• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于GEO數(shù)據(jù)庫分析影響口腔鱗狀細(xì)胞癌的關(guān)鍵基因

    2021-12-20 06:56:08趙軍劉麗娜
    關(guān)鍵詞:胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)樣本

    趙軍 劉麗娜

    中圖分類號(hào):R739.8 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A doi:10.3969/j.issn.1001-3733.2021.06.018

    口腔癌是世界上第六大常見惡性腫瘤,死亡率高,預(yù)后差??谇击[狀細(xì)胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是口腔癌的主要病理類型,約占口腔癌的90%,可發(fā)生于口腔的不同部位,如舌、牙齦、口腔黏膜、硬腭、嘴唇和口腔底[1]。盡管外科手術(shù)、放化療和免疫治療取得了一定的進(jìn)展,但由于其侵襲、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā),OSCC的5年生存率只有大約50%。OSCC可以早期預(yù)防和治愈,但大多數(shù)OSCC患者直到晚期才被確診[2-3]。因此,尋找潛在的生物標(biāo)志物對(duì)口腔鱗狀細(xì)胞癌的早期診斷和治療迫在眉睫。

    目前,在高通量實(shí)驗(yàn)方法中,如微陣列分析已廣泛應(yīng)用于差異表達(dá)基因分析[4-5]。大量的微陣列數(shù)據(jù)被存儲(chǔ)在公共數(shù)據(jù)庫中。這些儲(chǔ)存庫便于研究人員通過整合多個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集來識(shí)別疾病相關(guān)的生物標(biāo)志物,有助于理解OSCC形成的分子機(jī)制。有學(xué)者利用SEER數(shù)據(jù)庫分析影響腺樣囊性癌患者預(yù)后的臨床病例因素[6]。本研究中從GEO數(shù)據(jù)庫下載了3 個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集來識(shí)別OSCC和正常對(duì)照組的差異表達(dá)基因(differentially expressed genes,DEGs), 用于尋找與OSCC發(fā)生、發(fā)展有關(guān)的關(guān)鍵基因,這些關(guān)鍵基因可能作為診斷和治療OSCC的潛在生物標(biāo)志物。

    1 資料與方法

    1.1 微陣列數(shù)據(jù)信息

    從GEO數(shù)據(jù)庫(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/)下載基因表達(dá)數(shù)據(jù)集GSE74530、GSE78060和GSE138206。這3 個(gè)數(shù)據(jù)集的平臺(tái)都是GPL570(Affymetrix Human Genome U133 Plus 2.0 Array),GSE74530和GSE138206分別含有6 個(gè)OSCC樣本和6 個(gè)正常樣本,GSE78060包含26 個(gè)OSCC樣本和4 個(gè)正常樣本。微陣列數(shù)據(jù)集匯總?cè)绫?。

    表1 3 個(gè)微陣列數(shù)據(jù)集的匯總信息Tab 1 Summary of the 3 microarray datasets from the GEO database

    1.2 DEGs數(shù)據(jù)處理與識(shí)別

    GEO2R(www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/geo2r/)在線分析工具可用于通過比較兩組或多組樣本來識(shí)別DEGs。使用GEO2R對(duì)OSCC樣本和正常樣本間的DEGs進(jìn)行分析,篩選標(biāo)準(zhǔn)是P<0.01和|logFC|>1,并對(duì)DEGs用火山圖可視化。隨后用維恩圖在線工具(http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)確定3 個(gè)數(shù)據(jù)集中共同上調(diào)和下調(diào)的DEGs。

    1.3 DEGs的GO和KEGG富集分析

    DAVID(https://david.ncifcrf.gov/)在線分析工具可以為大規(guī)?;蚧虻鞍踪|(zhì)提供全面的生物功能注釋信息?;虮倔w論(gene ontology,GO)包括生物過程(gene process,BP)、分子功能(molecular function,MF)和細(xì)胞成分(cellular component,CC)。京都基因和基因組百科全書(kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)數(shù)據(jù)庫從基因組測(cè)序和其他高通量實(shí)驗(yàn)技術(shù)生成的大規(guī)模分子數(shù)據(jù)集中了解生物系統(tǒng)的高級(jí)功能和效用。利用DAVID對(duì)DEGs進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析,P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    1.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與hub基因鑒定

    STRING(https://string-db.org)在線數(shù)據(jù)庫用于搜索已知蛋白質(zhì)和預(yù)測(cè)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction,PPI), 包括蛋白質(zhì)之間的直接物理相互作用和間接功能相關(guān)性。DEGs的PPI分析采用STRING數(shù)據(jù)庫,置信度≥0.4,結(jié)果用Cytoscape軟件進(jìn)行分析和可視化。此外,利用Cytoscape的cytoHubba插件計(jì)算每個(gè)蛋白節(jié)點(diǎn)的連接度,排名前10的基因被鑒定為hub基因。

    1.5 hub基因的表達(dá)

    UCLCAN(https://ualcan.path.uab.edu/index.html)是一個(gè)基于TCGA數(shù)據(jù)庫的分析和挖掘癌癥數(shù)據(jù)的網(wǎng)站工具。通過UCLCAN驗(yàn)證hub基因的表達(dá),P<0.05被認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    1.6 生存分析

    Kaplan-Meier plotter(http://kmplot.com/analysis/)在線的腫瘤分析工具中可以獲得基因表達(dá)與多種癌癥患者的生存率相關(guān)的信息。采用Kaplan-Meier對(duì)OSCC中hub基因表達(dá)的生存狀態(tài)進(jìn)行分析驗(yàn)證,P<0.05認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 DEGs的識(shí)別

    從GSE74530中獲得2 783 個(gè)DEGs,包括2 009 個(gè)上調(diào)基因和774 個(gè)下調(diào)基因。在GSE78060中,鑒定出2 774 個(gè)DEGs,包括1 115 個(gè)上調(diào)基因和1 659 個(gè)下調(diào)基因。從GSE 138206中共鑒定出1 265 個(gè)DEGs,包括569 個(gè)上調(diào)基因和696 個(gè)下調(diào)基因(圖1)。用維恩圖求出3 組間的重疊部分,最終得到182 個(gè)上調(diào)DEGs和75 個(gè)下調(diào)DEGs(圖2)。

    圖1 3 個(gè)數(shù)據(jù)集中OSCC組織與正常組織之間DEGs的火山圖

    圖2 3 個(gè)數(shù)據(jù)集中共有的DEGs的韋恩圖

    2.2 DEGs的GO和KEGG富集分析

    2.2.1 上調(diào)DEGs的GO和KEGG富集分析 BP分析表明,DEGs主要富集細(xì)胞外基質(zhì)組織、細(xì)胞黏附、膠原分解代謝、血管生成和細(xì)胞外基質(zhì)分解。在CC中,DEGs主要分布在胞外區(qū)、胞外體、胞外間隙、細(xì)胞外基質(zhì)和蛋白質(zhì)類細(xì)胞外基質(zhì)。MF分析顯示,DEGs在鈣離子結(jié)合、細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)成分、膠原結(jié)合、金屬內(nèi)肽酶活性和血小板源性生長(zhǎng)因子結(jié)合等方面均顯著富集。另外,KEGG途徑分析表明,DEGs主要集中在細(xì)胞外基質(zhì)受體相互作用、PI3K-Akt信號(hào)通路、局灶性粘附、阿米巴病、蛋白質(zhì)消化吸收等方面。

    2.2.2 下調(diào)DEGs的GO和KEGG富集分析 BP分析表明,DEGs主要富集凋亡過程的陽性調(diào)節(jié)、細(xì)胞-底物粘附的陽性調(diào)節(jié)、突觸組裝的陽性調(diào)節(jié)、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶信號(hào)通路、CD4陽性、α-βT細(xì)胞分化。在CC中,DEGs主要集中在細(xì)胞外體、蛋白質(zhì)類細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞外基質(zhì)中。MF分析顯示,DEGs在肝素結(jié)合中明顯富集。此外,KEGG途徑分析表明,DEGs主要富集于脂肪酸降解、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸降解。

    2.3 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與hub基因鑒定

    用STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò),包括247 個(gè)節(jié)點(diǎn)和1 132 個(gè)邊,有10 個(gè)基因沒有被發(fā)現(xiàn)。Cytoscape顯示的結(jié)果如圖3,根據(jù)蛋白節(jié)點(diǎn)的連接度得分,前10 位的hub基因分別為FN1、COL1A1、COL1A2、COL3A1、CD44、COL4A1、COL5A1、CXCL8、POSTN和CXCL10(表2)。所有這些hub基因在OSCC樣本中均上調(diào)。

    表2 連接度排名前10的基因Tab 2 Top 10 genes ranked by degree

    圖3 DEGs的PPI網(wǎng)絡(luò)

    2.4 hub基因的表達(dá)驗(yàn)證

    除了在UALCAN數(shù)據(jù)庫中未發(fā)現(xiàn)CXCL8外,其他hub基因在OSCC樣本中的表達(dá)均顯著高于正常組織(P<0.001)(圖4)。

    圖4 hub基因在口腔鱗癌組織和正常組織中的表達(dá)

    2.5 hub基因的生存分析驗(yàn)證

    FN1、CD44、COL5A1、CXCL8的高表達(dá)與OSCC患者較差的總體生存率(overall survival,OS)顯著相關(guān),而COL3A1的高表達(dá)與OSCC患者的良好OS顯著相關(guān)。然而,COL1A1、COL1A2、COL4A1、POSTN和CXCL10的表達(dá)與OSCC患者的預(yù)后無關(guān)(圖5)。

    圖5 OSCC患者h(yuǎn)ub基因表達(dá)的生存分析

    3 討 論

    在全球范圍內(nèi),OSCC是一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題,每年約有30萬新病例被診斷[7]。盡管有研究發(fā)現(xiàn)NEK2、CCNB1等基因在OSCC的發(fā)生過程中起到一定作用[8-9],但OSCC的病理機(jī)制尚不完全清楚。為了進(jìn)一步探索OSCC發(fā)病機(jī)制,本文從GEO數(shù)據(jù)庫中下載OSCC樣本和正常組織樣本的基因表達(dá)數(shù)據(jù),通過GEO2R在線分析,成功挖掘到差異表達(dá)的基因,用STRING數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了差異表達(dá)基因的PPI網(wǎng)絡(luò),同時(shí),用Cytoscape軟件尋找hub基因,最后通過UALCAN基因表達(dá)驗(yàn)證以及通過Kaplan-Meier plotter生存分析驗(yàn)證,最終獲得了FN1、COL3A1、COL5A1、CD44和CXCL8等5 個(gè)hub基因。

    FN1屬于細(xì)胞外基質(zhì)的糖蛋白家族,已被證明參與細(xì)胞粘附和遷移過程[10]。據(jù)報(bào)道, FN1的過度表達(dá)與OSCC侵襲有關(guān),并且與較差的預(yù)后有關(guān)[11-12]。這與此文研究結(jié)果一致。COL3A1編碼III型膠原的pro-alpha1鏈。有研究表明COL3A1與腫瘤有關(guān),高表達(dá)的COL3A1意味著較差的預(yù)后[13]。然而,在本研究中,COL3A1的高表達(dá)是OSCC的一個(gè)有利的預(yù)后因素。目前,在OSCC中對(duì)COL3A1的研究較少,因此,對(duì)COL3A1的分子機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。COL5A1可以編碼V型膠原的α鏈。已有研究表明COL5A1與胃癌、乳腺癌有關(guān),是腫瘤發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的不利因素[14-15]。然而,COL5A1在OSCC中的研究鮮有報(bào)道。在本研究中,COL5A1在OSCC中高表達(dá),且高表達(dá)是OSCC患者的負(fù)面預(yù)后因素。CD44屬于細(xì)胞表面糖蛋白家族,參與細(xì)胞與細(xì)胞的相互作用、細(xì)胞粘附和遷移。研究表明高表達(dá)的CD44參與了對(duì)化療誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的抵抗,這可能導(dǎo)致OSCC復(fù)發(fā)[16-17]。本研究發(fā)現(xiàn)CD44在OSCC中的表達(dá)明顯高于正常組織,并且CD44高表達(dá)患者的生存率較差。CXCL8編碼的蛋白質(zhì)屬于參與炎癥反應(yīng)的CXC趨化因子家族。CXCL8/CXCL8R軸在人類癌癥中具有負(fù)作用,并可通過各種方式導(dǎo)致腫瘤的進(jìn)展[18-19]。有研究證明,CXCL8與其受體CXCR2結(jié)合與OSCC的進(jìn)展有關(guān)[20]。本研究發(fā)現(xiàn)高水平的CXCL8與OSCC患者的陰性預(yù)后有關(guān)。

    綜上所述,本研究從GEO 公共數(shù)據(jù)庫下載OSCC表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù),在樣本量相對(duì)充足的情況下,篩選OSCC組織和正常組織之間DEGs,并最終確定了與OSCC預(yù)后密切相關(guān)的hub基因。根據(jù)以上內(nèi)容,通過生物信息學(xué)的方法獲得的結(jié)果,具有一定的可靠性,如FN1、CD44和CXCL8在OSCC的研究中已有一些報(bào)道,而且本研究的結(jié)果和之前的研究結(jié)果是一致的。然而COL3A1和COL5A1在OSCC 研究中,鮮有報(bào)道,后續(xù)需要進(jìn)一步通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證。

    猜你喜歡
    胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)樣本
    蛋白質(zhì)自由
    肝博士(2022年3期)2022-06-30 02:48:48
    人工智能與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)
    海外星云(2021年9期)2021-10-14 07:26:10
    脫細(xì)胞外基質(zhì)制備與應(yīng)用的研究現(xiàn)狀
    用樣本估計(jì)總體復(fù)習(xí)點(diǎn)撥
    關(guān)于經(jīng)絡(luò)是一種細(xì)胞外基質(zhì)通道的假說
    推動(dòng)醫(yī)改的“直銷樣本”
    隨機(jī)微分方程的樣本Lyapunov二次型估計(jì)
    蛋白質(zhì)計(jì)算問題歸納
    村企共贏的樣本
    水螅細(xì)胞外基質(zhì)及其在發(fā)生和再生中的作用
    最近最新中文字幕大全电影3 | 欧美老熟妇乱子伦牲交| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲精品国产区一区二| 午夜激情av网站| 咕卡用的链子| 久久久久精品国产欧美久久久| 亚洲精品久久国产高清桃花| 国产成人免费无遮挡视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 日韩中文字幕欧美一区二区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产亚洲精品一区二区www| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲中文字幕日韩| 久久国产精品影院| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 国产99久久九九免费精品| 波多野结衣av一区二区av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 女人被狂操c到高潮| 国内精品久久久久久久电影| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲精品国产色婷婷电影| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人永久免费在线观看视频| 麻豆一二三区av精品| 久9热在线精品视频| 国产高清视频在线播放一区| 搡老熟女国产l中国老女人| 成人欧美大片| 日日爽夜夜爽网站| 成人国产综合亚洲| 999久久久精品免费观看国产| av中文乱码字幕在线| 国产主播在线观看一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲性夜色夜夜综合| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 欧美午夜高清在线| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久精品欧美日韩精品| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久精品影院6| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产91精品成人一区二区三区| 精品乱码久久久久久99久播| 久热这里只有精品99| 免费av毛片视频| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| av视频免费观看在线观看| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 一级黄色大片毛片| 亚洲视频免费观看视频| 日韩欧美国产在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 69av精品久久久久久| 美女高潮到喷水免费观看| 免费高清视频大片| 成人亚洲精品一区在线观看| cao死你这个sao货| 久久精品91无色码中文字幕| 首页视频小说图片口味搜索| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 午夜成年电影在线免费观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 一本综合久久免费| 一级黄色大片毛片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲熟女毛片儿| 成人国产一区最新在线观看| 久久狼人影院| av有码第一页| 亚洲国产精品成人综合色| 99香蕉大伊视频| 久久久国产成人免费| 制服诱惑二区| 一级作爱视频免费观看| 国产亚洲欧美精品永久| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 看免费av毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲精品国产区一区二| 999久久久国产精品视频| 色哟哟哟哟哟哟| 亚洲精品国产区一区二| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲av五月六月丁香网| 亚洲性夜色夜夜综合| 一夜夜www| 极品教师在线免费播放| av超薄肉色丝袜交足视频| 女警被强在线播放| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 久久久久久久久免费视频了| 又黄又粗又硬又大视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| av电影中文网址| 美女午夜性视频免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 丝袜美足系列| 成人免费观看视频高清| 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲成av人片免费观看| 性少妇av在线| 丁香六月欧美| 国产精品1区2区在线观看.| 一区二区三区高清视频在线| 国产精品久久久人人做人人爽| 51午夜福利影视在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 国产亚洲欧美精品永久| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产精品久久久人人做人人爽| 91成年电影在线观看| 亚洲av电影在线进入| 亚洲五月天丁香| 操美女的视频在线观看| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产精品秋霞免费鲁丝片| 男人操女人黄网站| 99精品久久久久人妻精品| aaaaa片日本免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美不卡视频在线免费观看 | 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 99久久精品国产亚洲精品| 免费观看精品视频网站| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 免费在线观看完整版高清| 午夜免费激情av| 成人三级做爰电影| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 可以在线观看的亚洲视频| 正在播放国产对白刺激| 一本大道久久a久久精品| 色哟哟哟哟哟哟| АⅤ资源中文在线天堂| 操出白浆在线播放| 99久久99久久久精品蜜桃| 亚洲自拍偷在线| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 欧美国产精品va在线观看不卡| 日本黄色视频三级网站网址| 精品福利观看| 精品无人区乱码1区二区| 久9热在线精品视频| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 久久国产精品影院| 免费在线观看影片大全网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 成人三级黄色视频| 久久香蕉激情| 老鸭窝网址在线观看| 又大又爽又粗| 国产麻豆69| 色av中文字幕| 成人欧美大片| 国产亚洲av高清不卡| 少妇 在线观看| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 欧美不卡视频在线免费观看 | 最近最新中文字幕大全免费视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 女人精品久久久久毛片| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲自拍偷在线| 一a级毛片在线观看| 18禁美女被吸乳视频| av视频在线观看入口| 精品电影一区二区在线| 免费观看精品视频网站| 欧美乱码精品一区二区三区| 黄色 视频免费看| 国产av一区二区精品久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| a在线观看视频网站| 欧美中文综合在线视频| 波多野结衣巨乳人妻| 欧美不卡视频在线免费观看 | 国产成人精品久久二区二区91| 成年人黄色毛片网站| 99国产精品免费福利视频| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲av美国av| 美国免费a级毛片| 在线观看免费视频日本深夜| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲第一青青草原| 香蕉丝袜av| 日韩大码丰满熟妇| 成人三级做爰电影| 欧美最黄视频在线播放免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 啦啦啦免费观看视频1| 天堂√8在线中文| 午夜福利,免费看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产精品亚洲一级av第二区| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 国产精品国产高清国产av| 亚洲精品美女久久av网站| 极品教师在线免费播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜免费鲁丝| 激情视频va一区二区三区| 久久天堂一区二区三区四区| 国产色视频综合| 国产人伦9x9x在线观看| 日韩国内少妇激情av| 亚洲国产精品sss在线观看| 长腿黑丝高跟| 99久久国产精品久久久| 九色国产91popny在线| 国产亚洲精品av在线| 亚洲熟女毛片儿| 91成人精品电影| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 最近最新免费中文字幕在线| e午夜精品久久久久久久| 两个人看的免费小视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 好男人电影高清在线观看| 丝袜美腿诱惑在线| 欧美日韩福利视频一区二区| 热re99久久国产66热| 精品人妻1区二区| 国产av精品麻豆| 亚洲成国产人片在线观看| 美女国产高潮福利片在线看| avwww免费| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 99久久综合精品五月天人人| 色老头精品视频在线观看| av欧美777| 亚洲av第一区精品v没综合| 欧美中文综合在线视频| 97人妻天天添夜夜摸| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| av在线播放免费不卡| 九色亚洲精品在线播放| 精品久久久久久,| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 丝袜美腿诱惑在线| 一本久久中文字幕| 天堂影院成人在线观看| 91字幕亚洲| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 无限看片的www在线观看| 国产亚洲精品第一综合不卡| 亚洲七黄色美女视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 少妇 在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 丝袜人妻中文字幕| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 亚洲视频免费观看视频| 精品人妻在线不人妻| 国产免费av片在线观看野外av| 精品免费久久久久久久清纯| 两个人看的免费小视频| 无遮挡黄片免费观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 可以在线观看毛片的网站| 精品人妻1区二区| 亚洲一码二码三码区别大吗| 制服人妻中文乱码| 亚洲av五月六月丁香网| 欧美激情 高清一区二区三区| 无人区码免费观看不卡| 咕卡用的链子| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美成人性av电影在线观看| 极品人妻少妇av视频| 一区二区三区国产精品乱码| 亚洲五月色婷婷综合| 久久香蕉精品热| 岛国视频午夜一区免费看| 在线观看日韩欧美| 欧美日本视频| 美女免费视频网站| 1024视频免费在线观看| 中文字幕高清在线视频| 国产乱人伦免费视频| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 免费在线观看黄色视频的| 看黄色毛片网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 中国美女看黄片| 一级毛片高清免费大全| 动漫黄色视频在线观看| 丰满的人妻完整版| 桃红色精品国产亚洲av| 在线观看舔阴道视频| 欧美黑人精品巨大| 给我免费播放毛片高清在线观看| 脱女人内裤的视频| 国产野战对白在线观看| 制服丝袜大香蕉在线| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 人人澡人人妻人| 国产麻豆69| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 日日爽夜夜爽网站| 亚洲熟女毛片儿| 999久久久国产精品视频| 制服丝袜大香蕉在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 日本黄色视频三级网站网址| or卡值多少钱| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 午夜精品久久久久久毛片777| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 在线观看一区二区三区| 欧美中文综合在线视频| 亚洲国产欧美网| 丝袜在线中文字幕| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲久久久国产精品| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 久久人人97超碰香蕉20202| 在线永久观看黄色视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 久久久久久久久久久久大奶| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品久久久久久久久久免费视频| 可以在线观看毛片的网站| 日韩精品中文字幕看吧| 亚洲精品在线美女| 欧美av亚洲av综合av国产av| 国产成人精品在线电影| 中文字幕人妻熟女乱码| 亚洲情色 制服丝袜| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 日本免费一区二区三区高清不卡 | 欧美国产日韩亚洲一区| 91九色精品人成在线观看| 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美日本中文国产一区发布| 高清黄色对白视频在线免费看| 黄色片一级片一级黄色片| 午夜免费鲁丝| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久亚洲精品不卡| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产欧美日韩一区二区精品| 午夜成年电影在线免费观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 人人妻人人澡欧美一区二区 | 久久久久精品国产欧美久久久| 中文字幕精品免费在线观看视频| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产野战对白在线观看| 变态另类丝袜制服| 波多野结衣一区麻豆| 69精品国产乱码久久久| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产在线精品亚洲第一网站| 丝袜美足系列| 涩涩av久久男人的天堂| 国产成人精品在线电影| bbb黄色大片| 一级毛片女人18水好多| 日韩中文字幕欧美一区二区| av在线播放免费不卡| 91av网站免费观看| 国产av又大| 日日夜夜操网爽| 少妇 在线观看| 精品一品国产午夜福利视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 欧美另类亚洲清纯唯美| 午夜免费鲁丝| 日韩中文字幕欧美一区二区| 99热只有精品国产| 欧美日韩一级在线毛片| 可以在线观看毛片的网站| 国产熟女午夜一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产精品1区2区在线观看.| 国产精品一区二区三区四区久久 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 欧美黄色淫秽网站| www日本在线高清视频| 一级a爱片免费观看的视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 最近最新中文字幕大全电影3 | 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲av五月六月丁香网| 午夜福利一区二区在线看| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲在线自拍视频| 欧美亚洲日本最大视频资源| 欧美黑人欧美精品刺激| 国产极品粉嫩免费观看在线| 成人精品一区二区免费| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 1024香蕉在线观看| 99在线视频只有这里精品首页| 热re99久久国产66热| 日本 av在线| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 久久青草综合色| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 国产精品精品国产色婷婷| av福利片在线| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产精品久久视频播放| 精品久久久久久久久久免费视频| 黄片小视频在线播放| 亚洲自拍偷在线| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲情色 制服丝袜| 午夜影院日韩av| www.www免费av| 精品高清国产在线一区| 国产真人三级小视频在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 真人做人爱边吃奶动态| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲人成电影免费在线| 国产亚洲精品一区二区www| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 后天国语完整版免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久天堂一区二区三区四区| 人人妻人人澡人人看| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩国内少妇激情av| 国产成年人精品一区二区| 久久这里只有精品19| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲欧美精品综合久久99| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 制服丝袜大香蕉在线| 我的亚洲天堂| 一级a爱片免费观看的视频| 99在线视频只有这里精品首页| 老司机在亚洲福利影院| 国产av精品麻豆| 正在播放国产对白刺激| 国产av在哪里看| 1024视频免费在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| av片东京热男人的天堂| 激情视频va一区二区三区| 亚洲性夜色夜夜综合| av天堂久久9| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 一本久久中文字幕| 正在播放国产对白刺激| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲中文av在线| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品免费一区二区三区在线| 久久这里只有精品19| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产一卡二卡三卡精品| 黄色片一级片一级黄色片| www日本在线高清视频| 亚洲久久久国产精品| av片东京热男人的天堂| 757午夜福利合集在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| aaaaa片日本免费| 老司机在亚洲福利影院| 国产精品九九99| www.精华液| 亚洲精品国产区一区二| 黄色视频,在线免费观看| 久久影院123| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美在线一区亚洲| 啦啦啦韩国在线观看视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 久久久久国内视频| 久久久久久久久中文| 他把我摸到了高潮在线观看| 免费不卡黄色视频| 一级a爱视频在线免费观看| 亚洲久久久国产精品| 久久人妻av系列| 精品电影一区二区在线| 欧美在线一区亚洲| 国产激情欧美一区二区| 国产精品久久久av美女十八| 夜夜爽天天搞| 高潮久久久久久久久久久不卡| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 欧美色视频一区免费| 国产精品99久久99久久久不卡| 国产三级黄色录像| 伦理电影免费视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 99riav亚洲国产免费| 久久久久久久久中文| 亚洲激情在线av| 午夜老司机福利片| 国语自产精品视频在线第100页| 午夜福利免费观看在线| 欧美大码av| 日韩成人在线观看一区二区三区| 69精品国产乱码久久久| 欧美精品亚洲一区二区| 久久久久久久午夜电影| 国产精品一区二区免费欧美| 99re在线观看精品视频| 一级作爱视频免费观看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 99国产综合亚洲精品| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 免费在线观看完整版高清| 美女高潮到喷水免费观看| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | а√天堂www在线а√下载| 久99久视频精品免费| 国产精品亚洲一级av第二区| 啪啪无遮挡十八禁网站| 91在线观看av| 长腿黑丝高跟| 制服人妻中文乱码| 国产真人三级小视频在线观看| 久久这里只有精品19| 纯流量卡能插随身wifi吗| 精品久久久久久久毛片微露脸| 两个人看的免费小视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 看黄色毛片网站| 99在线人妻在线中文字幕| 黑人欧美特级aaaaaa片| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 韩国精品一区二区三区| 成年人黄色毛片网站| 久久香蕉精品热| 久久久久久久久久久久大奶| 12—13女人毛片做爰片一| 成在线人永久免费视频| 在线观看舔阴道视频| 免费高清在线观看日韩| 中文字幕高清在线视频| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 一级毛片高清免费大全| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 国内精品久久久久精免费| 深夜精品福利| 高潮久久久久久久久久久不卡| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 99热只有精品国产| 怎么达到女性高潮| 国产一区二区三区综合在线观看| 日韩欧美国产在线观看| 黄色女人牲交| 久久午夜综合久久蜜桃| 日韩欧美三级三区| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 国产在线精品亚洲第一网站| 天堂动漫精品| 看片在线看免费视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产激情欧美一区二区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 中文字幕高清在线视频| 亚洲九九香蕉| 亚洲最大成人中文| 亚洲精华国产精华精| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 老鸭窝网址在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 久9热在线精品视频| 97碰自拍视频| 性欧美人与动物交配| 一a级毛片在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 黄片小视频在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 九色国产91popny在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 好男人电影高清在线观看| av片东京热男人的天堂| 国产又爽黄色视频|