百會(huì)、足三里穴電針預(yù)處理對(duì)腦缺血/再灌注大鼠腦、腸炎性因子的影響

張繼瑤，唐 強(qiáng)，朱路文*

1 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江哈爾濱 150040；

2 黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150001

隨著社會(huì)的不斷進(jìn)步，生活節(jié)奏的不斷加快，我國(guó)腦卒中發(fā)病率呈上升態(tài)勢(shì)。研究顯示，2017 年我國(guó)腦血管病在農(nóng)村人群疾病死亡比例中占23.18%，在城市人群疾病死亡比例中占20.52%［1］。其中，缺血性腦卒中（ischemic stroke，IS）具有高發(fā)病率、高致死率、高致殘率、高復(fù)發(fā)率及并發(fā)癥多的“四高一多”特點(diǎn)，嚴(yán)重威脅人類健康，給家庭和社會(huì)帶來(lái)巨大負(fù)擔(dān)。目前針對(duì)IS 最有效的治療手段是恢復(fù)缺血腦組織的血氧供應(yīng)，但其引發(fā)的腦缺血再灌注損傷可導(dǎo)致更加嚴(yán)重的腦功能障礙發(fā)生，即腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）［2］。CIRI 不可逆且病理機(jī)制復(fù)雜，涉及炎癥反應(yīng)、鈣超載、神經(jīng)元興奮性氨基酸毒性增強(qiáng)、細(xì)胞凋亡、氧自由基損傷等多種途徑，目前臨床上無(wú)特效藥物治療［3-4］。因此，如何預(yù)防CIRI 的發(fā)生至關(guān)重要?！笆ト瞬恢我巡≈挝床。恢我褋y治未亂”的“治未病”理念對(duì)腦卒中預(yù)防及治療具有重要指導(dǎo)意義［5］。針灸可激發(fā)人體經(jīng)絡(luò)之氣，增強(qiáng)其抗邪與應(yīng)變能力，通過(guò)調(diào)節(jié)體質(zhì)，促進(jìn)健康，減輕相關(guān)疾病損害的程度，甚至預(yù)防疾病的發(fā)生［6］。研究表明，針刺治療IS可擴(kuò)張腦血管，有效增加腦卒中患者缺血區(qū)腦部血流量，改善患者腦組織氧和能量代謝，促進(jìn)其病后腦功能重塑［7］。電針（electroacupuncture，EA）具有針灸和電療的雙重優(yōu)點(diǎn)。研究顯示，在腦缺血前給予多次重復(fù)的電針預(yù)處理，誘導(dǎo)腦缺血耐受，可減輕缺血、缺氧所引發(fā)的腦組織損傷［8］。但電針治療腦缺血再灌注損傷機(jī)制復(fù)雜，目前尚未形成統(tǒng)一共識(shí)。研究指出電針預(yù)處理防治CIRI 可能涉及多通路、多靶點(diǎn)，如改善腦細(xì)胞能量代謝、抑制興奮性氨基酸分泌、降低Ca2+超載損傷、調(diào)控氧化應(yīng)激反應(yīng)、緩解炎性反應(yīng)、調(diào)控血腦屏障及腦水腫、調(diào)控細(xì)胞自噬等［9-10］。根據(jù)中醫(yī)腦腸同治的理論，腦為髓海，元神之府，缺血性中風(fēng)發(fā)生后，神機(jī)失用，大腸失司，百會(huì)穴為頭部各經(jīng)脈之氣匯聚處，針刺可醒腦安神、平肝熄風(fēng)，足三里穴為足陽(yáng)明胃經(jīng)合穴，針刺可合治六腑、健脾和胃、扶正培元。臨床防治腦缺血及腦缺血再灌注損傷常選擇百會(huì)穴、足三里穴［11-13］。本研究選擇百會(huì)穴、足三里穴電針預(yù)處理干預(yù)CIRI 大鼠，探討EA 預(yù)處理對(duì)腦缺血/再灌注大鼠前肢抓握力量和腦、腸、外周血中白細(xì)胞介素（in?terleukin，IL）-17A、IL-10 表達(dá)的影響，探討電針預(yù)處理的腦-腸保護(hù)作用機(jī)制，以期為EA 預(yù)處理防治腦缺血/再灌注損傷提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選擇SPF級(jí)雄性Sprague-Dawley大鼠36只，8～10周齡，體質(zhì)量220～240 g，采購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK（遼）2015-0001。SPF級(jí)飼養(yǎng)條件：動(dòng)物自由食水，溫度23～25 ℃，濕度60%～70%，人工光照12 h∶12 h 明暗交替（7∶00～19∶00照明），通風(fēng)良好，噪音＜60 dB，每2～3 d 更換一次墊料，定期清潔鼠籠和飲水器。本實(shí)驗(yàn)的操作流程遵循2006年科技部發(fā)布的《關(guān)于善待實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的指導(dǎo)性意見(jiàn)》以及小動(dòng)物倫理與保護(hù)的相關(guān)規(guī)定。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備

4%多聚甲醛溶液（安徽雷根生物技術(shù)有限公司）；二甲苯（天津市富宇精細(xì)化工有限公司）；蘇木素（Biosharp）、1%鹽酸乙醇分化液（安徽雷根生物技術(shù)有限公司）；Rabbit Anti-IL-17 Polyclonal Anti?body（北京博奧森生物技術(shù)有限公司）；IL-10 Poly?clonal antibody（武漢三鷹生物技術(shù)有限公司）；RIPA裂解液、Bradford 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；辣根酶標(biāo)記山羊抗兔IgG（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）；大鼠IL-17A ELI?SA試劑盒、大鼠IL-10 ELISA試劑盒（江蘇酶免實(shí)業(yè)有限公司）；一次性使用無(wú)菌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）；G6805-2A 型低頻電子脈沖治療儀（上海華誼醫(yī)用儀器有限公司）；YP5002型電子天平（常州市衡正電子儀器有限公司）；D1008E型掌上離心機(jī)（SCILOGEX）、Multiskan FC 型酶標(biāo)儀（Thermo Fisher Scientific）、ChemiDocTMMP Imaging System、小型垂直電泳轉(zhuǎn)印系統(tǒng)（Bio-Rad）、Excelsior AS 組織處理機(jī)（Thermo Fisher Scientific）、YDS-35 型液氮容器（樂(lè)山市東亞機(jī)電工貿(mào)有限公司）；Eppendorf移液器（德國(guó)Eppendorf公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1實(shí)驗(yàn)分組 將36 只大鼠編號(hào)，采用Excel 生成隨機(jī)數(shù)字表（1～12），任意選擇隨機(jī)數(shù)字表中1個(gè)數(shù)為起始點(diǎn)對(duì)應(yīng)大鼠編號(hào)1，從左至右，自上而下分別對(duì)應(yīng)1～36 號(hào)大鼠。用隨機(jī)數(shù)字除以3 所得余數(shù)確定每只大鼠的分組，余數(shù)0、1、2 分別對(duì)應(yīng)假手術(shù)組（S-con 組）、模型組（M-con 組）和電針組（EP 組），每組12只。

1.3.2模型制備 模型制備前12 h 大鼠禁食不禁水。模型制備過(guò)程中所涉及的手術(shù)器材及用作線拴的魚線（直徑0.26 mm）均進(jìn)行高壓滅菌處理或75%酒精浸泡消毒，頭端1 mm 做過(guò)蠟處理，從過(guò)蠟端算起，在魚線18～22 mm 處用防褪色marker 筆做好標(biāo)記。除S-con 組外，M-con 組、EP 組參照KOI?ZUMI 等［14］線拴法加以改良，制備大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞（middle cerebral artery occlusion/reperfu?sion，MCAO/R）模型，在頸總動(dòng)脈中插入頭端過(guò)蠟的魚線至大腦中動(dòng)脈起始端，缺血120 min 后拉出栓線尾端恢復(fù)灌注。模型制備過(guò)程中若出現(xiàn)制備不成功或者大鼠死亡隨即剔除，另選大鼠補(bǔ)充，確保每組12只。

1.3.3干預(yù)方法

1.3.3.1S-con組S-con組按類似MCAO/R模型制備方法操作，但不結(jié)扎頸總動(dòng)脈和頸內(nèi)動(dòng)脈，不插入線拴，即不阻斷腦血流和再灌注。

1.3.3.2M-con組M-con組按MCAO/R模型制備方法操作，120 min后拔線恢復(fù)腦血流灌注。

1.3.3.3EP組參考《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物圖譜》［15］穴位定位，選取大鼠百會(huì)穴、患側(cè)足三里穴，采用針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司，規(guī)格：0.25 mm×13 mm）進(jìn)行電針預(yù)處理。于百會(huì)穴由前向后平刺約3 mm，足三里穴直刺6 mm，連接低頻電子脈沖治療儀（上海華誼醫(yī)用儀器有限公司，G6805-2A 型），正極接百會(huì)穴，負(fù)極接足三里穴，選取疏密波，2/15 Hz，1 mA，以大鼠下肢輕微震顫為度，連續(xù)刺激30 min，1 次/d，每周連續(xù)干預(yù)6 d后休息1 d，共干預(yù)2周。最后1次電針干預(yù)24 h后大鼠接受MCAO/R模型制作，120 min后拔線恢復(fù)腦血流灌注。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1前肢抓握力量 于術(shù)前1 d，再灌注12 h，再灌注1、3、7 d 采用大小鼠抓力測(cè)定儀（濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司，YLS-13A 型）對(duì)各組大鼠的前肢抓握力量進(jìn)行測(cè)定。測(cè)試者1只手提起待測(cè)定大鼠的尾部，將其置于抓力儀測(cè)定區(qū)域，當(dāng)測(cè)試者向后拉大鼠尾部時(shí)，大鼠試圖抓緊抓力測(cè)定儀橫桿以免從橫桿脫落，這時(shí)測(cè)試者繼續(xù)向后拖拽大鼠，直至其滑脫，同時(shí)測(cè)定儀顯示出大鼠此次的前肢抓握力量，每只大鼠測(cè)試2次，取最大值作為最后數(shù)據(jù)。

1.4.2IL-17A、IL-10 含量 再灌注7 d 后，各組隨機(jī)選取6 只大鼠麻醉后，用一次性采血針和采血管快速抽取1.5 mL腹主動(dòng)脈血，室溫下靜置30 min，于離心機(jī)上離心（4 000 r/min，10 min，-4 ℃），取上層血清，用于測(cè)定IL-17A、IL-10 的含量。將ELISA 試劑盒從冷藏環(huán)境中拿到室溫平衡15～30 min；將原倍標(biāo)準(zhǔn)品用稀釋液配置成5 個(gè)不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品；加樣后將酶標(biāo)板置于37 ℃培養(yǎng)箱中溫育30 min；手工洗板完成后每孔加酶標(biāo)試劑50 μL；再次溫育和手工洗板；每孔加入顯色試劑A、B，各50 μL，顯色10 min；終止后在酶標(biāo)儀450 nm下測(cè)定各孔的吸光度。

1.4.3IL-17A、IL-10 蛋白表達(dá) 再灌注7 d 后，各組隨機(jī)選取6 只大鼠抽取腹主動(dòng)脈血后，取缺血側(cè)腦組織和結(jié)腸組織，采用Western blot檢測(cè)缺血側(cè)皮層和結(jié)腸組織中IL-17A、IL-10蛋白的表達(dá)。在每個(gè)樣本（約0.05 g）內(nèi)加入相應(yīng)體積的裂解液（約500 μL），冰上充分研磨（5 min）；離心，取上清液，進(jìn)行蛋白定量；制備聚丙烯酰胺凝膠及蛋白上樣液，組裝電泳裝置開始電泳；經(jīng)轉(zhuǎn)膜、封閉、洗膜，孵育一抗、二抗、ECL 底物發(fā)光后用ChemiDocTMMP Imaging Sys?tem將聚偏氟乙烯（Poly vinylidene fluoride，PVDF）膜進(jìn)行暗室曝光及掃描膠片，分析目標(biāo)條帶光密度值。

1.4.4IL-17A、IL-10 平均光密度值 再灌注7 d后，將各組剩余的6只大鼠麻醉后，從心尖快速灌注20 mL 生理鹽水，然后繼續(xù)灌注10 mL 的4%多聚甲醛磷酸鹽緩沖液。大鼠軀干發(fā)硬后，斷頭取缺血側(cè)腦組織，并剪取一定長(zhǎng)度的結(jié)腸組織，放入4%多聚甲醛溶液中4 ℃冰箱過(guò)夜。次日將腦組織和結(jié)腸組織取出，以視交叉處為切開點(diǎn)將腦組織行冠狀切開，向后取約6 mm，另取回盲瓣以上的腸段2 cm，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋。采用免疫組化法檢測(cè)IL-17A、IL-10 的表達(dá)。將組織修塊、脫水、透明、透蠟處理和常規(guī)石蠟包埋；切片后烤片，脫蠟至水；將切片放入檸檬酸鈉抗原修復(fù)液中修復(fù)；在組織表面滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑，室溫條件下孵育（10 min）；在組織表面滴加山羊血清，CO2培養(yǎng)箱中孵育（30 min，37 ℃）；一抗孵育，濕盒內(nèi)過(guò)夜（4 ℃）；次日取出切片，CO2培養(yǎng)箱中復(fù)溫（40 min，37 ℃）；在組織表面滴加酶標(biāo)山羊抗兔IgG聚合物，CO2培養(yǎng)箱中孵育（20 min，37 ℃）；在組織表面滴加DAB 工作液（100 μL），待組織顏色剛剛變深時(shí)迅速終止反應(yīng)；蘇木素復(fù)染、脫水、透明、封片后顯微鏡（×100）下觀察切片，定位，顯微鏡（×400）下拍照，計(jì)算IL-17A、IL-10 免疫陽(yáng)性反應(yīng)的平均光密度（average optical density，AOD）值。

1.4.5缺血側(cè)皮層病理改變 將各組用于免疫組化的缺血側(cè)腦組織修塊、脫水、包埋、切片、烤片，依次在二甲苯溶液Ⅰ中浸泡（10 min），二甲苯溶液Ⅱ中浸泡（10 min），無(wú)水乙醇溶液Ⅰ中浸泡（2 min），無(wú)水乙醇溶液Ⅱ中浸泡（2 min），95%乙醇溶液（2 min）、85%乙醇溶液（2 min）中浸泡，蒸餾水中浸泡（2 min），蘇木素染液中浸泡（15 min），蒸餾水中浸泡（5 min），1%鹽酸乙醇分化液中浸泡（1 s），自來(lái)水流水沖（20 min），蒸餾水中反藍(lán)（2 min），95%乙醇溶液中浸泡（2 min），伊紅染液中浸泡（15 s），脫水、透明、封片，顯微鏡（×400）下拍照。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料符合正態(tài)分布以（）表示，若方差齊，組間比較采用ANOVA 單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；若方差不齊則采用Tamhane's T2 進(jìn)行檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組前肢抓握力量比較

與S-con 組比較，M-con 組再灌注12 h，再灌注1、3、7 d 前肢抓握力量均明顯降低（P＜0.05）；與Mcon 組比較，EP 組再灌注12 h，再灌注1、3、7 d 前肢抓握力量均明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 3組前肢抓握力量比較（） gTable 1 Comparison of forelimb grasping strength in three groups（） g

表1 3組前肢抓握力量比較（） gTable 1 Comparison of forelimb grasping strength in three groups（） g

注：與S-con組同時(shí)間點(diǎn)比較，1）P＜0.05；與M-con組同時(shí)間點(diǎn)比較，2）P＜0.05。Notes:Compared with the S-con group at the same time,1)P<0.05;compared with the M-con group at the same time,2)P<0.05.

2.2 3組腹主動(dòng)脈血清IL-17A、IL-10含量比較

與S-con 組比較，M-con 組再灌注7 d 后腹主動(dòng)脈血清IL-17A、IL-10的含量均明顯增加（P＜0.05）；與M-con 組比較，EP 組再灌注7 d 后腹主動(dòng)脈血清IL-17A的含量明顯減少，IL-10的含量明顯增加（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 3組血清IL-17A、IL-10含量比較（）ng/LTable 2 Comparison of content of IL-17A，IL-10 of serum in three groups（） ng/L

表2 3組血清IL-17A、IL-10含量比較（）ng/LTable 2 Comparison of content of IL-17A，IL-10 of serum in three groups（） ng/L

注：與S-con 組比較，1）P＜0.05，與M-con 組比較，2）P＜0.05。Notes:Compared with the S-con group,1) P<0.05;compared with the M-con group,2)P<0.05.

2.3 3 組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10 蛋白表達(dá)比較

與S-con 組比較，M-con 組再灌注7 d 后缺血側(cè)皮層內(nèi)、結(jié)腸組織中IL-17A、IL-10蛋白表達(dá)量均明顯增加（P＜0.05）；與M-con 組比較，EP 組再灌注7 d 后缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織中IL-17A 蛋白表達(dá)量明顯減少，IL-10 蛋白表達(dá)量明顯增加（P＜0.05）。見(jiàn)表3、圖1。

圖1 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10蛋白電泳圖Figure 1 Electrophoretogram of IL-17A,IL-10 protein of ischemic cortex and colon tissue in three groups

表3 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10蛋白表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of expression of IL-17A，IL-10 protein of ischemic cortex and colon tissue in three groups（）

表3 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10蛋白表達(dá)比較（）Table 3 Comparison of expression of IL-17A，IL-10 protein of ischemic cortex and colon tissue in three groups（）

注：與S-con組比較，1）P＜0.05；與M-con組比較，2）P＜0.05。Notes:Compared with the S-con group,1)P<0.05;compared with the M-con group,2)P<0.05.

2.4 3 組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10 的AOD值比較

與S-con 組比較，M-con 組再灌注7 d 后缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10 蛋白的AOD 值均明顯升高（P＜0.05）；與M-con組比較，EP組再灌注7 d后缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A 的AOD 值顯著降低，IL-10 的AOD 值明顯升高（P＜0.05）。見(jiàn)表4、圖2。

圖2 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10陽(yáng)性表達(dá)（×400）Figure 2 Positive expression of IL-17A,IL-10 of ischemic cortex and colon tissue in three groups(×400)

表4 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10的AOD值比較（）Table 4 Comparison of AOD value of IL-17A，IL-10 protein of ischemic cortex and colon tissue in three groups（）

表4 3組缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織IL-17A、IL-10的AOD值比較（）Table 4 Comparison of AOD value of IL-17A，IL-10 protein of ischemic cortex and colon tissue in three groups（）

注：與S-con組比較，1）P＜0.05；與M-con組比較，2）P＜0.05。Notes:Compared with the S-con group,1)P<0.05;compared with the M-con group,2)P<0.05.

2.5 3組缺血側(cè)皮層病理變化

S-con 組再灌注7 d 后右側(cè)腦組織未見(jiàn)病理改變；M-con組再灌注7 d后缺血側(cè)皮層腦細(xì)胞排列紊亂、皺縮，片狀壞死，核固縮、邊移、深染，形態(tài)不規(guī)則，神經(jīng)纖維空泡化。與M-con 組比較，EP 組再灌注7 d 后缺血側(cè)皮層細(xì)胞壞死的數(shù)量明顯減少，神經(jīng)纖維空泡化等病理改變明顯減輕。見(jiàn)圖3。

圖3 3組缺血側(cè)皮層病理變化圖（×400）Figure 3 Pathology figure of ischemic cortex in three groups(×400)

3 討論

MURRY 等［16］于1986 年提出缺血預(yù)適應(yīng)（isch?emic preconditioning，IPC）的概念，預(yù)先給予短暫性且非致死性的輕度缺血或再灌注刺激可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)隨后發(fā)生的長(zhǎng)時(shí)間致死性缺血的耐受。KITAGAWA等［17］證實(shí)1次或多次短暫的亞致死性IPC，可在一定時(shí)間內(nèi)增強(qiáng)腦組織對(duì)嚴(yán)重缺血刺激的耐受。此外，越來(lái)越多的臨床證據(jù)表明，很多預(yù)適應(yīng)方式（如局部或遠(yuǎn)程缺血、缺氧、內(nèi)毒素、細(xì)胞因子和麻醉藥等）都能夠誘導(dǎo)腦保護(hù)機(jī)制和心臟保護(hù)機(jī)制，對(duì)抗缺血/再灌注損傷［18-19］。但從臨床實(shí)際應(yīng)用情況來(lái)看，上述預(yù)處理方法仍有一定的局限性，特別是對(duì)于危重癥患者仍存在尚未解決的矛盾。為此，本研究采用電針預(yù)處理干預(yù)CIRI 大鼠模型，以期為IPC在臨床的應(yīng)用提供參考。

3.1 電針預(yù)處理能夠減輕腦缺血/再灌注大鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙

本研究結(jié)果顯示，M-con 組、EP 組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)前肢抓握力量均低于S-con 組，EP 組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)前肢抓握力量均明顯高于M-con 組，這提示腦缺血能夠造成大鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙，而電針預(yù)處理能夠減輕腦缺血/再灌注大鼠的運(yùn)動(dòng)功能障礙。這可能與以下因素有關(guān)：①EA預(yù)處理能產(chǎn)生類IPC的作用，能夠在哺乳動(dòng)物的大腦中產(chǎn)生快速型和延遲型神經(jīng)保護(hù)作用。研究顯示，電針百會(huì)、足三里等穴位可通過(guò)促進(jìn)缺血側(cè)運(yùn)動(dòng)皮層M2 型小膠質(zhì)細(xì)胞外泌體的分泌，改善大鼠腦缺血后的神經(jīng)功能缺損癥狀及運(yùn)動(dòng)功能障礙［20］。腦缺血再灌注后，神經(jīng)細(xì)胞大量死亡，大鼠有神經(jīng)功能的異常以及運(yùn)動(dòng)行為學(xué)改變，針刺足三里等穴位能夠保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞再生，促進(jìn)其肢體運(yùn)動(dòng)功能的恢復(fù)［21］。②中風(fēng)的病機(jī)多本虛標(biāo)實(shí)，針刺應(yīng)通經(jīng)絡(luò)、行氣血、開腦竅，百會(huì)穴位于顛頂，多條經(jīng)脈交匯于此，針刺百會(huì)可醒腦開竅、通達(dá)陰陽(yáng)脈絡(luò)；足三里穴為足陽(yáng)明胃經(jīng)的要穴，足陽(yáng)明胃經(jīng)多氣多血，主潤(rùn)宗筋，針刺足三里穴可治療中風(fēng)后肢體不利［12，22-23］。電針刺激百會(huì)穴、足三里等穴位可提高CA3 區(qū)神經(jīng)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43和突觸素在海馬區(qū)的表達(dá)，保護(hù)缺血性腦損傷，促進(jìn)CIRI 后損傷區(qū)域突觸的重建和功能的重塑［24］。電針足三里等穴位的神經(jīng)保護(hù)作用有明顯促進(jìn)局灶性CIRI大鼠缺血周圍皮質(zhì)紋狀體區(qū)vimentin的增殖，促進(jìn)缺血周圍區(qū)皮質(zhì)以及缺血側(cè)室管膜下區(qū)內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞的增殖，減少腦梗死體積，改善動(dòng)物整體行為學(xué)、神經(jīng)功能缺損及運(yùn)動(dòng)功能［25-26］。這與WANG 等［27］研究顯示，電針能夠?qū)衷钚阅X缺血刺激誘導(dǎo)產(chǎn)生雙相的耐受，快速型保護(hù)效應(yīng)發(fā)生在EA 預(yù)處理后2 h，而延遲型保護(hù)效應(yīng)發(fā)生在EA 預(yù)處理后24 h 的結(jié)果相似，也和WANG 等［28］對(duì)輕癥患者或健康人預(yù)先實(shí)施針刺療法可激發(fā)人體正氣，增強(qiáng)其抗病能力，預(yù)防和減少后續(xù)疾病發(fā)生發(fā)展的觀點(diǎn)吻合。

3.2 電針預(yù)處理可減輕腦缺血后腸道-中樞炎癥反應(yīng)和免疫損傷

本研究結(jié)果顯示，與S-con 組比較，M-con 組再灌注7 d后腹主動(dòng)脈血清IL-17A、IL-10的含量均明顯升高，缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織中IL-17A、IL-10 蛋白表達(dá)量和AOD 值均明顯升高；與M-con 組比較，EP 組再灌注7 d 后腹主動(dòng)脈血清IL-17A 的含量明顯減少，IL-10 的含量顯著增加，缺血側(cè)皮層、結(jié)腸組織中IL-17A 蛋白表達(dá)量和AOD 值均明顯減少，IL-10 蛋白表達(dá)量和AOD 值均明顯增加。這提示，腦缺血/再灌注后外周炎癥反應(yīng)增強(qiáng)，電針預(yù)處理可下調(diào)腦組織、腸道組織及外周IL-17A 的表達(dá)，上調(diào)IL-10 的表達(dá)，減輕腦缺血后腸道-中樞炎癥損傷。這可能與以下因素有關(guān)：①炎癥反應(yīng)是CIRI的關(guān)鍵病理過(guò)程。CIRI 發(fā)生后，IL-6、IL-1β 和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）等大量促炎因子分泌并促進(jìn)中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞向受損組織浸潤(rùn)，引起炎癥反應(yīng)惡性循環(huán)［29］。Janus 激酶-信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活子信號(hào)通路以及核因子κB（nucle?ar factor-kappa B，NF-κB）這2 種信號(hào)通路可通過(guò)多種細(xì)胞因子參與炎癥反應(yīng)，加重腦損傷［30］。EA 預(yù)處理可下調(diào)大鼠炎癥因子IL-1β、IL-6、Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）、NF-κB 表達(dá)，調(diào)節(jié)腦缺血/再灌注后炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)腦缺血耐受［31-33］。EA預(yù)處理可通過(guò)減輕缺血側(cè)腦組織的神經(jīng)炎癥反應(yīng)有效改善腦缺血再灌注損傷，如上調(diào)大腦皮層半暗帶Yes 相關(guān)蛋白表達(dá)，下調(diào)神經(jīng)元NOD 樣受體熱蛋白結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白3 的表達(dá)等［34-35］。②Th17 細(xì)胞分泌的炎性因子IL-17A可增加多種促炎癥因子、趨化因子、黏附分子的表達(dá)，促進(jìn)免疫炎癥反應(yīng)，破壞血腦屏障，加重腦組織損傷［36-38］。當(dāng)大鼠腦缺血發(fā)生后，腸道內(nèi)的IL-17+γδT 可增多并遷移至腦組織沉積，EA 預(yù)處理可抑制TNF-α、IL-6 等促炎因子的合成和分泌，促使腸道內(nèi)IL-17A 含量下降，調(diào)節(jié)T淋巴和B 淋巴細(xì)胞的增殖，抑制炎癥反應(yīng)和免疫損傷，促進(jìn)腦梗死面積明顯縮?。?9-40］。此外，EA 預(yù)處理還可以激活大鼠體內(nèi)多種免疫細(xì)胞分泌抗炎因子IL-10，有效減輕炎癥反應(yīng)，這與徐磊等［41-42］研究結(jié)果相似。

4 小 結(jié)

百會(huì)穴、足三里穴電針預(yù)處理可減輕缺血側(cè)皮層的病理?yè)p傷程度、腸道-中樞炎癥損傷，改善神經(jīng)行為學(xué)功能。但是目前電針預(yù)處理干預(yù)腦缺血/再灌注大鼠是如何發(fā)揮腦-腸保護(hù)作用的具體機(jī)制尚未完全闡明，未來(lái)可基于以上研究進(jìn)一步深入探討電針預(yù)處理的作用機(jī)制，為腦缺血/再灌注損傷的預(yù)防和治療提供新思路。