獅頭鵝VIPR1 基因cDNA 全長克隆及組織表達(dá)研究

李 瑩，文正亞，羅成龍，李婉婧，何靜怡，張 盼，陳 鵬，范海霞，周 敏

(1.畜禽育種國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省畜禽育種與營養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東省動(dòng)物育種與營養(yǎng)公共實(shí)驗(yàn)室，廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所，廣東廣州 5 106401；2.南昌師范學(xué)院生物技術(shù)研究所&江西地方雞種遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西南昌 330029)

我國是世界養(yǎng)鵝大國，鵝品種資源豐富。獅頭鵝是我國大型肉鵝的代表，具有體型大、生長快、飼養(yǎng)期短、耐粗飼、飼料轉(zhuǎn)化效率高、適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)[1-2]，但其繁殖性能低下，平均235 日齡開產(chǎn)，因母鵝就巢性強(qiáng)，每產(chǎn)一窩蛋就巢1 次，就巢期為25～30 d，故年產(chǎn)蛋數(shù)僅26～29 枚[1]。繁殖性能低成為制約獅頭鵝規(guī)模飼養(yǎng)及產(chǎn)業(yè)發(fā)展的核心因素。

下丘腦-垂體-性腺軸（Hypothalamic-Pituitary-Gonadal Axis，HPG）調(diào)控動(dòng)物生殖系統(tǒng)的發(fā)育和功能維持，禽類的繁殖性能受HPG 軸的高度調(diào)控，催乳素（Prolactin，PRL）是引起禽類就巢行為發(fā)生和維持的關(guān)鍵激素，血管活性腸肽（Vasoactive Intestinal Peptide，VIP）在家禽體內(nèi)是一種生理性的PRL 釋放因子，其生物作用主要通過位于細(xì)胞膜上的受體介導(dǎo)[3-4]。雞[5-9]、火雞[10-13]、鴨[14-16]、鵪鶉[17-18]等家禽中生理生化以及突變位點(diǎn)與繁殖性狀相關(guān)性等研究均證明了該軸上的VIP及其I 型受體（Vasoactive Intestinal Peptide Receptor 1，VIPR1）基因是影響家禽產(chǎn)蛋數(shù)、就巢性以及開產(chǎn)日齡等繁殖性狀的關(guān)鍵候選基因。

在四川白鵝[19]、揚(yáng)州鵝[20-21]、鴻雁[22]、浙東白鵝[23]、獅頭鵝[24]研究中發(fā)現(xiàn)VIP與VIPR1基因mRNA 表達(dá)水平以及血清中VIP 濃度都隨著鵝不同繁殖時(shí)期變化而改變，不同品種不同繁殖階段也有顯著性差異，從生理生化角度證明了VIPR1基因參與了鵝繁殖性能的調(diào)控。目前，VIPR1基因cDNA 序列已在雞[5]、火雞[12]、連城白鴨[14]、黑番鴨[15]、鵪鶉[17]中被克隆，該基因在鵝中僅有浙東白鵝部分編碼區(qū)參考序列[23]，因此尚未有該基因功能深入研究報(bào)道。本研究利用RT-PCR、5'RACE和3'RACE 成功獲得獅頭鵝VIPR1基因cDNA 全長序列，并采用多種生物信息學(xué)分析軟件分析所獲序列及其編碼的蛋白，利用qRT-PCR 完成獅頭鵝VIPR1基因的組織表達(dá)譜分析，為深入開展VIPR1基因的功能研究，揭示該基因?qū)统?、產(chǎn)蛋等繁殖性狀的影響提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 取廣東饒平縣財(cái)佳農(nóng)業(yè)科技有限公司獅頭鵝保種群115 日齡獅頭鵝12 只（公母各半），屠宰后立即采集大腦、小腦、下丘腦、垂體、肉瘤、咽袋、胸肌、腿肌、心、肝、脾、肺、腎、肌胃、腺胃、十二指腸、胸腺、法氏囊、卵巢/睪丸、輸卵管/輸精管、背皮、腹脂等22 種組織，樣品保存于RNAlater 中帶回實(shí)驗(yàn)室，在-80℃冰箱中保存，所有組織用于基因表達(dá)規(guī)律分析。

RNAlater（Invitrogen，賽默飛世爾科技＜中國＞有限公司），Trizol、DNaseI、TransScript?First-Strand cDNA Synthesis SuperMix、感受態(tài)細(xì)胞DH5α、DEPC、瓊脂糖、DNA 膠回收試劑盒、DL2000 Marker 等均購自北京全式金生物技術(shù)有限公司。主要試劑包括：KOD FX (1.0 U/μL)（東洋紡上海生物科技有限公司），SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit 與Advantage?2 polymerase Mix（Clontech，美國），pMD18-T載體（TaKaRa，大連），Taq Universal SYBR Green Supermix 與CFX96TMC1000 TouchTM Thermal Cycles（BIO-RAD，美國）。

1.2 獅頭鵝各組織總RNA 提取及cDNA 合成 各組織總RNA 采用傳統(tǒng)Trizol 法提取，用DNaseI 對(duì)總RNA進(jìn)行消化，并用瓊脂糖凝膠電泳和NanoDrop 2000 超微量分光光度計(jì)（Thermo，美國）檢測其完整性以及純度和濃度，保存于-80℃冰箱備用。取適宜體積總RNA（約2 μg）合成cDNA 第一鏈，并于-20℃保存。雞、鵪鶉VIPR1基因在胃腸道表達(dá)量較高，因此選擇十二指腸組織用于cDNA 全長擴(kuò)增。

1.3 引物設(shè)計(jì)與合成 根據(jù)GenBank 中雞（登錄號(hào)NM_001097523）、鵪鶉（登錄號(hào)JF441057）等 的VIPR1 序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物P1 與P2 用于獲取cDNA部分序列；根據(jù)P1 與P2 所獲序列設(shè)計(jì)P3、P4 引物用于擴(kuò)增CDS 其他序列，引物P5 和P6 分別為5'RACE和3'RACE 的特異性引物；引物P7 用于各組織表達(dá)分析。根據(jù)鵝的GAPDH序列（登錄號(hào)MG 674174）設(shè)計(jì)引物P8，用于各組織中GAPDH表達(dá)檢測。使用GENETOOL 軟件設(shè)計(jì)上述引物，并由湖南擎科生物技術(shù)有限公司合成，所有擴(kuò)增引物如表1 所示。

表1 VIPR1 基因克隆及表達(dá)分析所用引物

1.4 獅頭鵝VIPR1基因cDNA 全長克隆 以十二指腸組織總RNA 獲?。ǖ谝绘湥ヽDNA 用于VIPR1 編碼區(qū)、5'-UTR 和3'-UTR 序列擴(kuò)增。cDNA 反轉(zhuǎn)錄、PCR 擴(kuò)增體系及程序參照周敏等[17]及RACE 反應(yīng)按照SMARTerTMRACE 試劑盒步驟進(jìn)行。PCR 產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，使用凝膠回收試劑盒回收、純化目的片段，將純化后的目的片段與pMD18-T 連接、轉(zhuǎn)化，培養(yǎng)后進(jìn)行PCR 鑒定，挑取陽性菌落送于北京湖南擎科生物科技有限公司進(jìn)行雙向Sanger 測序。

1.5 獅頭鵝VIPR1基因cDNA 生物信息學(xué)分析 獲得的序列用NCBI 網(wǎng)站（http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）上BLASTN 在線對(duì)比工具檢索VIPR1基因的核苷酸序列；用DNAStar 中的Seqman 進(jìn)行拼接，拼接后的cDNA 序列的開放閱讀框（Open Reading Frame，ORF）推斷、不同物種氨基酸序列分析、蛋白結(jié)構(gòu)功能預(yù)測分析、系統(tǒng)發(fā)生樹構(gòu)建參考周敏等[17]和馬騰等[25]方法進(jìn)行。

1.6 熒光定量PCR 檢測獅頭鵝VIPR1基因的組織表達(dá) 在CFX96TM C1000 TouchTM Thermal Cycles 熒 光定量PCR 儀上分別對(duì)獅頭鵝公鵝與母鵝的22 種組織VIPR1mRNA 豐度進(jìn)行定量檢測，以GAPDH作為內(nèi)參進(jìn)行校正。qRT-PCR 反應(yīng)體系參照吳磊等[26]配制，采用20 μL 反應(yīng)體系：1 μL cDNA 模板，12.5 μL 2 × Q-PCR SYBR Green Mix，10 μmol/L 上下游引物各0.5 μL，其余用ddH2O 補(bǔ)齊。反應(yīng)程序?yàn)?4℃ 4 min，94℃ 30 s、57℃ 30 s、72℃ 30 s，40 個(gè)循環(huán)后進(jìn)入熔解曲線程序55℃～95℃，升溫速度0.5℃/10 s。每個(gè)樣本均設(shè)3 個(gè)重復(fù)。

1.7 統(tǒng)計(jì)分析 以獅頭鵝公鵝小腦的ΔCt 值作為不同組織間差異定量分析的參照，采用2-ΔΔCt法分析VIPR1基因在獅頭鵝公母各組織中的相對(duì)表達(dá)量。使用SPSS 22.0 對(duì)定量結(jié)果進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05 表示差異顯著，P＞0.05 表示差異不顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 獅頭鵝VIPR1基因cDNA 克隆及序列分析 對(duì)獅頭鵝VIPR1基因cDNA 編碼區(qū)分別用引物P1～P4 進(jìn)行擴(kuò)增，電泳結(jié)果如圖1 所示，分別得到288、415、657、707 bp 的擴(kuò)增產(chǎn)物，與目的片段大小一致，測序后經(jīng)比對(duì)確認(rèn)為VIPR1序列；利用引物P5、P6 分別進(jìn)行5'和3'RACE 擴(kuò)增，分別獲得421、767 bp 的目的條帶，經(jīng)比對(duì)確認(rèn)為VIPR1的5'和3'端序列。將6 條序列拼接后獲得長度為2 402 bp 的獅頭鵝VIPR1cDNA 全長序列。

序列分析結(jié)果表明，獅頭鵝VIPR1基因cDNA 序列 中CDS 區(qū) 為1 338 bp，5'-UTR 為203 bp，3'-UTR為861 bp，3'-UTR 區(qū)包含1 個(gè)ATAAA 加尾信號(hào)（圖2）。該基因編碼445 個(gè)氨基酸。本實(shí)驗(yàn)所獲VIPR1基因編碼區(qū)序列與浙東白鵝的部分序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)4 個(gè)堿基的變異：A347G、C702T、G711A 與C1134T 分布在兩個(gè)鵝種VIPR1基因編碼區(qū)196～1 152 bp，其中A347G的突變?cè)斐? 個(gè)氨基酸的變異(116N →S)。

圖2 獅頭鵝VIPR1 cDNA 核苷酸及氨基酸序列

2.2 物種間VIPR1基因的一致性及進(jìn)化分析 獅頭鵝VIPR1基因的CDS 區(qū)序列與其他禽類的12 條序列一致性較高，均超過89.4%，其中和鴻雁一致性最高為99.8%，其次是浙東白鵝、黑番鴨，分別為99.6% 和97.2%，與斑胸草雀一致性最低為89.4%；與哺乳動(dòng)物、兩棲類、魚類等14 個(gè)物種的一致性在67.0%～72.9%，其中與人、大鼠的最低，均為67.0%，與非洲爪蟾一致性最高，為72.9%（表3）。VIPR1基因氨基酸序列一致性分析發(fā)現(xiàn)，獅頭鵝與哺乳動(dòng)物、爬行動(dòng)物和魚類一致性均較低在65.5%～75.7%，與禽類的一致性均較高在90.1%～100.0%，其中與鴻雁一致性最高（100.0%），其次是浙東白鵝（99.7%），與獼猴和山羊的一致性最低（65.5%）（表3）。

為了分析獅頭鵝VIPR1與其他物種在進(jìn)化上的關(guān)系，基于各物種VIPR1的氨基酸序列，利用MEGA 6.0構(gòu)建進(jìn)化樹，結(jié)果表明系統(tǒng)發(fā)育樹分為四大類，哺乳動(dòng)物、禽類、爬行動(dòng)物和魚類各自分別為一類，符合物種進(jìn)化規(guī)律（圖3），其中禽類可分為5 支，獅頭鵝、浙東白鵝與鴻雁為一支，綠頭鴨、連城白鴨、黑番鴨、鳳頭潛鴨為一支，棕硬尾鴨為一支，雞、火雞與鵪鶉為一支，斑胸草雀與原鴿為一支（圖3）。

圖3 不同物種VIPR1 氨基酸序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹

2.3 獅頭鵝VIPR1 蛋白結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測 通過ExPASy 在線工具預(yù)測獅頭鵝VIPR1 蛋白特征，分析顯示，該蛋白分子質(zhì)量為51 107.02 ku，分子式為C2368H3601N589O614S30，理論等電點(diǎn)為8.56，摩爾消光系數(shù)為96 465，脂肪族系數(shù)為97.89，半衰期為30 h，不穩(wěn)定系數(shù)達(dá)43.05，推測該蛋白為偏堿性不穩(wěn)定的蛋白。VIPR1 蛋白質(zhì)包含20 種常見的氨基酸，其中天冬氨酸頻率最低（1.8%），亮氨酸頻率最高（10.1%），其他氨基酸出現(xiàn)頻率在2.7%～8.1%；帶負(fù)電荷的氨基酸殘基（Asp+Glu）有32 個(gè)，帶正電荷的氨基酸殘基（Arg+Lys）有39 個(gè)。疏水性預(yù)測表明獅頭鵝VIPR1 蛋白的總平均疏水性為0.362，推測該蛋白屬于疏水性蛋白（圖4-A）。Signal P 和TMHMM預(yù)測發(fā)現(xiàn)，VIPR1蛋白的N-端存在1 個(gè)由22 個(gè)氨基酸殘基組成的信號(hào)肽，序列為MKSARLRVLLPLLGCLLSAASS，分界位點(diǎn)在22和23 號(hào)氨基酸殘基間；包含7 個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)，分布在氨基酸序列的第133～380 號(hào)殘基（跨膜位點(diǎn)依次為133～155、168～187、207～229、241～263、287～309、330～348 和358～380）。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示該蛋白含有α-螺旋、β-折疊和環(huán)，分別占比44.27%、12.36% 和43.37%；具有6 個(gè)N-糖基化位點(diǎn)，6 個(gè)蛋白激酶C 磷酸化位點(diǎn)，4 個(gè)N-肉豆蔻?；稽c(diǎn)，2 個(gè)酪蛋白激酶II 磷酸化位點(diǎn)，1 個(gè)cAMP 和cGMP 依賴的蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)和2 個(gè)G 蛋白偶聯(lián)受體B 亞族特征序列。用SMART 對(duì)該蛋白的結(jié)構(gòu)域進(jìn)行預(yù)測發(fā)現(xiàn)，VIPR1 蛋白在6～17 氨基酸位形成了一個(gè)low complexity 結(jié)構(gòu)域，49～120 氨基酸位形成一個(gè)HormR 結(jié)構(gòu)域；7 個(gè)跨膜區(qū)域（圖4-B），與TMHMM Server 2.0 預(yù)測的位置一致。使用SWISS-MODEL 構(gòu)建了獅頭鵝VIPR1 蛋白三級(jí)結(jié)構(gòu)，由25～396 位氨基酸殘基構(gòu)成，與VIPR1 蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測基本一致（圖4-C）。

圖4 獅頭鵝VIPR1 蛋白結(jié)構(gòu)與功能分析

2.4 不同組織mRNA 表達(dá)分析結(jié)果 采用qRT-PCR 方法檢測VIPR1mRNA 在公母獅頭鵝中22 種組織的表達(dá)情況，以GAPDH為參照基因，以公鵝小腦組織的表達(dá)水平作為對(duì)照，結(jié)果如圖5 所示，VIPR1基因在公母獅頭鵝的多個(gè)組織中普遍表達(dá)，但表達(dá)模式具有性別差異。VIPR1基因在獅頭鵝的肺組織中表達(dá)水平最高分別為54.35 倍（公）與66.76 倍（母），其次為垂體分別為50.20 倍（公）與4.85倍（母）；肺與垂體組織的表達(dá)量在公獅頭鵝中高于其他各個(gè)組織（P＜0.01），肺組織的表達(dá)量在母獅頭鵝中高于其他各個(gè)組織（P＜0.01）；胸肌與腿肌中表達(dá)量在公母獅頭鵝中均極低（0.01～0.03 倍）。

表2 獅頭鵝與其他物種VIPR1 基因CDS 區(qū)的一致性分析

比較公母獅頭鵝VIPR1基因在22 種組織中表達(dá)量的差異發(fā)現(xiàn)，垂體、肉瘤、性腺、咽袋與肝這5 種組織中公鵝與母鵝的表達(dá)量有極顯著差異或顯著差異，在其他17 種組織中的表達(dá)量無顯著差異（圖5）。

圖5 獅頭鵝公母VIPR1 在22 種組織的相對(duì)表達(dá)量

3 討 論

自2001 年雞[5]、火雞[12-13]VIPR1基因全長cDNA 被成功克隆并報(bào)道其參與了繁殖性能的調(diào)控，隨后鴨[14-16]、鵪鶉[17]等禽類的VIPR1基因的cDNA 序列被相繼成功克隆，但缺乏鵝VIPR1基因cDNA 全長序列資料[23]。本研究通過RT-PCR 和RACE 技術(shù)成功獲得了獅頭鵝VIPR1基因cDNA 全長序列2 402 bp，由203 bp 5'-UTR、1 338 bp ORF 與861 bp 3'-UTR 組成，編碼445個(gè)氨基酸殘基。與GenBank 預(yù)測的鵝（swan goose）VIPR1CDS 相比，本研究獲得的VIPR1基因CDS 在5' 端增加了87 bp，多編碼27 個(gè)氨基酸，在1 251 bp CDS 序列中出現(xiàn)2 個(gè)堿基的變異（C702T、G711A），但這部分CDS 推導(dǎo)出來的氨基酸序列一致性為100.0%；與浙東白鵝相比[23]，獅頭鵝有4 個(gè)堿基的變異，其中C1134T 出現(xiàn)在獅頭鵝中，但這個(gè)變異是否是獅頭鵝特有以及這些堿基的差異是否會(huì)影響?yīng){頭鵝VIPR1基因?qū)Ψ敝承阅艿挠绊懶柽M(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)論證。Ensemble blast 分析結(jié)果表明該基因包含13 個(gè)外顯子，與雞的結(jié)果一致[6]；但雞中主要存在2 種剪接體[27]，而在本研究中未出現(xiàn)，與Ensemble 中swan gooseVIPR1預(yù)測的一致。獅頭鵝VIPR1基因核苷酸序列和氨基酸序列一致性與其他24 個(gè)物種相比，獅頭鵝VIPR1基因CDS與其他禽類一致性超過89.4%，其蛋白與其他禽類的一致性達(dá)到89.0%以上，表明該基因在禽類中高度保守；由進(jìn)化樹分析可知，獅頭鵝VIPR1 蛋白與禽類、兩棲類、哺乳動(dòng)物與魚類各自分別聚到一類。分析蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)及其理化特性是開展功能研究的基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明獅頭鵝VIPR1 蛋白為7 次跨膜、偏堿性不穩(wěn)定蛋白，其信號(hào)肽區(qū)域存在多處磷酸化和N-糖基化位點(diǎn)，其胞外域與跨膜域中與功能密切相關(guān)的保守性基序如“RLAK”、“IIRIL”、“PDI/V”、“WD”、“NVSR/K”、“GWS/T”等與VIPR1在其他物種上的研究結(jié)果相符[28-29]。這些功能域和結(jié)構(gòu)在進(jìn)化上的高度保守性暗示了獅頭鵝VIPR1基因具有與在其它物種類似的生物學(xué)功能。

在雞[5]、火雞[12-13]、鴨[14-16]與鵪鶉[17]等禽類中VIPR1基因位于垂體、下丘腦、小腸、肺等組織細(xì)胞膜上，且在垂體中高水平表達(dá)。VIP 與位于腺垂體細(xì)胞膜上的VIPR1 高親和力的結(jié)合是催乳素合成和分泌的第一步[13]。張響英等[24]研究發(fā)現(xiàn)HPG 軸中VIP基因mRNA 的表達(dá)水平與獅頭鵝催乳素分泌密切相關(guān)，催乳素是獅頭鵝就巢行為維持和發(fā)展的關(guān)鍵激素。劉毅[23]采用qRT-PCR 檢測了該基因在浙東白鵝第二產(chǎn)蛋周期：光刺激階段（休產(chǎn)期之后開始產(chǎn)蛋之前的恢復(fù)時(shí)期）、產(chǎn)蛋期（連續(xù)產(chǎn)蛋時(shí)期）、就巢期、光松弛階段與休產(chǎn)期5 個(gè)階段繁殖期的下丘腦、腸、胰、肺、垂體、卵巢、輸卵管、心、肝、腎10 種組織中的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)該基因在浙東白鵝整個(gè)繁殖周期各個(gè)組織中都有表達(dá)，在HPG 軸中就巢期垂體的表達(dá)量最高，變化趨勢(shì)與下丘腦VIP基因表達(dá)量和血液中PRL 濃度的變化一致。Zhu等[20-21,30]發(fā)現(xiàn)不同品種鵝在不同的光周期下VIPR1基因表達(dá)模式隨繁殖期的不同而變化，且不同品種鵝間表達(dá)量有顯著性差異。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，VIPR1基因在公母獅頭鵝22 種組織中均有表達(dá)，但表達(dá)水平不同，肺組織表達(dá)量最高，垂體次之，與劉毅[23]、Zhu 等[20-21,30]研究結(jié)果相同，進(jìn)一步揭示了VIPR1在獅頭鵝中參與了繁殖調(diào)控。在所檢測的HPG 軸中，公母獅頭鵝垂體VIPR1基因mRNA 表達(dá)量顯著高于其他2 個(gè)組織，與雞[5]、火雞[12]、鴨[14-15]和鵪鶉[17]中的結(jié)果基本一致，說明VIP 主要由位于垂體細(xì)胞膜上的VIPR1 介導(dǎo)從而調(diào)控PRL 功能；而性腺組織中表達(dá)量低可能是因試驗(yàn)所用獅頭鵝處于未開產(chǎn)階段所致。VIP 作為一種腦腸肽廣泛分布于循環(huán)、免疫、生殖、消化系統(tǒng)以及中樞、外周神經(jīng)系統(tǒng)，并且參與腦、肺、外周血管的血管舒張，以及消化道系統(tǒng)、支氣管、子宮平滑肌的松弛以及胚胎的形成[31]，本研究發(fā)現(xiàn)鵝肺組織中VIPR1基因表達(dá)水平極顯著的高于其他組織，與雞[5]、火雞[12]研究結(jié)果不同，推測該基因可能會(huì)影響鵝肺組織的功能，但需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)論證。

母鵝嚴(yán)重的就巢習(xí)性導(dǎo)致產(chǎn)蛋性能低下，目前對(duì)鵝繁殖性能的研究一般以母鵝為試驗(yàn)對(duì)象，集中在HPG軸候選基因的克隆及其在不同繁殖時(shí)期母鵝中的表達(dá)變化等，對(duì)公鵝的研究極少。研究表明催乳素受體基因mRNA 在公母雞下丘腦、垂體中的表達(dá)有性別差異，且公雞表達(dá)顯著或極顯著高于母雞[32]。但VIPR1基因mRNA 的表達(dá)是否在禽類有性別差異還未見報(bào)道，本研究以性成熟未達(dá)產(chǎn)蛋（115 日齡）公母獅頭鵝為對(duì)象，發(fā)現(xiàn)在所檢測的22 種組織中垂體、肉瘤、咽袋、肝以及睪丸/卵巢這5 個(gè)組織中的表達(dá)具有性別差異，在肉瘤、咽袋、肝、睪丸/卵巢4 種組織中母鵝VIPR1基因mRNA 表達(dá)量分別是公鵝的2.04、2.45、2.70、6.86 倍，在垂體中公鵝的表達(dá)量是母鵝的10.35 倍；5 種有性別差異表達(dá)的組織中垂體、性腺的差異最大，暗示在以后研究中為了提高鵝產(chǎn)蛋性能不應(yīng)只研究母鵝，還應(yīng)對(duì)公鵝加以關(guān)注。

4 結(jié) 論

本研究成功克隆了獅頭鵝VIPR1基因cDNA 全長序列，該序列長2 402 bp，包含1 338 bp 的CDS 區(qū)和203 bp 的5'-UTR 以 及861 bp 的3'-UTR 序 列，編 碼445 個(gè)氨基酸。VIPR1基因在公母獅頭鵝的多個(gè)組織中表達(dá)，其表達(dá)模式具有性別差異，其中肺、垂體組織中表達(dá)量較高。