復方丹參注射液對子癇前期大鼠凝血功能和腎功能的影響研究*

彭瓊琳，黃 敏

(鄂鋼醫(yī)院婦產(chǎn)科，湖北 鄂州 436000)

子癇前期(PE)是指孕前血壓正常，但孕周20周后開始出現(xiàn)以尿蛋白和血壓升高并伴發(fā)凝血功能障礙的一種婦產(chǎn)科常見疾病，如治療不及時，則最終發(fā)展為重度PE或子癇[1]。PE與孕婦多胎、既往病史或年齡等高危因素或免疫因素有關，造成孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒死亡，僅次于產(chǎn)后出血和羊水栓塞風險[2]。中西醫(yī)結合治療可改善PE患者血壓狀況、提高自然分娩率和總有效率并降低剖宮產(chǎn)率、產(chǎn)鉗助產(chǎn)率，在新生兒合并癥及妊娠結局等方面均優(yōu)于單純西醫(yī)治療[3]。復方丹參注射液可顯著降低PE發(fā)病率，促進胎兒的預后并減少不良妊娠結局[4]。本研究在建立SD大鼠PE模型的基礎上，通過經(jīng)尾靜脈注射給藥的方法觀察復方丹參注射液對PE大鼠凝血功能和腎功能的影響。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1實驗動物 SPF級SD大鼠60只(雌鼠40只，雄鼠20只)，10～11周齡，體重(262.50±10.99)g，由武漢金塘鑫養(yǎng)殖科技有限公司提供，許可證：[SCXK(鄂) 2018-0015]。每晚18:30按雌雄2∶1比例合籠，過夜后于清晨 8：00取雌鼠，以顯微鏡下觀察陰道分泌物涂片見到精子者為受孕大鼠，記受孕 0 d。將受孕的40只雌鼠隨機均分為對照組(A組)、模型組(B組)、低分子肝素鈉(C組)和復方丹參注射液組(D組)并分組飼養(yǎng)。實驗大鼠自由飲水、喂養(yǎng)普通飼料。動物房溫度24～25 ℃，相對濕度50%～75%，勤換墊料，保證大鼠福利。

1.1.2試劑與儀器 復方丹參注射液(廣東新峰藥業(yè)股份有限公司，批號：Z44021269)，低分子肝素鈉(吉林華康藥業(yè)股份有限公司，批號：0190210)，亞硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME，上海士鋒生物科技有限公司，批號：A0015)，戊巴比妥鈉(上海第一化工廠，批號：0891124)，大鼠纖維蛋白原(FIB)檢測試劑盒(上海澤葉生物科技有限公司，批號：ZY-FG-R198a)，大鼠D-二聚體(D-D)檢測試劑盒(基蛋生物科技股份有限公司，批號：Q0912)，多功能酶標儀(美國Biotek公司)，MedLab-MS60X型大鼠無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)(南京美易科技有限公司)。

1.2方法

1.2.1合體滋養(yǎng)細胞微絨毛(STBM)培育 先配制100 mL含1%青-鏈霉素的NaCl溶液，取提前交配成功的妊娠孕鼠5只(第18天)，用3%戊巴比妥鈉麻醉后固定、剖宮并迅速摘取孕鼠胎盤。使用PBS沖洗干凈后剪成約1 mm×1 mm×1 mm，然后將組織塊放入上述溶液中 4 ℃振蕩過夜收集 STBM富集，再用PBS緩沖液將STBM稀釋成0.14 mg/mL的溶液。

1.2.2PE模型建立及治療 待大鼠妊娠第5天時，除A組外，其他組均經(jīng)尾靜脈注射2 mL稀釋后的STBM(每天1次，連續(xù)注射10 d)；再于第13天按125 mg/kg劑量從皮下注射L-NAME，每天1次，連續(xù)注射7 d[5]。本實驗采用MedLab-MS60X型大鼠無創(chuàng)血壓測試系統(tǒng)測量血壓并以孕鼠血壓大于或等于18 kPa和尿蛋白定量(UP)≥4.0 mg為成模標志[6]。治療均按每天1次、經(jīng)尾靜脈注射給藥，四組治療7 d。其中A、B組注射生理鹽水(1 mL/d)對照；C組注射低分子肝素鈉，劑量為10 mg/(kg·d)；D組按10 mg/(kg·d)注射復方丹參注射液。

1.2.3觀察指標

1.2.3.1腎功能 將孤養(yǎng)大鼠置于標準代謝籠內中，收集24 h 尿量(UV)，采用乳膠增強免疫比濁法測定UP，全自動生化分析儀測定血尿素氮(BUN)和血肌酐 (SCr)。

1.2.3.2凝血功能 (1)采用斷尾法判定出血時間(BT)，玻片法判定凝血時間(CT)。(2)內/外源性凝血因子 Xa和活化部分凝血活酶時間(APTT)采用凝血因子生成實驗。檢測時斷尾取全血1 mL，再準確提取全血中105個細胞，分別加入含130 nmol/L因子X、l nmol/L因子IXa、5 nmol/L因子Ⅷ、 0.2 nmol/L凝血酶(Ⅱ a)和5 mmol/L CaCl2緩沖液，孵育10 min后用7 mmol/L的乙二胺四乙酸(EDTA)終止；加1 mmoL顯色底物，用酶標儀在405 nm波長處內/外源性凝血因子 Xa和APTT[7]。(3)干式免疫熒光法檢測D-D和FIB，檢測時按試劑說明進行。

1.2.3.3仔鼠發(fā)育情況 治療7 d后，用3%戊巴比妥鈉麻醉后固定、剖宮并迅速摘取孕鼠胎盤。清點死胎數(shù)和存活仔鼠數(shù)量并計算死胎率[死胎率=死胎數(shù)/(存活仔鼠數(shù)量+死胎數(shù))]，測量仔鼠身長、體重并稱胎盤濕重。

2 結 果

2.1各組大鼠腎功能變化比較 與A組比較，B、C組24 h UV降低，UP、BUN和SCr水平均明顯升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；C組上述指標與B組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與B、C組比較，D組24 h UV明顯升高，UP、BUN和SCr則均明顯降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 各組大鼠腎功能變化比較

2.2各組大鼠凝血功能變化比較 與A組比較，B組APTT、BT和CT均縮短，內/外源性凝血因子Xa、D-D、FIB水平均升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與B組比較，C組凝血指標中APTT、BT和CT均延長，內/外源性凝血因子Xa、D-D、FIB水平均降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。D組與C組相似，但D組凝血指標中的APTT、BT、CT、內/外源性凝血因子Xa的作用沒有C組強，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；C、D組D-D、FIB水平比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 各組大鼠凝血功能變化比較

2.3各組大鼠仔鼠發(fā)育情況比較 B組存活仔鼠數(shù)量低于A組，死胎率較A組高，仔鼠身長、體重和胎盤濕低于A組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。C、D組存活仔鼠均較B組增多，死胎率均較B組降低，仔鼠身長、體重和胎盤濕重均較B組高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；C、D組上述仔鼠情況比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 各組大鼠仔鼠發(fā)育情況比較

3 討 論

PE患者除妊娠合并高血壓、水腫外，還表現(xiàn)為腎功能損傷和凝血功能障礙，表現(xiàn)為UP、BUN和SCr升高，24 h UV減少，腎損傷逐步加重[8]。其中凝血功能紊亂患者若不及時控制，可能導致死胎或流產(chǎn)等不良妊娠結局，嚴重者還會引起彌散性血管內凝血(DIC)并最終造成多器官功能衰竭[9]。由此可見，促凝血-抗凝因子失衡是導致PE病理進展的重要環(huán)節(jié)，在治療中糾正血液高凝狀態(tài)對PE及針對其并發(fā)癥的預防和治療尤其重要[10]。

本研究發(fā)現(xiàn)，復方丹參注射液組(D組)的腎功能改善明顯，D組UP、BUN和SCr均較模型組(B組)明顯降低，24 h UV明顯較B組增多，提示復方丹參注射液可改善PE模型大鼠腎功能。另外，D組促凝血-抗凝因子失衡現(xiàn)象也基本得以糾正，D組大鼠APTT、BT、CT均較B組延長，內/外源性凝血因子Xa、D-D和FIB均較B組降低，提示復方丹參注射液可糾正PE模型大鼠促凝血-抗凝因子失衡現(xiàn)象，即糾正凝血功能紊亂現(xiàn)象。復方丹參注射液主要成分為丹參素和原兒茶醛[11]。丹參素具有擴張血管并改善循環(huán)，從而增加腎血液流量，達到利尿和腎功能恢復的功效[12]。其活血化瘀功效可產(chǎn)生抗血小板凝集作用，通過改善血液流變學特性而影響凝血機制[13]。還可控制血壓、改善腎功能、糾正凝血功能紊亂[14]。使用復方丹參注射液在輔助治療PE時可延長孕周，促進新生兒發(fā)育，有利于良好的妊娠結局[15]。在本研究中，D組存活仔鼠數(shù)量較B組增多，死胎率降低，仔鼠身長、體重和胎盤濕重均高于B組，佐證了復方丹參注射液有利于良好的妊娠結局。

臨床上如何有效逆轉孕婦高凝狀態(tài)及預防并發(fā)癥方面，主要應用藥物進行抗凝、降壓來改善組織灌注，從而在微觀層面抑制PE疾病進展以達到治療的目的[16]。低分子肝素鈉具有抗Xa活性，通過促進抗凝血酶Ⅲ結合凝血酶抑制凝血酶和多種凝血因子活動，降低體內、體外血栓和動靜脈血栓的形成而發(fā)揮較強的抗凝作用[17]。本研究觀察到低分子肝素鈉(C組)對腎功能幾乎無作用，但復方丹參注射液對卻能明顯改善腎功能，這也提示后者在改善腎功能方面優(yōu)于前者。另外，低分子肝素鈉對凝血-纖溶系統(tǒng)影響較復方丹參注射液更明顯，如對內/外源性凝血因子Xa的抑制作用強烈。低分子肝素鈉雖不影響血小板聚集和FIB與血小板的結合，但妊娠初3個月婦女或產(chǎn)后婦女使用本品可能增加出血的危險，故須慎用。復方丹參注射液作用較低分子肝素鈉弱，但不影響其對PE凝血-纖溶系統(tǒng)的影響，也可達到糾正凝血功能紊亂的作用。本研究中，復方丹參注射液對D-D和FIB的作用尤為明顯，作用與低分子肝素鈉持平。

綜上所述，復方丹參注射液具有改善PE模型大鼠凝血功能和腎功能作用。其通過解除全身血管痙攣、增加組織器官、特別血流量，恢復腎小球基底膜通透性，從而增加24 h UV、降低UP，增強腎臟清除BUN和SCr的能力，在糾正PE模型大鼠促凝血-抗凝因子失衡和腎功能損傷方面起到重要作用。