復合微生態(tài)制劑對高日齡蛋雞生產(chǎn)性能及糞便中微生物的影響

郝小靜，白光燁，劉開東，馮永勝

（青島市畜牧工作站，山東青島 266041）

目前我國蛋雞存欄量和雞蛋產(chǎn)量已穩(wěn)居世界第一[1]。隨著農(nóng)業(yè)機械化和現(xiàn)代化的推進，蛋雞養(yǎng)殖密度增大，引發(fā)產(chǎn)蛋率下降、料蛋比上升、淘汰日齡提前等問題[2]，尤其到產(chǎn)蛋后期時，蛋雞生理機能出現(xiàn)退化，生產(chǎn)性能下滑[3]，抗病力下降，使得其產(chǎn)蛋性能無法得到有效發(fā)揮[4]，主要原因是其腸道健康障礙[5]。對于蛋雞而言，腸道是預防疾病感染的重要基礎(chǔ)[6]，其中腸道菌群是腸道重要的組成部分，與宿主的免疫功能有著密切聯(lián)系[7-8]，腸道菌群失衡導致的蛋雞發(fā)病越來越嚴重[9]。相關(guān)研究表明，益生菌定植于腸道中可優(yōu)化腸道微生態(tài)平衡，形成生物學屏障[10]，提高動物機體免疫力[11]。孫浩政等[12]通過在蛋雞飲水中添加植物乳桿菌可顯著提高平均蛋重，降低死淘率。Mountzouris 等[13]研究發(fā)現(xiàn)，日糧添加屎腸球菌飼喂蛋雞可顯著增加蛋雞的產(chǎn)蛋量和蛋殼質(zhì)量，提高營養(yǎng)物質(zhì)的駐留時間，改善蛋雞營養(yǎng)物質(zhì)消化率，并減少糞便中大腸桿菌的數(shù)量。植物乳桿菌具有提高畜禽生產(chǎn)性能和抗病力的功能，其代謝產(chǎn)物（如有機酸等）具有抑菌能力，維持腸道健康[14]。屎腸球菌可定植腸道，可競爭性地抑制致病菌的繁殖，刺激畜禽腸道，提高黏膜免疫力[15]。蛋雞的產(chǎn)蛋期可分為產(chǎn)蛋前期、產(chǎn)蛋高峰期、產(chǎn)蛋后期，產(chǎn)蛋后期約占整個產(chǎn)蛋期的一半，產(chǎn)蛋后期的生產(chǎn)性能深刻影響著蛋雞養(yǎng)殖的經(jīng)濟效益[16]。目前，微生態(tài)制劑畜禽養(yǎng)殖中研究較多，但對于高日齡蛋雞生產(chǎn)性能的影響報道較少。本試驗以500日齡海蘭蛋雞為研究對象，旨在研究復合微生物制劑對高日齡蛋雞的生產(chǎn)性能及糞便中微生物的影響，為復合微生物制劑在蛋雞產(chǎn)蛋后期的應用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 復合微生態(tài)制劑由青島百奧安泰生物科技有限公司提供，其有效益生菌主要包括植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）和屎腸球菌（Enterococcus faecium），活菌數(shù)≥109CFU/mL。

1.2 復合微生態(tài)制劑中益生菌分離、鑒定 采用平板稀釋涂布法對樣品菌液中L.plantarum和E.faecium進行分離培養(yǎng)。用無菌水將樣品菌液進行稀釋，涂布于MRS 平板，37℃條件下培養(yǎng)48 h。挑取平板上的單菌落，送上海派森諾生物科技有限公司進行16S rDNA 序列測定，使用MEGA7.0 軟件進行系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建，確定平板上單菌落的種屬特征。

1.3 復合微生態(tài)制劑中益生菌理化指標檢測 在含有2%CaCO2的MRS 培養(yǎng)基上，接種分離得到的L.plantarum和E.faecium，37℃培養(yǎng)24 h，觀察2 株微生物產(chǎn)生溶鈣圈的大小。參考《食品pH 值的測定》（GB 5009.237-2016）規(guī)定的方法，使用校準后的pH 計檢測樣品菌液的pH。

1.4 復合微生態(tài)制劑中益生菌抑菌能力鑒定 以大腸桿菌（Escherichia coli）為指示菌，采用over-lay 法[17]，將含有大腸桿菌的軟瓊脂（0.8%）傾覆于點種L.plantarum和E.faecium的MRS 平板上，37℃培養(yǎng)24 h，觀察2株微生物產(chǎn)生抑菌圈的大小。

1.5 試驗動物及日糧組成 試驗在青島山美生態(tài)農(nóng)業(yè)有限公司開展。選取500 日齡、體重2.3 kg 左右、健康的海蘭蛋雞1 000 羽，分為2 組，每組10 個重復，每個重復50 羽。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗組在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上添加復合微生態(tài)制劑（4 mL/kg）?；A(chǔ)日糧配方和營養(yǎng)成分見表1。每天喂料3 次，自由采食和飲水。其他飼養(yǎng)管理按照蛋雞場常規(guī)流程進行。預試期7 d，正試期53 d。

表1 日糧配方和營養(yǎng)成分（風干基礎(chǔ)）

1.6 生產(chǎn)性能測定 試驗期間每天以重復為單位記錄產(chǎn)蛋重量、產(chǎn)蛋個數(shù)、平均蛋重、每羽日均采食量、平均日產(chǎn)蛋量，每周按重復計算產(chǎn)蛋率、破蛋率、臟蛋率、畸形蛋率，試驗結(jié)束時計算總產(chǎn)蛋量、料蛋比、死淘率。

平均日產(chǎn)蛋量（g）=總產(chǎn)蛋量（g）/飼養(yǎng)天數(shù)

料蛋比=總耗料量（kg）/總產(chǎn)蛋量（kg）

產(chǎn)蛋率=總產(chǎn)蛋數(shù)/（飼養(yǎng)天數(shù)×總雞數(shù)）×100%

每羽日均采食量（g）=（上料量-剩料量）/總雞數(shù)

1.7 糞便中的微生物含量 采集菌液使用后的蛋雞新鮮糞便裝入封口袋，放入冰盒中。使用生理鹽水進行倍比稀釋，用平板稀釋涂布法計數(shù)樣品菌液中乳酸菌（Lactic Acid Bacteria，LAB）、E.coli和沙門氏菌（Salmonella）的活菌數(shù)，以未使用樣品菌液的蛋雞糞便作為對照。其中，LAB 采用MRS 平板涂布，37 ℃培養(yǎng)48 h，進行菌落計數(shù)。E.coli采用伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基進行涂布，Salmonella采用亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基進行涂布，37℃培養(yǎng)24 h，進行菌落計數(shù)。

1.6 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)采用Excel 工作表進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，采用SPSS 21.0 統(tǒng)計軟件進行獨立樣本t檢驗，試驗結(jié)果以平均值±標準差表示。P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 復合微生態(tài)制劑中益生菌的分離、鑒定 對復合微生態(tài)制劑中益生菌進行測序并構(gòu)建進化樹，初步確定樣品菌液中的2 株菌分別為L.plantarum（圖1 A）和E.faecium（圖1 B）。

圖1 樣品菌液中菌落的系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建

2.2 復合微生態(tài)制劑中益生菌理化指標檢測 經(jīng)檢測，樣品菌液pH 為3.9。如圖2 結(jié)果顯示，L.plantarum產(chǎn)生了較明顯的溶鈣圈，而E.faecium產(chǎn)生的溶鈣圈極不明顯，表明發(fā)酵液中的有機酸主要由L.plantarum產(chǎn)生。

圖2 L.plantarum 菌落的溶鈣圈驗結(jié)果

2.3 復合微生態(tài)制劑中益生菌抑菌能力鑒定 如圖3 顯示，E.faecium對E.coli可產(chǎn)生明顯的抑菌圈，而L.plantarum對E.coli的抑制活性不明顯。結(jié)果表明樣品菌液對E.coli的抑制作用主要由E.faecium產(chǎn)生。

圖3 E.faecium 菌落的抑菌結(jié)果

2.4 復合微生態(tài)制劑對動物生產(chǎn)性能的影響 如表2 顯示，試驗組平均日產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率在72～75 和76～79周齡較對照組均有提高（P＜0.01）；試驗組每羽日均采食量與對照組無顯著差異；兩組破蛋率、臟蛋率、畸形蛋率、平均蛋重差異不大；對照組料蛋比為2.17，試驗組料蛋比為2.09，試驗組相比于對照組下降0.08，試驗組死淘率較對照組降低0.2%。試驗組60 d 的總產(chǎn)蛋量較對照組提高了68.24 kg。結(jié)果表明，日糧中添加復合微生態(tài)制劑可以顯著提高高日齡海蘭蛋雞的產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率，降低料蛋比。

表2 復合微生態(tài)制劑對蛋雞產(chǎn)蛋后期生產(chǎn)性能的影響

2.3 復合微生態(tài)制劑對蛋雞糞便中微生物的影響 如表3顯示，試驗組蛋雞糞便中的LAB 達到2.5×106CFU/g，比對照組提高了6 倍，而E.coli較對照組降低了90.3%，在2 組樣品中均未檢出Salmonella。

表3 樣品菌液使用前后蛋雞糞便中微生物數(shù)量變化 lg CFU/g

3 討 論

產(chǎn)蛋后期在整個產(chǎn)蛋周期中占比較高，因此提高蛋雞產(chǎn)蛋后期的生產(chǎn)性能具有重要的經(jīng)濟價值。研究表明，隨著海蘭蛋雞產(chǎn)蛋時間延長，所產(chǎn)蛋的蛋重會逐漸增大[18～19]。蛋形指數(shù)從27～67 周齡呈顯著或極顯著增大[20]?，F(xiàn)代商品雞在72 周齡進入淘汰期[21]。本批次蛋雞在產(chǎn)蛋高峰期時的平均蛋重可達56 g，產(chǎn)蛋率為94%，每羽雞平均日產(chǎn)蛋52.64 g，試驗階段（產(chǎn)蛋后期）平均蛋重可達63 g，試驗組飼喂添加復合微生態(tài)制劑的日糧，產(chǎn)蛋率上升至83.15%，每羽雞平均日產(chǎn)蛋可達52.38 g，該產(chǎn)蛋水平與高峰期蛋雞產(chǎn)蛋水平相持平。

高日齡蛋雞的抗病能力下降，應激敏感度增強，容易受到病原微生物的侵害進而影響生產(chǎn)。E.coli是蛋雞體內(nèi)的一種條件致病菌，目前因高密度集約化養(yǎng)殖增加了雞群的發(fā)病率，同時抗生素的長期使用導致大腸桿菌耐藥日益嚴重，給我國蛋雞養(yǎng)殖帶來了巨大經(jīng)濟損失[22]。植物乳桿菌作為動物腸道內(nèi)常見益生菌[23]，通過定植于腸道進行生態(tài)占位，排斥病原菌，從而保護腸道健康[24]，其代謝產(chǎn)物如有機酸、細菌素等具有抑菌能力，添加至飼料中可改善畜禽生產(chǎn)性能[25]。屎腸球菌屬于乳酸菌中的腸球菌，定植于畜禽腸道后能競爭和抑制不耐酸致病菌的繁殖，同時參與調(diào)節(jié)動物機體的非特異性免疫，提高動物免疫力[26]。本試驗從復合微生態(tài)制劑中分離得到2 株益生菌，L.plantarum在產(chǎn)酸能力中表現(xiàn)突出，而E.faecium在抑制E.coli方面表現(xiàn)突出，兩者的聯(lián)合使用可能產(chǎn)生雙重的益生效果。復合微生態(tài)制劑飼喂雞群后，2 種益生菌可定植于雞腸道中，產(chǎn)生多種營養(yǎng)物質(zhì)（如維生素、氨基酸等），既能豐富日糧的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)，也能提高飼料利用率[27]，同時可抑制有害菌與腸上皮細胞的黏附，阻斷病原菌的受體位置[28]，參與調(diào)控腸道黏膜免疫，其代謝產(chǎn)物可以降低腸道pH，拮抗病原菌生長[29]，減少疾病發(fā)生，進而提高雞群的生產(chǎn)性能。楊亞晉等[30]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加植物乳桿菌后，其代謝產(chǎn)物能抑制大腸桿菌，減少腸道內(nèi)大腸桿菌含量，從而有效恢復攻毒大腸桿菌蛋雞的產(chǎn)蛋率。王婷婷等[31]研究發(fā)現(xiàn)，屎腸球菌對腸道中致病性大腸桿菌K88、K99、金黃色葡萄球菌、巴氏桿菌及沙門氏菌均具有抑制作用，其中大腸桿菌K99 活性最低，說明屎腸球菌對其有較好的抑制效果。褚素喬等[32]研究發(fā)現(xiàn)，蛋雞飼料中添加益生菌微生態(tài)制劑可顯著提高蛋雞產(chǎn)蛋率和蛋雞抗病力，提升蛋品質(zhì)，降低料蛋比。本試驗結(jié)果也表明，在日糧中添加復合微生態(tài)制劑飼喂高日齡蛋雞，可以提高蛋雞生產(chǎn)性能，提高腸道內(nèi)益生菌含量，降低有害菌含量。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果表明，日糧添加復合微生態(tài)制劑（4 mL/kg）飼喂500 日齡海蘭蛋雞，可顯著提高平均日產(chǎn)蛋量和產(chǎn)蛋率，降低料蛋比，提高糞便中植物乳桿菌的含量，降低糞便中大腸桿菌含量，減少死淘，充分發(fā)揮高日齡蛋雞生產(chǎn)性能，延長蛋雞淘汰日齡。