一株固氮菌的篩選、鑒定及混菌發(fā)酵制備復(fù)合型菌糠菌肥的研究

李凌凌，陸雅琳，汪漢正，周予西，左振宇，楊忠華

(1. 武漢科技大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院，湖北 武漢，430081；2. 武漢科技大學(xué)煤轉(zhuǎn)化與新型炭材料湖北省重點實驗室，湖北 武漢，430081)

微生物肥料是一種環(huán)境友好新型活體肥料，由單一或多種功能微生物與動植物殘體或者腐熟有機質(zhì)經(jīng)無害化處理后獲得[1]，該類肥料中有益微生物的生命代謝能夠?qū)崿F(xiàn)固氮、解磷、解鉀等效應(yīng)，不僅可以改善土壤理化性質(zhì)、提高土壤肥力，而且能夠促進植物對營養(yǎng)元素的吸收，產(chǎn)生多種生理活性物質(zhì)以調(diào)節(jié)植物生長，并拮抗細菌或真菌等病原微生物的侵害，從而實現(xiàn)對不同作物的增產(chǎn)作用[2]。

功能微生物是實現(xiàn)微生物肥料肥力和功效的核心，開發(fā)植物根際促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)菌肥以及利用多種功能微生物混合制備復(fù)合型菌肥是目前微生物肥料研究領(lǐng)域的主要趨勢。PGPR是一類生活在植物根際的微生物，能夠促進植物生長，防治病害和增加作物產(chǎn)量[3]，以其為原料制備菌肥不僅能有效促進植物根系的吸收，而且還可保護植物根部免受病菌的侵襲，從而提升菌肥的功效[4]。菌肥中的微生物主要有固氮菌、溶磷菌、解鉀菌、光合細菌、促生菌等[5]，由這些微生物混合制備的復(fù)合型菌肥，能夠綜合各菌種不同的代謝能力，并通過它們之間的相互作用來實現(xiàn)菌肥的多功能融合。此外，基質(zhì)載體也是影響菌肥質(zhì)量的關(guān)鍵因素。微生物肥料的載體不僅要為微生物生存和釋放提供適當環(huán)境[6]，還需具有較高的有機質(zhì)和養(yǎng)分含量以保證接種微生物的生長[7]。菌糠又稱菇渣或蘑菇渣，是收獲食用菌子實體之后的廢棄基質(zhì)，其主要成分為菌絲殘體、菌體生長代謝過程中的產(chǎn)物以及食用菌分解后的木質(zhì)素、纖維素和半纖維素等碳水化合物[2，8]。菌糠經(jīng)食用菌分解以后，其中氮、磷、鉀的有效性優(yōu)于栽種前的培養(yǎng)基質(zhì)，而且菌糠疏松透氣，持水性好，施用于土壤可以提高土壤肥力和保水保肥性能[5,8]，因此，以菌糠作為載體制備微生物肥料，不僅能以較低的生產(chǎn)成本提供足夠的植物營養(yǎng)，而且可實現(xiàn)廢棄資源的循環(huán)利用，促進食用菌產(chǎn)業(yè)及其它相關(guān)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。基于此，本研究從辣椒根際采集的土壤樣品中分離出固氮菌，研究了菌株的固氮、溶磷和分泌植物生長激素的能力，并將所篩選的固氮菌與幾種溶磷微生物兩兩混合，以菌糠為載體制備出復(fù)合型菌糠菌肥，利用植物的盆栽實驗，研究了所制復(fù)合型菌肥對辣椒苗的促生作用，以期為此類復(fù)合型菌肥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 培養(yǎng)基

Ashby無氮液體培養(yǎng)基：甘露醇10.0 g，CaCO35.0 g，MgSO4·7H2O 0.2 g，KH2PO40.2 g，CaSO4·2H2O 0.1 g，NaCl 0.2 g，加去離子水定容至 1000 mL。在配制相應(yīng)固體培養(yǎng)基時，另加入瓊脂20.0 g[3,9]。

LB培養(yǎng)基：參照文獻[10]配制，用于鑒定菌株與氧氣的關(guān)系。

半固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基：平菇菌糠 25.0 g，玉米粉5.0 g，初始水含量為60%～70%。

NBRIP培養(yǎng)基：Ca3(PO4)25.0 g，葡萄糖10.0g，(NH4)2SO40.15 g，KCl 0.2 g，MgCl2·6H2O 0.5 g，MgSO4·7H2O 0.25 g，加去離子水定容至1000 mL，pH值調(diào)至7.0，用于培養(yǎng)溶磷細菌[11]。

1.1.2 菌株

臺灣假單胞菌(Pseudomonastaiwanensis)P1和P3、成團泛菌(Pantoeaagglomerans)ZB和Talaromycespurpureogenus(TP)菌，均為實驗室從植物根際篩選所得具有溶磷能力的菌株。

1.1.3 酶和化學(xué)試劑

Salkowski比色液：FeCl34.5 g，溶于1 L濃度為10.8 mol/L濃硫酸中[3]。

PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒(Cycle-pure kit)為美國OMEGA公司產(chǎn)品；通用型柱式基因組DNA提取試劑盒、DNA Marker和2×ES Taq MasterMix(含染料)為康為世紀生物科技有限公司產(chǎn)品；引物合成和測序工作均由武漢擎科創(chuàng)新生物科技有限公司完成。

1.2 方法

1.2.1 菌株YX的篩選

取5 g采集自湖北省廣水市楊寨菜園所種植辣椒根際處的土壤樣品(采集深度5～15 cm)，加入到100 mL的Ashby無氮液體培養(yǎng)基中富集培養(yǎng)。以Ashby培養(yǎng)基為選擇性培養(yǎng)基，在其上稀釋涂布土壤富集液，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待培養(yǎng)一段時間后，從Ashby平板上挑選生長旺盛的菌落，采用平板劃線分離法進行菌種的純化，重復(fù)3～4次，直至顯微鏡中觀察到形態(tài)、大小基本一致的細菌，該菌種命名為YX。

1.2.2 菌株YX的鑒定

菌株YX的個體形態(tài)觀察和生理生化特征檢測參照文獻[10]進行操作。按照通用型柱式基因組DNA提取試劑盒說明書，提取菌株YX的基因組DNA。菌株YX的16S rDNA的PCR擴增、回收、測序和系統(tǒng)發(fā)育樹的構(gòu)建參照文獻[11]進行。

1.2.3 菌株溶磷能力的測定

采用磷釩鉬黃比色法測定培養(yǎng)液中可溶磷的含量[11]。

1.2.4 培養(yǎng)液pH值的檢測

采用pH計測量培養(yǎng)液的pH值，培養(yǎng)基的初始pH值為7.0。

1.2.5 菌株固氮能力的檢測

用接種環(huán)挑取菌株YX的菌落在Ashby瓊脂平板上劃線后，置于30 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一段時間，觀察菌株的生長狀況。若菌株生長良好，初步判斷菌株具有一定的固氮能力。菌株YX在Ashby液體培養(yǎng)基中生長7 d后，離心獲取上清液，以不接菌種的液體培養(yǎng)基為對照，采用半微量凱氏定氮法測定上清液中的含氮量，以此確定菌株YX的固氮量[9,12]。

1.2.6 菌株產(chǎn)吲哚乙酸能力的檢測

以1%接種量接種菌株YX于L-色氨酸濃度為100 mg/L的液體Ashby無氮培養(yǎng)基中，在30 ℃、180 r/min的恒溫搖床中避光振蕩培養(yǎng)24 h后，取菌懸液測定菌液中的IAA含量。將菌懸液離心后所得上清液按體積比1∶1與Salkowski比色液混合，混合液在室溫下避光靜置30 min后，于530 nm處測定吸光度值[3,13]，空白對照為未接種的培養(yǎng)基與Salkowski比色液的等體積混合液。

1.2.7 菌株的拮抗實驗

將菌株YX分別與臺灣假單胞菌P1和P3、TP、成團泛菌ZB在LB瓊脂平板上借助雙劃線法兩兩混合接種，即先將菌株YX沿平板表面橫向劃線接種，再將另一菌種沿平板表面縱向劃線接種。將接種樣品在30 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)20 min后再倒置培養(yǎng)3 d，每天定時觀察平板縱橫劃線交叉處的細菌生長狀況，若交叉點處出現(xiàn)明顯生長抑制現(xiàn)象，則表明兩菌株間有拮抗作用，不能混合培養(yǎng)；若交叉點處未顯現(xiàn)生長抑制作用，則表明兩菌株生長良好，菌株之間不發(fā)生拮抗作用，可以混合培養(yǎng)[14]。

1.2.8 菌肥發(fā)酵

以平菇菌糠作為菌肥的基質(zhì)載體，采用半固態(tài)發(fā)酵工藝制備菌糠菌肥。將菌種按5%的接種量接種至已滅菌的半固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于30 ℃、200 r/min的恒溫搖床中發(fā)酵 6 d即得復(fù)合微生物菌肥[3,15-16]，而陰性對照組中僅加入5%的NBRIP培養(yǎng)基。實驗共制得9種不同的單一菌或混合菌發(fā)酵的菌肥及1個陰性對照組肥料，編號分別為G1～G10，其中G1～G5為單一菌制備的菌肥，分別接種的是菌株YX、臺灣假單胞菌P1、臺灣假單胞菌P3、成團泛菌 ZB、TP菌；G6～G9為混合菌制備的菌肥，分別接種的是菌株YX和臺灣假單胞菌 P1的等體積混合菌、菌株YX和臺灣假單胞菌 P3的等體積混合菌、菌株YX和成團泛菌ZB的等體積混合菌、菌株YX 和TP菌的等體積混合菌；陰性對照組編號為G10。

1.2.9 菌肥的含氮量、可溶性磷含量和活菌數(shù)檢測

黏稠的半固體狀菌肥加入等體積的去離子水，密封經(jīng)充分振蕩后離心取上清液，采用磷釩鉬黃比色法測定上清液中的可溶性磷含量，并采用稀釋涂布平板法對其中的微生物數(shù)量進行計數(shù)，稱取一定量的菌肥，采用凱氏定氮法測定樣品中的總氮量[9]。

1.2.10 盆栽實驗

盆栽用土取自武漢科技大學(xué)青山校區(qū)圖書館后方空地，采集深度距地表約10 cm，將所采土壤除去石塊等雜物后研磨，過2 mm篩。選擇20株株高為2.5～4.5 cm、莖直徑為0.25～0.35 cm、葉數(shù)為10～15片、根長為5～7 cm的辣椒苗，隨機分為 10組，每組2株辣椒苗種植于同一個花盆中，每個花盆中填入土壤4 kg，并澆水350 mL，在距土壤表層60～100 mm以下，加入40 g經(jīng)不同處理制備的菌肥，實驗均在室外自然條件下進行。此外，在移栽辣椒苗前，測量辣椒苗的株高、莖直徑、葉片數(shù)、葉長、葉片最大寬度和根長等參數(shù)，記為初始數(shù)據(jù)，葉片面積按照0.75倍葉片長度與葉片最大寬度的積計算[17]。辣椒苗的根部浸潤半小時后種到土壤中，辣椒苗生長期間不再加入菌肥，僅根據(jù)土壤情況澆水。當辣椒苗長出新葉之后，每隔3 d進行一次數(shù)據(jù)測量，減去初始數(shù)據(jù)以求得相關(guān)參數(shù)的變化量。培養(yǎng)12 d以后，將辣椒苗拔起測量其株高和根長，并烘干稱量獲得總干重數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株YX的篩選及鑒定

從辣椒根際處采集的土壤中，以稀釋涂布的方式分離純化獲得可以在Ashby無氮瓊脂平板上生長的菌株YX，初步推斷菌株YX具有固氮能力。

菌株YX在LB固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)2 d后，形成淡黃色且不透明、圓形、中間隆起、邊緣整齊、表面光滑濕潤、易于挑取的菌落，在LB半固體培養(yǎng)基中的穿刺實驗表明該菌株為好氧菌。

光學(xué)顯微鏡觀察顯示，菌株YX為可運動的桿狀細菌，其革蘭氏染色及孔雀綠染色結(jié)果均呈陰性。

菌株YX及嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)[18-21]的生理生化特征如表1所示。由表1可見，菌株YX接觸酶為陽性，氧化酶為陰性，它不能水解淀粉和尿素，但能水解明膠、脂肪和酪素。菌株YX能夠還原硝酸鹽生成亞硝酸鹽，但不能水解培養(yǎng)基中的含硫氨基酸生成H2S，也不能酵解葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。IMViC試驗結(jié)果顯示菌株YX可以產(chǎn)生色氨酸酶分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，但其檸檬酸利用試驗、伏普反應(yīng)和甲基紅反應(yīng)的結(jié)果均呈陰性。此外，LB培養(yǎng)基中的菌株YX在37 ℃下生長狀況最好，在4 ℃和40 ℃條件下，光學(xué)顯微鏡中未觀察到該菌株的生長跡象。

提取菌株YX的基因組DNA為模板，進行16S rDNA的PCR擴增，對所得PCR產(chǎn)物進行1.0%瓊脂糖凝膠電泳，結(jié)果如圖1(a)所示，可見PCR產(chǎn)物位于1000 bp和2000 bp之間。將PCR擴增產(chǎn)物切膠回收獲得的產(chǎn)物(電泳結(jié)果見圖1(b))送交武漢擎科創(chuàng)新生物科技有限公司進行測序，獲得一段長為1447 bp的核苷酸序列，利用NCBI數(shù)據(jù)庫提供的BlastN功能對此序列進行核苷酸比對，結(jié)果顯示菌株YX與窄食單胞菌屬Stenotrophomonas多株細菌的16S rDNA基因序列一致性均高達99%。根據(jù)16S rDNA序列的相似性，利用Clustal Omega和Mega 6軟件構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(如圖2所示)，可見菌株YX在系統(tǒng)發(fā)育上最接近于嗜麥芽窄食單胞菌。

根據(jù)伯杰氏手冊[19]，嗜麥芽窄食單胞菌歸屬于原核生物界變形菌門γ-變形菌綱黃單胞菌目黃單胞菌科窄食單胞菌屬(PhylumProteobacte-riaClassGammaproteobacteriaOrder Xanthomonadales FamilyXanthomonadaceaeGenusStenotrophomonas)，其菌體是直或略彎的桿菌，有鞭毛，可以運動，不能積累PHB，菌落顏色為黃色或綠黃色。該菌能夠?qū)⑾跛猁}還原成亞硝酸鹽，但不發(fā)生反硝化作用。菌株的氧化酶、精氨酸雙解酶檢測結(jié)果均為陰性，但接觸酶、脂肪水解、明膠液化檢測結(jié)果為陽性。在LB培養(yǎng)基中，菌株的最適生長溫度為35 ℃，菌株在4 ℃和41 ℃溫度下不能生長。由Bashandy等[20]的報道可知，分離的嗜麥芽窄食單胞菌SR1是革蘭氏陰性桿菌，不能產(chǎn)芽孢，可運動，該菌在瓊脂平板上培養(yǎng)48 h后，形成圓形、光滑、有凸起、有完整邊緣的菌落，可以水解明膠、酪蛋白，不能水解淀粉和尿素，菌株的接觸酶和氧化酶檢測結(jié)果為陽性，精氨酸雙解酶檢測結(jié)果為陰性，該菌能夠產(chǎn)生吲哚，硫化氫試驗和反硝化試驗結(jié)果呈陰性。此外，Amoli等[21]對分離的20株嗜麥芽窄食單胞菌生理生化特征的研究表明，菌株的吲哚、甲基紅、伏普、硫化氫、糖酵解、淀粉和尿素水解實驗結(jié)果均為陰性，接觸酶和精氨酸雙解酶檢測結(jié)果均為陽性，20株測試菌的氧化酶檢測結(jié)果中25%呈陽性，其余為陰性。本研究中菌株YX的形態(tài)學(xué)、生理生化特征與上述報道中有關(guān)嗜麥芽窄食單胞菌的描述幾乎一致，結(jié)合16S rDNA鑒定結(jié)果，菌株YX應(yīng)歸屬于嗜麥芽窄食單胞菌。

表1 菌株的生理生化特征

(a)16S rDNA PCR擴增產(chǎn)物 (b)回收產(chǎn)物

圖2 根據(jù)菌株YX的16S rDNA基因序列構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹

2.2 菌株YX的溶磷、固氮、產(chǎn)吲哚乙酸能力

2.2.1 菌株YX的溶磷能力

在初始pH值為7.0的NBRIP液體培養(yǎng)基中，菌株YX、臺灣假單胞菌P1和P3、成團泛菌ZB、TP菌等的溶磷量及菌液pH值隨培養(yǎng)時間的變化如圖3所示。由圖3(a)可見，當培養(yǎng)時間不超過12 h時，菌株YX的溶磷量隨時間的增加而迅速增大，繼續(xù)增加培養(yǎng)時間，菌株YX的溶磷量增幅減緩直至培養(yǎng)時間為120 h時達到峰值(750.53±8.2 mg/L)，之后，菌株YX的溶磷量隨時間的延長逐漸降低。從整體來看，5種菌株的溶磷能力以TP為最強，P3最弱，YX略勝于后者。此外，5種菌株溶磷量達到峰值所對應(yīng)的培養(yǎng)時間各不相同，這表明若不存在菌株間的拮抗效應(yīng)，當菌株YX與其它4種菌株混合發(fā)酵時，交錯出現(xiàn)的溶磷高峰將有助于提升混合菌對難溶性磷的溶解能力。由圖3(b)可見，在接種后的12 h以內(nèi)，菌株YX的菌液pH值從初始時的7.0急劇降至4.81，之后隨時間的延長呈緩慢下降趨勢，直至培養(yǎng)時間為108 h時達到最低值(4.56)，繼續(xù)增加培養(yǎng)時間，該值幾乎不變。至于另外4種菌株，P1、P3、ZB及TP菌液pH值最低時所對應(yīng)的培養(yǎng)時間分別為24、60、84、60 h，5種菌株中，TP菌的培養(yǎng)液pH最低值最小。綜合菌株的溶磷量及菌液pH變化曲線可以看出，菌株溶磷量與菌液pH值之間存在一定的負相關(guān)性。

(a)可溶性磷含量

2.2.2 菌株YX的固氮及產(chǎn)吲哚乙酸能力

已有研究發(fā)現(xiàn)，嗜麥芽窄食單胞菌具有較強的固氮能力[20,22-24],經(jīng)檢測，本研究篩選分離的菌株YX固氮量達到28.27±2.4 mg/L，且該菌株具有一定的產(chǎn)吲哚乙酸能力，吲哚乙酸分泌量可達35.67±1.6 μg/mL。

2.3 菌株的拮抗反應(yīng)結(jié)果

菌株YX分別與臺灣假單胞菌P1和P3、成團泛菌ZB、TP在LB瓊脂平板上兩兩混合接種培養(yǎng)3 d時的生長狀況如圖4所示。由圖4可見，菌株YX分別與P1、P3、ZB和TP等菌株在LB瓊脂平板上劃線的交叉部位都沒有出現(xiàn)生長抑制現(xiàn)象，這表明菌株間不存在拮抗作用，可以兩兩混合培養(yǎng)以發(fā)酵菌肥。

2.4 發(fā)酵菌肥的含氮量、可溶性磷含量及活菌數(shù)

單一菌和混合菌菌肥發(fā)酵完成后，取一定量的菌肥測定其中的總氮量、可溶性磷含量及活菌數(shù)，結(jié)果如表2所示。由表2可見，G1～G9菌肥組的總氮量、可溶性磷含量都比陰性對照組G10相應(yīng)值高，且差異性顯著(P<0.05)，表明所添加的功能微生物通過固氮、溶磷等代謝活動，提高了以菌糠為載體的肥料中可以利用的氮、磷含量。此外，兩兩混合型菌肥組G6～G9的總氮量、可溶性磷含量及活菌數(shù)除個別測量值外普遍高于單一型菌肥組G1～G5相應(yīng)值，表明利用功能微生物混合發(fā)酵制備的菌糠菌肥更具有優(yōu)勢，這些功能微生物通過綜合各自的代謝活動，相互影響和促進，能夠更高效地發(fā)揮固氮、解磷效應(yīng)，菌體生長繁殖也因此更為明顯。

(a)YX+P1 (b)YX+P3

表2 菌糠菌肥中氮含量、可溶性磷含量和活菌數(shù)

2.5 盆栽實驗結(jié)果

盆栽實驗所測相關(guān)參數(shù)值如表3所示。從表3可見，與G10組肥料相比，G1～G9組肥料均能明顯地促進辣椒苗的生長，其中效果最好的是G9組(YX+TP)肥料，利用該組肥料進行盆栽實驗培養(yǎng)12 d時，辣椒苗葉片數(shù)、葉片最大面積、株高、莖直徑及根長的變化量較G10組相應(yīng)值分別增大了466.67%、617.56%、134.07%、38.81%和195.84%，且所有的差異均達到顯著水平(P<0.05)。同時注意到，當盆栽實驗進行12 d時，復(fù)合型菌糠菌肥G6組(YX +P1)辣椒苗的葉片數(shù)、葉片最大面積、株高及根長變化量較單一型菌糠菌肥G1組(YX)相應(yīng)值分別增大了28.57%、121.53%、77.35%、45.99%， G7組(YX +P3)相應(yīng)值較后者分別增大了28.57%、289.40%、55.13%、61.16%，G8組(YX +ZB)辣椒苗的葉片最大面積、株高及根長變化量較G1組相應(yīng)值分別增大了111.57%、35.47%、55.81%，以上差異均達到顯著水平(P<0.05)，而促生效果最明顯的G9組辣椒苗的葉片數(shù)、葉片最大面積、株高、莖直徑及根長變化量較G1組相應(yīng)值也分別增大了142.86%、757.03%、82.06%、10.06%、121.88%，其中葉片最大面積、株高、根長的差異達到了顯著水平(P<0.05)。G6組辣椒苗的葉片數(shù)、葉片最大面積、株高、莖直徑及根長變化量較單一型菌糠菌肥G2組(P1)相應(yīng)值分別增大了12.5%、86.86%、30.10%、109.09%、18.48%，除葉片參數(shù)和根長變化量外，其余生長參數(shù)差異均達到顯著水平(P<0.05)，G9組相應(yīng)值較G5組(TP)相應(yīng)值分別增大了41.67%、117.71%、13.6%、2.77%、62.95%，其中葉片最大面積和根長的差異均達到顯著水平(P<0.05)。G7組辣椒苗的葉片最大面積、株高、莖直徑及根長變化量較G3組(P3)相應(yīng)值分別增大了108.16%、33.46%、58.17%、49.18%，除根長變化量外，其余生長參數(shù)差異均達到顯著水平(P<0.05)，G8組相應(yīng)值也比G4組(ZB)相應(yīng)值分別增大了26.46%、0.96%、39.32%、37.95%，其中葉片最大面積和莖直徑差異均達到顯著水平(P<0.05)。此外，通過比較各組盆栽實驗進行12 d時植物的總干重可知，與G10組相比，G1～G9組菌糠菌肥能明顯地增加辣椒苗的干重，相應(yīng)增幅分別為106.01%、10.51%、49.18%、97.40%、248.42%、252.35%、200.62%、170.47%和308.29%，差異均達到了顯著水平(P<0.05)，進一步分析增幅數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，相比單一型菌肥，復(fù)合型菌肥能更顯著地增加辣椒苗的干重，差異均達到顯著水平(P<0.05)。

表3 盆栽實驗結(jié)果

綜合盆栽實驗結(jié)果表明，無論是單一型還是復(fù)合型菌糠菌肥，其對植物的促生效應(yīng)都比作為對照的菌糠組更加明顯，其中，以嗜麥芽窄食單胞菌YX和溶磷真菌TP混合發(fā)酵所制復(fù)合型菌肥對辣椒苗的促生作用最佳。另外，復(fù)合型菌糠菌肥對植物的促生效果較相應(yīng)的單一型菌糠菌肥更加明顯。

3 結(jié)論

(1)從辣椒根際采集的土樣中分離得到菌株YX，經(jīng)鑒定該菌株為嗜麥芽窄食單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)。

(2)菌株YX除了可以固氮(固氮量高達28.27±2.4 mg/L)外，還能夠溶解難溶性磷酸鹽(溶磷量高達750.53±8.2 mg/L)以及分泌植物生長激素吲哚乙酸(分泌量高達35.67±1.6 μg/mL)。

(3)固氮菌株YX與四種溶磷微生物之間不存在拮抗作用，由菌株YX分別與四種溶磷微生物兩兩混合發(fā)酵制備的復(fù)合型菌糠菌肥組的總氮量、可溶性磷含量及活菌數(shù)要高于單一型菌糠菌肥組相應(yīng)值，表明復(fù)合型菌糠菌肥能夠更高效地發(fā)揮固氮、解磷效應(yīng)，并促進菌體的生長繁殖。

(4)固氮菌株YX和溶磷微生物混合發(fā)酵所制復(fù)合型菌糠菌肥對植物的促生效果明顯優(yōu)于單一型菌糠菌肥，本研究中以固氮菌株YX和溶磷真菌Talaromycespurpureogenus混合發(fā)酵所制復(fù)合型菌肥對辣椒苗的促生效果最佳。