浙江紅花油茶優(yōu)株篩選與綜合評(píng)價(jià)

董 樂，李 田，黃文印，王 波，徐林初，徐立安，溫 強(qiáng)

（1.江西省林業(yè)科學(xué)院 江西省油茶種質(zhì)資源保護(hù)與利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330032；2.南京林業(yè)大學(xué) 南方現(xiàn)代林業(yè)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 南京 210037）

油茶Camellia oleifera是山茶科Theaceae 山茶屬Camellia中種子含油率高，具一定經(jīng)濟(jì)栽培價(jià)值植物的總稱[1]。浙江紅花油茶Camellia chekiangoleosa，又名浙江紅山茶，是我國(guó)南方特有的油茶樹種[2]。作為油茶主栽品種之一，浙江紅花油茶花紅、果大，具有觀賞和油用雙重經(jīng)濟(jì)價(jià)值[3]，其分布面積和產(chǎn)量在中國(guó)位居第4 位[4]。與目前推廣主栽的普通油茶C.oleifera相比，浙江紅花油茶自然集中分布于江西、浙江、福建等地的高海拔山區(qū)[5]，其籽仁含油率普遍可達(dá)60%以上[6]，高油酸特性也是浙江紅花油茶油脂的普遍特點(diǎn)[7-8]，且其茶油品質(zhì)、品相及油穩(wěn)定性優(yōu)于一般茶油[9]和其他紅花茶油[10]。浙江紅花油茶在低海拔引種可以正常開花結(jié)實(shí)，現(xiàn)有分布資源主要以實(shí)生繁殖為主，沒有形成專門油用或觀賞的優(yōu)良品系[3]。

在浙江紅花油茶的諸多近緣種中，騰沖紅花油茶C.reticulata、廣寧紅花油茶C.semiserrata具一定的栽培面積，認(rèn)知度較高。騰沖紅花油茶已選育出了包括“云林1 號(hào)”[11]、“騰油12 號(hào)”[12]等幾個(gè)良種。廣寧紅花油茶的選優(yōu)工作業(yè)已啟動(dòng)[13]。作為具有巨大開發(fā)潛力的油茶樹種，浙江紅花油茶的品種選育研究亟待開展。目前，已制訂普通油茶良種選育行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)[14-15]，主要包括鮮果冠幅產(chǎn)量1 kg/m2以上，鮮出籽率40%以上，種仁含油率42%以上，油酸含量78%以上，病果率3%以下等指標(biāo)。袁其瓊等[16]總結(jié)騰沖紅花油茶良種選育存在的問題，提出適合本種選優(yōu)的全面綜合各級(jí)關(guān)鍵因子逐級(jí)淘汰篩選法；孫佩光[13]以核心分布區(qū)的廣寧紅花油茶典型林分作為研究對(duì)象，篩選出13 株優(yōu)良株，同時(shí)認(rèn)為種仁含油率、鮮果出籽率、單果鮮重等8 個(gè)因素可以作為篩選廣寧紅花油茶優(yōu)良種質(zhì)的重要指標(biāo)。由于樹種特性的差異，浙江紅花油茶品種選育無法參考現(xiàn)行的普通油茶選育標(biāo)準(zhǔn)，因而有針對(duì)性的制定標(biāo)準(zhǔn)并開展浙江紅花油茶品種選育具有巨大現(xiàn)實(shí)意義?，F(xiàn)有研究中，陳常理等[17]連續(xù)5年對(duì)41 株浙江紅花油茶種實(shí)性狀進(jìn)行主成分分析和聚類分析，結(jié)果表明干籽產(chǎn)量為第1 主成分，貢獻(xiàn)率為61.88%，是評(píng)價(jià)浙江紅花油茶種質(zhì)優(yōu)劣性的重要指標(biāo)。該研究?jī)H針對(duì)同一產(chǎn)地浙江紅花油茶優(yōu)株的產(chǎn)量和種實(shí)性狀等方面進(jìn)行評(píng)價(jià)，沒有考慮茶油品質(zhì)性狀，優(yōu)株取樣的廣泛性也相對(duì)有限。

浙江紅花油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展?jié)摿薮?。由于?dāng)前品種選育工作尚處起步階段，加之現(xiàn)有的選育方法的選育指標(biāo)單一，或通過單一指標(biāo)的簡(jiǎn)單疊加來實(shí)現(xiàn)，技術(shù)方法仍存在一定的片面和局限性。生產(chǎn)中急需建立一套全面系統(tǒng)、科學(xué)實(shí)用的選育方法和標(biāo)準(zhǔn)。鑒于此，在浙江紅花油茶主產(chǎn)區(qū)開展優(yōu)株篩選，并在種實(shí)、油用等經(jīng)濟(jì)性狀綜合評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)之上，提出浙江紅花油茶優(yōu)樹選擇標(biāo)準(zhǔn)與篩選方法，可為后續(xù)該樹種基因資源挖掘與品種利用提供技術(shù)參考。

1 材料與方法

1.1 優(yōu)樹選擇范圍與標(biāo)準(zhǔn)

在江西德興、婺源、樂平（15 a 以上德興種源人工林），福建霞浦、武夷山，浙江開化共5個(gè)浙江紅花油茶主產(chǎn)區(qū)6 個(gè)產(chǎn)地優(yōu)良林分開展優(yōu)株篩選工作，各產(chǎn)地信息詳見文獻(xiàn)[7]。對(duì)于浙江紅花油茶優(yōu)樹的選擇，在借鑒普通油茶標(biāo)準(zhǔn)[14-15]的基礎(chǔ)上，結(jié)合本課題組浙江紅花油茶經(jīng)濟(jì)性狀研究結(jié)果[7-8]和每公頃產(chǎn)油量不低于450 kg 的預(yù)期目標(biāo)，制訂高油酸型優(yōu)樹選擇一般標(biāo)準(zhǔn)：

1）植株生長(zhǎng)結(jié)果正常，病蟲害尤其是炭疽病自然感病率低于3%；每平方米平均冠幅鮮果產(chǎn)量3年平均≥1.2 kg；

2）油酸含量≥81%，干籽仁含油率≥60%，總不飽和脂肪酸≥86%，鮮出籽率≥21%，干籽出仁率≥60%；

3）決選時(shí)，在上述條件相近的情況下，以茶油品質(zhì)為重點(diǎn)，考慮高油酸含量與種仁出油率兩個(gè)重要指標(biāo)的基礎(chǔ)上適當(dāng)放寬其他參數(shù)以便于提高優(yōu)樹入選率。

1.2 優(yōu)樹選擇方法

1.2.1 初選

在確定的選優(yōu)林分中，根據(jù)實(shí)地資源調(diào)查情況，選擇樹形完整、樹冠開展、生長(zhǎng)良好的單株，在果實(shí)生長(zhǎng)基本穩(wěn)定的6—7月份進(jìn)行實(shí)地觀測(cè)調(diào)查。通過果實(shí)性狀觀察，估計(jì)產(chǎn)量，樹齡及病蟲害情況，合格者即確定為候選優(yōu)樹，并進(jìn)行掛牌、GPS 定位；8—9月果實(shí)進(jìn)入成熟期后進(jìn)行全株測(cè)產(chǎn)記錄果實(shí)性狀并拍照編號(hào)，每個(gè)樣株采摘20 個(gè)果實(shí)測(cè)定種實(shí)性狀，利用游標(biāo)卡尺測(cè)定每個(gè)果子的果皮厚度，同時(shí)計(jì)算千粒籽重、鮮出籽率等；茶籽烘干后去種皮，研磨成粉末，并進(jìn)行仁油率與主要脂肪酸組成測(cè)定，每組試驗(yàn)設(shè)計(jì)3 次重復(fù)，每次重復(fù)測(cè)定2 次，統(tǒng)計(jì)平均值。以油酸含量為參照，入選者即為候選優(yōu)樹，經(jīng)過初選確定103株作為候選優(yōu)株。

1.2.2 復(fù)選

對(duì)初選出的優(yōu)樹，接著統(tǒng)計(jì)2017—2019年的測(cè)產(chǎn)數(shù)據(jù)，并結(jié)合對(duì)果皮厚、鮮出籽率、干出仁率、千粒籽重（方法同初選測(cè)定方法）等種實(shí)性狀進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。參照入選標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行取舍，最終初步復(fù)選出36 株優(yōu)良單株（表1）。

表1 36 份復(fù)選浙江紅花油茶資料Table 1 Relevant information of 36 peasant C.chekiangoleosa

1.2.3 兩種方法決選優(yōu)株

以復(fù)選得到的36 株優(yōu)樹為評(píng)價(jià)對(duì)象，將其種實(shí)性狀及油用性狀等11 個(gè)性狀作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，通過主成分分析法（PCA）[18]構(gòu)建優(yōu)株綜合評(píng)價(jià)模型，對(duì)浙江紅花油茶36 株優(yōu)良單株進(jìn)行PCA 分析，提取特征值大于1.00 的因子作為主成分，得到主成分的特征值、方差貢獻(xiàn)率、累計(jì)方差貢獻(xiàn)率、因子載荷矩陣等，根據(jù)提取得到的主成分信息對(duì)36 株優(yōu)良單株進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以各主成分所對(duì)應(yīng)的特征值的方差貢獻(xiàn)率βi（i=1，2，3...，k）為權(quán)重，由各主成分得分Fi與對(duì)應(yīng)的權(quán)重相乘，構(gòu)建浙江紅花油茶優(yōu)良單株綜合評(píng)價(jià)模型：

F=β1F1+β2F2+…+βkFk。

計(jì)算各優(yōu)良單株的綜合得分，得分的高低可反映各單株在綜合指標(biāo)評(píng)價(jià)下的表現(xiàn)[19-21]。

優(yōu)株綜合評(píng)價(jià)采用隸屬函數(shù)法[22]綜合各項(xiàng)性狀指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)，其公式為：

式中：Zij為i單株j性狀的綜合隸屬函數(shù)值；Xij為i單株j性狀的測(cè)定值；Xjmin和Xjmax分別為各單株性狀值的最小值和最大值。i表示某個(gè)測(cè)試單株；j表示某一性狀。計(jì)算各性狀的隸屬函數(shù)值，獲得隸屬函數(shù)值累加起來取平均值，再比較平均值進(jìn)行排序，并進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)[23]。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

采用Excel 2016 軟件對(duì)表型數(shù)據(jù)進(jìn)行整理統(tǒng)計(jì)。由于各測(cè)定指標(biāo)具有不同的量綱，在數(shù)量級(jí)上存在較大差異，因而在進(jìn)行主成分分析（PCA）、隸屬函數(shù)法統(tǒng)計(jì)之前先對(duì)數(shù)據(jù)作標(biāo)準(zhǔn)化處理[24]，然后對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行基于相關(guān)系數(shù)矩陣直觀檢驗(yàn)方法的適應(yīng)性檢驗(yàn)[25]。根據(jù)表型數(shù)據(jù)的相似性，將原始數(shù)據(jù)簡(jiǎn)化合并，利用歐氏距離計(jì)算樣品之間的相關(guān)性，從而進(jìn)行相似組分的層次聚類分析（HCA）[26]比較。PCA 分析采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行，并計(jì)算累計(jì)貢獻(xiàn)率和主成分綜合得分，利用Origin 2020b 軟件對(duì)36 株優(yōu)良單株進(jìn)行HCA 分析，用樹形圖表示各優(yōu)良單株的親疏程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 優(yōu)良單株種實(shí)及油用性狀的變異分析

對(duì)36 株浙江紅花油茶單株的種實(shí)及油用性狀的測(cè)定結(jié)果表明（表2），不同單株各性狀間的變異系數(shù)差異很大，以油亞比的變異系數(shù)最大，為29.53%；亞麻酸、亞油酸、鮮出籽率、千粒籽重、果皮厚度、平均冠幅產(chǎn)量次之，依次為26.64%、24.46%、22.80%、22.53%、22.43%、22.14%； 籽仁含油率、干出仁率差異不大，分別為3.87%、5.23%；油酸、總不飽和脂肪酸的變異系數(shù)最小，分別為2.06%、1.09%，這一結(jié)果顯示出浙江紅花油茶具有油酸含量相對(duì)較為穩(wěn)定的特性。

表2 36 株單株11 個(gè)定量描述性狀的均值及變異情況Table 2 Mean value and variation of 11 quantitative description characters of 36 individual plant

2.2 優(yōu)良單株種實(shí)及油用性狀間的相關(guān)性分析

采用相關(guān)系數(shù)矩陣的直觀檢驗(yàn)法對(duì)36 株浙江紅花油茶11 種綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)的適用性進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果見表3。優(yōu)株綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)間存在正相關(guān)和負(fù)相關(guān)，尤其是油酸與總不飽和脂肪酸、油亞比呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而亞油酸與油酸、油亞比呈極顯著負(fù)相關(guān)（P＜0.01）；果皮厚與千粒籽重呈顯著負(fù)相關(guān)，而與鮮出籽率呈極顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.850，千粒籽重與鮮出籽率呈顯著負(fù)相關(guān)，而與干出仁率呈現(xiàn)呈顯著正相關(guān)，整體表明優(yōu)株綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)間相關(guān)性較強(qiáng)。

表3 浙江紅花油茶優(yōu)良單株綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)間的相關(guān)性分析?Table 3 Correlation analysis of comprehensive evaluation indexes for superior individual plants of C.chekiangoleosa

2.3 優(yōu)良單株的主成分分析

對(duì)36 株優(yōu)良單株的11 項(xiàng)指標(biāo)采用PCA 法對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。如表4所示，每個(gè)主成分均反映了一定的原始變量信息，特征值代表主成分反映原始變量信息的數(shù)量。由于PCA 提取的5 個(gè)主成分，其特征值均大于1，累計(jì)方差貢獻(xiàn)率為84.656%，基本上反映了所有變量的初始信息，因此選用前5 個(gè)主成分作為數(shù)據(jù)分析的有效主成分。

表4 各主成分的特征值及貢獻(xiàn)率Table 4 Eigenvalue and contribution rate of each principal component

主成分分析矩陣中浙江紅花油茶綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)在各主成分矩陣中的權(quán)重系數(shù)見表5，其中數(shù)值反映的是原始變量對(duì)因子影響的大小，方向表示的是正負(fù)影響的方向。從表5中可以看出，對(duì)第一主成分貢獻(xiàn)較大的主要是油酸、亞油酸、油亞比等性狀；第一主成分反映原始數(shù)據(jù)信息量的29.491%，這幾個(gè)性狀均屬于不飽和脂肪酸，因此，可以把第一主成分稱為不飽和脂肪酸因子。決定第二主成分大小的主要是果皮厚、鮮出籽率、千粒籽重等性狀；其貢獻(xiàn)率為20.358%，其中以果皮厚、鮮出籽率的特征向量最大。第三主成分總不飽和脂肪酸、亞麻酸等性狀貢獻(xiàn)較大，其貢獻(xiàn)率為14.725%。對(duì)第四主成分貢獻(xiàn)較大的干出仁率、仁油率等性狀分量；其貢獻(xiàn)率為10.986%。決定第五主成分大小的是平均冠幅產(chǎn)量，其貢獻(xiàn)率為9.096%，可歸結(jié)為產(chǎn)量因子。

表5 各主成分特征向量與載荷矩陣Table 5 Eigenvectors of principal components and load matrix

2.4 兩種方法對(duì)比綜合決選浙江紅花油茶優(yōu)良單株

由于PCA 中前5 個(gè)主成分反映了浙江紅花油茶綜合評(píng)價(jià)指標(biāo)信息的84.656%，因此利用前5 個(gè)主成分進(jìn)行浙江紅花油茶優(yōu)良單株的綜合評(píng)價(jià)是可行的。將標(biāo)準(zhǔn)化的浙江紅花油茶11 個(gè)性狀指標(biāo)代入5 個(gè)主成分，即可得到各優(yōu)良單株5個(gè)主成分得分。前5 個(gè)主成分從不同層面反映了浙江紅花油茶優(yōu)株的綜合情況，僅用某一主成分無法對(duì)優(yōu)良單株作出綜合性評(píng)價(jià)，根據(jù)PCA 分析結(jié)果，以每個(gè)主成分對(duì)應(yīng)的方差相對(duì)貢獻(xiàn)率作為權(quán)重構(gòu)建綜合評(píng)價(jià)函數(shù)：F=0.348F1+0.240F2+0.174F3+0.130F4+0.107F5，得到各優(yōu)株綜合得分值（F），對(duì)各優(yōu)良單株進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。根據(jù)得分可對(duì)浙江紅花油茶優(yōu)良單株進(jìn)行排序，決選出排名靠前的優(yōu)良單株。另以表型及油用各性狀指標(biāo)作為依據(jù)，計(jì)算各指標(biāo)的隸屬函數(shù)值，獲得隸屬函數(shù)值累加起來并取平均值，再比較平均值進(jìn)行排序，并進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

主成分分析法與隸屬函數(shù)法統(tǒng)計(jì)的36 個(gè)優(yōu)株的排序情況，見表6。主成分分析法中排名前15 的優(yōu)株依次是GHY03、GHY21、GHY06、GHY02、GHY19、GHY22、GHY04、GHY01、GHY36、GHY29、GHY23、GHY35、GHY34、GHY32、GHY20。隸屬函數(shù)法的綜合評(píng)價(jià)排序前十五的優(yōu)株依次為GHY22、GHY03、GHY21、GHY20、GHY02、GHY34、GHY19、GHY32、GHY31、GHY36、GHY01、GHY04、GHY33、GHY10、GHY35。綜合對(duì)比兩種評(píng)價(jià)方法結(jié)果，個(gè)別優(yōu)良單株在排序上存在前后差異，這是由于不同的評(píng)價(jià)方法在對(duì)各指標(biāo)打分時(shí)權(quán)重不同所造成的，但總體排序上很接近，說明優(yōu)株整體評(píng)定上趨勢(shì)相同。本研究最終選取在兩種評(píng)價(jià)方法中都排在前15 的浙江紅花油茶優(yōu)株作為決選優(yōu)株。統(tǒng)計(jì)結(jié)果入選優(yōu)株共有12 株，各優(yōu)株主要經(jīng)濟(jì)性狀描述見表7，其中優(yōu)株GHY03、GHY19、GHY21 的果皮較薄，均小于1 cm 以下；GHY03、GHY04、GHY19 仁油率均在66%以上，屬于高仁油率株系；GHY02、GHY20、GHY21、GHY22 平均冠幅產(chǎn)量均高于1.60 kg/m2，屬于高產(chǎn)型株系；GHY02、GHY03、GHY19 鮮出籽率都超過26%。

表6 兩種方法綜合篩選與評(píng)價(jià)浙江紅花油茶優(yōu)良單株Table 6 Two methods for comprehensive screening and evaluation of superior individual plant of C.chekiangoleosa

率油仁Oil contentof kernel/%酸油亞Linoleicacid /%酸肪飽UFA /%脂和不總0.87 64.82±4.72±0.65 88.6±1.27 0.54 63.09±4.71±0.84 1.34 89.37±0.36 66.66±4.07±0.69 0.82 89.38±0.42 67.29±3.87±0.87 0.98 88.70±0.40 67.21±5.58±0.89 1.32 86.68±0.38 61.45±6.49±1.21 0.87 88.62±0.56 63.60±3.09±0.85 1.17 88.95±0.49 63.52±3.33±0.73 1.20 87.97±0.32 61.80±5.33±1.31 0.95 88.72±0.64 64.75±4.72±1.02 1.06 88.93±0.28 63.18±4.86±0.98 0.76 87.69±0.54 62.98±4.90±0.91 0.99 88.80±亞Linolenic酸麻acid/%0.45±0.06 1.01述酸描油狀83.43±性O(shè)leic acid /%濟(jì)經(jīng)平Y(jié)ield perunit Table 7Descriptionof economic traits of 12 superior individual plants of C.chekiangoleosa量株產(chǎn)單幅良冠(kg·m-2)優(yōu)均crown width/1.26±0.26茶油花紅率1.29江仁浙出7 12 株干Rateof dried kernel/%66.90±表鮮Fresh seed率籽4.52出yield /%23.46±量質(zhì)11.08果g單Weightperfruit/53.13±千TKW /g重籽290.72粒1 444.20±0.45±0.04 0.96 84.21±1.73±0.23 1.09 66.54±3.61 26.50±14.31 56.07±134.51 1 198.51±0.41±0.02 1.28 84.90±1.34±0.26 0.73 63.76±4.90 31.89±8.47 46.58±107.58 1 189.71±0.39±0.03 1.12 84.44±1.28±0.28 0.96 63.32±2.81 20.38±11.87 61.66±277.74 1 508.34±0.47±0.04 1.36 80.63±1.42±0.21 0.53 64.35±6.93 28.46±15.41 40.85±497.17 1 468.25±0.59±0.02 0.82 81.54±1.89±0.28 1.14 66.63±5.63 23.59±25.30 68.84±779.26 2 582.05±0.52±0.03 1.32 85.35±1.60±0.20 0.87 66.07±5.01 24.44±10.93 50.41±559.01 1 523.09±0.55±0.06 1.21 84.10±2.10±0.37 4.96 73.37±4.01 21.69±15.92 315.30 101.93±2 271.67±0.49±0.03 1.48 82.89±1.26±0.22 1.81 67.83±2.14 19.42±26.76 75.71±418.48 2 252.94±0.52±0.01 1.17 83.69±1.32±0.24 2.36 68.81±3.55 17.18±22.18 72.98±283.38 1 971.25±0.47±0.02 0.92 82.36±1.17±0.30 0.92 64.20±3.80 23.89±23.06 76.76±234.39 2 263.54±0.51±0.05 1.15 83.40±1.24±0.27 2.54 68.85±7.02 21.02±19.66 61.30±179.16 1 625.09±果Fruit skin厚皮thicknes/cm株優(yōu)Superiorplant 1.15±0.15 GHY01 1.07±0.23 GHY02 0.73±0.10 GHY03 1.18±0.17 GHY04 0.65±0.16 GHY19 1.02±0.16 GHY20 0.88±0.14 GHY21 1.11±0.18 GHY22 1.10±0.18 GHY32 1.20±0.15 GHY34 1.10±0.10 GHY35 1.23±0.09 GHY36

2.5 層次聚類分析

浙江紅花油茶復(fù)選優(yōu)樹聚類分析結(jié)果如圖1所示。36 株優(yōu)良單株劃分為六個(gè)類群：類群Ⅰ包括9 株優(yōu)樹，分別為GHY01、GHY36、GHY28、GHY32、GHY34、GHY31、GHY33、GHY20、GHY22，此類群優(yōu)株屬于高油酸、高出仁率型株系，平均油酸含量為83.01%，平均干出仁率達(dá)到69.05%，說明該類群優(yōu)株果實(shí)個(gè)小且果皮較薄，綜合性狀表現(xiàn)優(yōu)良。類群Ⅱ包括4 株優(yōu)樹，分別為GHY07、GHY13、GHY10、GHY11，聚入此類的優(yōu)株普遍果皮較厚，鮮出籽率較低，千粒籽重較大，說明其茶籽大而飽滿，屬于高含油率型株系，平均籽仁含油率達(dá)到65.69%，綜合性狀表現(xiàn)中上；類群Ⅲ包括5 株優(yōu)樹，分別為GHY02、GHY21、GHY03、GHY04、GHY06，聚入此類的優(yōu)株屬于高油酸型且綜合性狀優(yōu)良的株系，平均油酸含量為84.51%，其總不飽和脂肪酸含量豐富，鮮出籽率很高，綜合排名均在前七名之內(nèi)，綜合品質(zhì)最佳；類群Ⅳ包括5 株優(yōu)樹，分別為GHY12、GHY23、GHY29、GHY35、GHY19，聚入此類的優(yōu)株果皮很薄，亞油酸、鮮出籽率較高；類群Ⅴ包括9 株優(yōu)樹，分別為GHY05、GHY09、GHY18、GHY14、GHY24、GHY15、GHY16、GHY27、GHY17，聚入此類的優(yōu)株平均亞麻酸含量較低，僅為0.28%，干出仁率較大；類群Ⅵ包括4 株優(yōu)樹，分別為GHY08、GHY25、GHY26、GHY30，聚入此類的優(yōu)株屬于高亞油酸、高產(chǎn)型株系，平均亞油酸含量為7.31%，平均冠幅產(chǎn)量達(dá)到2.12 kg/m2。

圖1 浙江紅花油茶復(fù)選36 株優(yōu)良單株的層次聚類Fig.1 Hierarchical cluster diagram of 36 superior individuals of C.chekiangoleosa

3 討論與結(jié)論

浙江紅花油茶作為開發(fā)潛力巨大的油茶育種材料，從該物種中拯救與挖掘新的優(yōu)質(zhì)油茶遺傳資源，并制訂以選育高含油率、高品質(zhì)為定向選育目標(biāo)的育種策略，從該樹種中篩選并培育優(yōu)良品系，對(duì)于豐富油茶品種資源意義重大。優(yōu)良品系培育的第一步就是要進(jìn)行優(yōu)良單株的選擇，所以，如何就浙江紅花油茶現(xiàn)有的種質(zhì)資源進(jìn)行評(píng)價(jià)及篩選便成為了要重點(diǎn)解決的關(guān)鍵問題。一般認(rèn)為，變異系數(shù)大于10%可以代表個(gè)體間差異較大[27-28]。浙江紅花油茶基本為實(shí)生種植，林分間有著明顯的變異，而林分個(gè)體間的變異更大，這就為其良種選育提供了良好的育種材料[29]。

本研究中對(duì)復(fù)選的36 株優(yōu)良單株的油酸、亞麻酸、總不飽和脂肪酸、亞油酸、仁油率、油亞比、果皮厚、千粒籽重、鮮出籽率、干出仁率、單位冠幅產(chǎn)量等11 項(xiàng)經(jīng)濟(jì)性狀指標(biāo)進(jìn)行了分析。結(jié)果表明：油酸含量均值為82.13%（77.19%～85.35%），由此顯示高油酸特性是浙江紅花油茶油脂的普遍特點(diǎn)。油酸含量相對(duì)比較穩(wěn)定，因而其含量的高低是茶油品質(zhì)優(yōu)劣的一個(gè)重要指標(biāo)[30]，何方等[31]認(rèn)為油酸含量在81%～84%之間的茶油可作為很好的化妝品及保健品用油。復(fù)選的36 株單株中，油酸的變異系數(shù)較?。▋H為2.06%），符合賀義昌等[7]的研究結(jié)論；亞油酸變動(dòng)范圍在2.49%～8.27%，其變異系數(shù)為24.66%，亞油酸含量變化相對(duì)大些，這與王湘南等[32]的研究結(jié)果相近。浙江紅花油茶籽仁含油率在不同單株間差異較小，其變異系數(shù)為3.87%，平均籽仁含油率為63.55%，明顯高于普通油茶的籽仁含油率。鮮出籽率、果皮厚、千粒籽重等性狀在不同單株間差異較大，這與劉子雷等[33]的研究結(jié)論具有一致性。

相關(guān)分析是對(duì)兩個(gè)或兩個(gè)以上有相關(guān)性的變量進(jìn)行分析，從而確定變量之間的相關(guān)程度[34]。本研究中11 個(gè)描述性狀之間存在著一定程度的相關(guān)性，尤其是亞油酸與油酸呈極顯著負(fù)相關(guān)，這一結(jié)論與同類油茶研究相似[32]。本研究中發(fā)現(xiàn)油酸與平均冠幅產(chǎn)量呈現(xiàn)顯著負(fù)相關(guān)，鮮出籽率主要受果皮厚和千粒籽重的影響。對(duì)36 株浙江紅花油茶優(yōu)樹的11 個(gè)品質(zhì)性狀進(jìn)行主成分分析可以看出，綜合性狀指標(biāo)對(duì)篩選優(yōu)株貢獻(xiàn)由大至小的順序?yàn)橛退幔緛営退幔居退?亞油酸＞鮮出籽率＞亞麻酸＞果皮厚＞平均冠幅產(chǎn)量＞總不飽和脂肪酸＞千粒籽重＞干出仁率＞仁油率。這11 個(gè)品質(zhì)性狀彼此互相關(guān)聯(lián)，其中油酸與亞油酸、果皮厚度與鮮出籽率關(guān)系密切，均呈顯著負(fù)相關(guān)。因此在優(yōu)株篩選過程中，要綜合考量這些性狀的重要性。

為避免評(píng)價(jià)結(jié)果存在偏差，本研究還采用了模糊隸屬函數(shù)法對(duì)浙江紅花油茶優(yōu)良單株進(jìn)行選擇，對(duì)比發(fā)現(xiàn)，總體上選擇結(jié)果較接近，進(jìn)而表明所選出的單株具有顯著優(yōu)異性。綜合來看，兩種評(píng)價(jià)結(jié)果的總體排序趨勢(shì)一致，說明用兩種方法篩選浙江紅花油茶優(yōu)良單株具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性。

本文通過層次聚類法按歐式遺傳距離進(jìn)行聚類分析，將36 株優(yōu)株共聚為6 類，各類群間存在較大的性狀差異。因此，一方面可對(duì)浙江紅花油茶的優(yōu)異種質(zhì)資源進(jìn)行挖掘，另一方面可利用不同基因型間較大的遺傳差異，進(jìn)行雜交育種產(chǎn)生廣泛的變異，易選出性狀超親本和適應(yīng)性強(qiáng)的株系[35]。從聚類分析結(jié)果中可以看出，類群Ⅰ優(yōu)株屬于高油酸、高出仁率型株系，可用于雜交親本的選擇。類群Ⅱ?qū)儆诟吆吐市椭晗?，該類群?jiǎn)沃昕捎糜谂嘤吆吐实姆N質(zhì)資源或作為雜交育種的優(yōu)質(zhì)材料；類群Ⅲ優(yōu)株屬于高油酸型且綜合性狀優(yōu)良的株系，該類群可用于培育高油酸型種質(zhì)資源，其總不飽和脂肪酸含量豐富，鮮出籽率很高，可作為優(yōu)良株系進(jìn)行推廣；類群Ⅳ的單株可用于雜交親本的選擇，與高油酸型株系進(jìn)行雜交。類群Ⅴ干出仁率較大，可作為雜交育種的材料。類群Ⅵ優(yōu)株屬于高亞油酸、高產(chǎn)型株系，平均亞油酸含量為7.31%，平均冠幅產(chǎn)量達(dá)到2.12 kg/m2，該類群?jiǎn)沃昕捎糜谂嘤邅営退?、高產(chǎn)型的種質(zhì)資源。聚類還發(fā)現(xiàn)來自同一種源的單株大多聚在一起，表明遺傳分歧的多向性與地理區(qū)域分布有一定的平行關(guān)系，但也有一些單株間存在的遺傳分歧和地理分布關(guān)系卻不太大，不同種源的單株也可能常常聚在相同類群中，而同一種源的單株又往往可能聚到不同的類群中，這可能是自然選擇的結(jié)果決定了單株遺傳分歧的多向性[35]，所以在遺傳距離大的類群間選擇材料作為雜交親本往往有較好的結(jié)果。

本研究通過初選、復(fù)選及基于主成分分析法、模糊隸屬函數(shù)法構(gòu)建的浙江紅花油茶優(yōu)株綜合評(píng)價(jià)模型進(jìn)行決選的策略，最終在復(fù)選的36個(gè)優(yōu)株中決選出12 個(gè)優(yōu)株：GHY01、GHY02、GHY03、GHY04、GHY19、GHY20、GHY21、GHY22、GHY32、GHY34、GHY35、GHY36，并以此制訂出了一套浙江紅花油茶優(yōu)株選擇標(biāo)準(zhǔn)。誠然決選出來的12 株優(yōu)良單株現(xiàn)階段只是按照種質(zhì)資源收集保存標(biāo)準(zhǔn)嫁接保存，優(yōu)株優(yōu)良性狀是否表現(xiàn)穩(wěn)定還有待持續(xù)觀測(cè)，同時(shí)后續(xù)還需進(jìn)一步開展無性系測(cè)定評(píng)價(jià)工作及區(qū)域性試驗(yàn)。