143、miR-145、miR-253-5p和miR-452,從而形成一個(gè)雙重負(fù)反饋回路[21]。

    SOX17基因位于8q11.23,在研究中被認(rèn)定是WNT信號(hào)通路傳導(dǎo)的“拮抗劑”[14,22,23]。WNT/βcatenin途徑本身可促進(jìn)細(xì)胞增殖,而SOX17則通過(guò)直接轉(zhuǎn)錄抑制CTNNB1(編碼β-catenin基因),在蛋白質(zhì)水平上的直接競(jìng)爭(zhēng)干擾β-catenin/轉(zhuǎn)錄蛋白(transcription factor,TCF)相互作用,誘導(dǎo)β-catenin蛋白酶體降解和轉(zhuǎn)錄抑制β-catenin/TCF復(fù)合物的共激活因子等可能方式,來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)WNT/β-catenin途徑的抑制,從而發(fā)揮抑制腫瘤的作用[24]。

    根據(jù)已有的研究報(bào)告,上述兩種基因的突變包括三種,分別是錯(cuò)義突變、無(wú)義突變和移碼突變,而引起腫瘤的原因主要是錯(cuò)義突變[25]。當(dāng)錯(cuò)義突變發(fā)生時(shí),由于SOX2和SOX17相應(yīng)蛋白質(zhì)上調(diào)和下調(diào),從而促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的增殖并可能進(jìn)一步誘導(dǎo)腫瘤的發(fā)生。

    3.OCT4基因突變:OCT4也被稱為OCT3、POU5F1、OTF3或OTF4,是POU轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員[26]。OCT4基因是胚胎發(fā)育過(guò)程中的關(guān)鍵基因,人的OCT4基因位于6號(hào)染色體上(6p21.31),長(zhǎng)度為16.40 kb,具有多個(gè)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn),轉(zhuǎn)錄成不同的mRNA亞型,進(jìn)而翻譯為多種蛋白質(zhì)[27]。

    OCT4是與癌癥干細(xì)胞自我更新和分化相關(guān)的因子之一。實(shí)驗(yàn)證明,OCT4蛋白在癌組織中的表達(dá)水平顯著高于非癌組織,而敲除OCT4不僅顯著降低了癌細(xì)胞的增殖活性,還會(huì)明顯抑制癌細(xì)胞的侵襲潛力[28]。OCT4可以與AKT1基因的啟動(dòng)子結(jié)合并抑制其轉(zhuǎn)錄,而一旦OCT4被AKT在其T235位點(diǎn)磷酸化,磷酸化的OCT4將與AKT1啟動(dòng)子解離,從而激活A(yù)KT1轉(zhuǎn)錄并促進(jìn)細(xì)胞存活。由此可知,T235磷酸化的OCT4(OCT4-pT235)水平與AKT水平呈正相關(guān)[29]。而PI3K/AKT信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)于癌癥干細(xì)胞的自我更新和腫瘤進(jìn)展至關(guān)重要。因此,OCT4可能是通過(guò)AKT參與了癌癥的進(jìn)程[30]。

    此外,OCT4還可以直接結(jié)合T細(xì)胞白血病/淋巴瘤蛋白(T cell leukemia/lymphoma protein,TCL1)基因的啟動(dòng)子區(qū)域并激活其轉(zhuǎn)錄。TCL1可以與AKT相互作用并完全激活A(yù)KT,從而維持癌癥干細(xì)胞的存活。同時(shí)有實(shí)驗(yàn)證明,敲除OCT4會(huì)使癌細(xì)胞的耐藥性降低,而過(guò)表達(dá)OCT4會(huì)通過(guò)提高TCL1的表達(dá)并激活A(yù)KT途徑增加癌細(xì)胞的抗凋亡能力,這對(duì)腫瘤的治療以及預(yù)后都可能產(chǎn)生影響[31]。

    4.LIN28基因過(guò)表達(dá):LIN28蛋白具有兩種類型的RNA結(jié)合基序,分別是冷休克結(jié)構(gòu)域(cold shock domain,CSD)和Cys-Cys-His-Cys(cysteine-cysteine-histidine-cysteine,CCHC)鋅指結(jié)構(gòu)域,它們共同參與一般mRNA的結(jié)合[32]。哺乳動(dòng)物產(chǎn)生兩個(gè)LIN28旁系同源物L(fēng)IN28A和LIN28B,它們分別或共同參與各種生物學(xué)功能[33]。

    LIN28是一種必需的RNA結(jié)合蛋白,在胚胎干細(xì)胞中普遍表達(dá),它的生理功能與干細(xì)胞的分化發(fā)育以及腫瘤的發(fā)生有關(guān)。LIN28的致癌特性受到包括miRNA和轉(zhuǎn)錄因子在內(nèi)的多個(gè)上游調(diào)控因子的影響,比如轉(zhuǎn)錄因子C-myc和N-myc都可以與LIN28B啟動(dòng)子結(jié)合并調(diào)節(jié)LIN28B的表達(dá),并且建立了直接的N-myc/LIN28B和C-myc/LIN28B調(diào)控的伙伴關(guān)系[34]。

    Let-7基因是一種抑癌基因[35]。有研究發(fā)現(xiàn),LIN28可以阻斷幾種miRNA的生物加工,其中包括Let-7家族的多個(gè)成員[36,37]。LIN28A/B可以使用CSD和CCHC結(jié)構(gòu)域來(lái)阻斷prilet-7和prelet-7的生物發(fā)生[32,38,39]。在細(xì)胞質(zhì)中,LIN28A/B可以通過(guò)核糖核酸內(nèi)切酶與pre-let-7末端環(huán)的相互作用來(lái)阻斷Let-7的加工,而成熟的Let-7家族成員可以通過(guò)直接靶向LIN3的3'-UTR來(lái)抑制LIN28的表達(dá),即LIN28/Let-7軸被認(rèn)為是調(diào)節(jié)各種生物學(xué)功能的雙負(fù)反饋回路[36,40,41]。因此,LIN28基因過(guò)表達(dá)可以通過(guò)抑制Let-7miRNA來(lái)加速腫瘤的發(fā)生。

    除此之外,過(guò)度激活的LIN28B可以通過(guò)調(diào)節(jié)胰島素樣生長(zhǎng)因子(insulin like growth factor,IGF)的水平來(lái)促進(jìn)癌細(xì)胞進(jìn)程[40]。其次,在癌癥干細(xì)胞中,LIN28B及其調(diào)節(jié)劑IκB激酶(inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase,IKKβ)可以通過(guò)與WNT/TCF7信號(hào)通路相互作用來(lái)維持癌細(xì)胞的干性[42]。

    有實(shí)驗(yàn)證明,LIN28在小兒卵黃囊瘤中表達(dá)上調(diào),是該腫瘤的敏感標(biāo)志物,可用于將其與成熟畸胎瘤區(qū)分[43]。因此,LIN28基因的過(guò)表達(dá)可能是導(dǎo)致YST發(fā)生的驅(qū)動(dòng)因素之一[44]。

    5.其他相關(guān)基因:有研究表明,兒童睪丸卵黃囊瘤中通常有RUNX3啟動(dòng)子的高甲基化,而成人生殖細(xì)胞腫瘤中少有發(fā)生。對(duì)兒童睪丸卵黃囊瘤患者,RUNX3 mRNA在正常的對(duì)照睪丸中有表達(dá),而在病例的正常睪丸組織中卻檢測(cè)不到甲基化。以上證據(jù)表明RUNX3基因可能是兒童睪丸卵黃囊瘤的抑制基因。研究表明,PRDM14可與OCT4、SOX2和NANOG一起參與人類多能性核心網(wǎng)絡(luò)的組成,因此其相關(guān)基因的異常也可能引起卵黃囊瘤的發(fā)生[45]。除此之外,還有KITLG、SPRY4、BAKI、DMRTI等基因也可能與該腫瘤相關(guān)[46]。

    (二)染色體變異

    在關(guān)于兒童卵黃囊瘤的染色體報(bào)告中,最常見(jiàn)失衡是1q和20q染色體上的重復(fù)以及1p和6q染色體上的丟失。除此之外,還包括染色體3p的重復(fù)以及染色體4q、18q和20p的丟失[47,48]。但是這些通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)出的特征性染色體變異具體如何通過(guò)基因表達(dá)影響腫瘤的發(fā)展還有待進(jìn)一步研究。

    二、表觀遺傳學(xué)因素

    1.DNA甲基化:DNA甲基化異常是許多癌癥的重要特征,由于在生殖細(xì)胞正常發(fā)育過(guò)程中發(fā)生廣泛的表觀遺傳重編程[49]。同樣,DNA甲基化異常在兒童YST中也發(fā)揮著重要的作用。有研究表明,YST在大量與癌癥相關(guān)的基因中表現(xiàn)出啟動(dòng)子甲基化,其中包含許多與生殖細(xì)胞生物學(xué)高度相關(guān)的基因,如TCF4、WNT10B、BDNF、FGF2、BMP3、FZD9、WNT2、APC、SOX2、NTRK2、NTRK3、TGFB3、TGFB2、WNT1、PDGFRB等,其中包括3個(gè)重要的抑癌基因(APC、RUNX3和HIC1)[50]。這些基因啟動(dòng)子的甲基化會(huì)影響其轉(zhuǎn)錄翻譯的過(guò)程,從而導(dǎo)致相應(yīng)的蛋白質(zhì)無(wú)法正常表達(dá)[51]。同時(shí),卵黃囊瘤中甲基化程度較高的CpG基因位點(diǎn)上,顯著富集了與胚胎干細(xì)胞多能性和發(fā)育信號(hào)通路相關(guān)的基因,例如PTEN、PDGF和NF-κB[50]。還有實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),2個(gè)印跡基因和17個(gè)抑癌基因的甲基化水平存在差異,在YST中發(fā)生異常的表觀遺傳重編程[52]。因此,以DNA甲基化為代表的表觀遺傳學(xué)也有可能引起YST的發(fā)生。

    2.miRNA:miRNA是小的內(nèi)源性非編碼RNA在特定的細(xì)胞類型和發(fā)育階段調(diào)節(jié)基因功能的方式。miRNA在轉(zhuǎn)錄后翻譯中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用,因此它的差異性表達(dá)與人類癌癥有關(guān)[53]。已有多篇論文闡述miR-371-373和miR-302簇與生殖細(xì)胞腫瘤有一定相關(guān)性,其中miRNA-372和miRNA-373通過(guò)與p53途徑的相互作用,特別是通過(guò)調(diào)節(jié)LATS2,在GCT中作為癌基因發(fā)揮作用,而miR-302簇則可調(diào)節(jié)淋巴結(jié)抑制因子左右決定因子1(leftright determination factor 1,LEFTY1)和LEFTY2,從而在胚層規(guī)范中發(fā)揮重要作用[54]。此外,還發(fā)現(xiàn)miRNA-122、miR-200b、miR-200c、miR-375和miR-638等在卵黃囊瘤中過(guò)度表達(dá),這些miRNA的上調(diào)/下調(diào)可能也在一定程度上導(dǎo)致了癌癥的發(fā)生[55,56]。

    3.印記基因:已知在從原始生殖細(xì)胞正常發(fā)育成性腺細(xì)胞/卵母細(xì)胞的過(guò)程中會(huì)發(fā)生印跡清除,因此據(jù)推測(cè),當(dāng)其發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化時(shí),腫瘤細(xì)胞的印跡狀態(tài)可能反映了原始生殖細(xì)胞的發(fā)育階段。IGF2和H19(分別在母本和父本上印記)是迄今為止研究最廣泛的印記基因。有研究應(yīng)用甲基化敏感性單核苷酸引物延伸技術(shù)研究了這兩個(gè)基因的啟動(dòng)子甲基化狀態(tài),發(fā)現(xiàn)所有惡性生殖細(xì)胞瘤在IGF2/H19的印跡控制區(qū)域均發(fā)生了甲基化。因此印跡基因的甲基化及其表達(dá)的改變極有可能與兒童YST的發(fā)生有關(guān)[57]。

    三、綜合征伴發(fā)因素

    有研究表明,患有克萊氏綜合征(47,XXY)的男性兒童更有可能發(fā)展成YST,尤其是縱隔腫瘤[58]。雖然確切的致癌原因還不清楚,但無(wú)疑提示了X染色體對(duì)YST的潛在作用。此外,患有特納綜合征(46,XY)的女性兒童也有更大概率發(fā)展成惡性生殖細(xì)胞瘤,這與其Y染色體序列有一定的相關(guān)性[59]。純性腺發(fā)育不全以及其他一些性染色體疾病也可能與兒童YST的發(fā)生有關(guān)[60]。

    四、其他因素

    一項(xiàng)研究表明,亞裔/太平洋島民和西班牙裔兒童的卵黃囊腫瘤發(fā)展風(fēng)險(xiǎn)最高,出生時(shí)年齡≤19歲的年輕母親其孩子患YST的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)有所增加[61]。同時(shí),兒童YST也被認(rèn)為與環(huán)境有關(guān)。有研究表明,若父母日常工作、生活的環(huán)境可能接觸有機(jī)溶劑,如苯、甲苯、二氯甲烷等,或者母親懷孕時(shí)暴露于類似環(huán)境中,這些溶劑會(huì)影響性腺相關(guān)激素的分泌,從而導(dǎo)致孩子患YST的概率增加[62]。

    綜上所述,兒童YST的發(fā)生原因較為復(fù)雜,可能是遺傳、發(fā)育、環(huán)境等多重因素導(dǎo)致的結(jié)果。相對(duì)而言,相關(guān)基因的異常改變應(yīng)是所有病因中的關(guān)鍵,但現(xiàn)在針對(duì)該方面的研究還較匱乏。因此,還需要更多樣本及更深入的研究來(lái)明確YST的致病因素并闡明其致病機(jī)制,為YST的診斷、治療以及預(yù)后提供最大程度的幫助。

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