基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)探討荷丹片治療高脂血癥的作用機制*

姚明鶴 ，閆海峰 ，王靜 ，徐宗佩 ，李玉紅

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，天津 300381）

高脂血癥是指血液中總膽固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白膽固醇濃度升高或高密度脂蛋白膽固醇濃度降低，是血栓形成、動脈粥樣硬化、心血管疾病、中風(fēng)和肝損傷的重要危險因素[1]。近30年來，中國人群的血脂水平逐步升高，血脂異?；疾÷拭黠@增加。中國成人血脂異?？傮w患病率高達(dá)40%，人群血清膽固醇水平的升高將導(dǎo)致2010—2030年期間中國心血管病事件約增加920萬，預(yù)示未來中國成人血脂異常患病及相關(guān)疾病負(fù)擔(dān)將繼續(xù)加重[2]。目前臨床上廣泛使用的調(diào)節(jié)血脂藥物有纖維酸鹽、他汀類、貝特類、煙酸類、膽汁酸螯合劑和膽固醇吸收抑制劑等藥物，這類藥物使用方便，起效快，但部分患者有耐受缺乏現(xiàn)象，出現(xiàn)不同程度的肝腎功能損傷、胃腸道明顯不適、橫紋肌溶解等而終止治療[3-8]。因此，研制安全有效治療高脂血癥的藥物顯得尤為重要。

中醫(yī)藥治療高脂血癥歷史悠久，早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》時期就有“膏”“脂”等關(guān)于高脂血癥的記載。中藥能多途徑、多靶點發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂的作用，不良反應(yīng)少，在治療高脂血癥及相關(guān)疾病方面優(yōu)勢明顯。近年來，荷丹片作為他汀類藥物耐受缺乏患者的替代治療或與他汀類藥物聯(lián)合使用，以達(dá)到調(diào)節(jié)血脂的效果。荷丹片已被證實可明顯降低膽固醇、三酰甘油和體質(zhì)量，同時可升高高密度脂蛋白和提高卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶的活性，另外還能減少動脈粥樣斑塊的發(fā)生率。然而，由于荷丹片中化合物及其作用靶點的復(fù)雜性，難以從整體上對中藥的有效物質(zhì)及藥理作用機制進(jìn)行剖析。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)可以在基因、蛋白、疾病、藥物等數(shù)據(jù)庫信息的基礎(chǔ)上，融合系統(tǒng)生物學(xué)、多向藥理學(xué)、計算機生物學(xué)和網(wǎng)絡(luò)分析等多學(xué)科技術(shù)，綜合構(gòu)建“藥物-靶點-基因-疾病”之間的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)關(guān)系，揭示具有多靶點性質(zhì)的多組分藥物的作用機制。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法，把荷丹片中的類藥成分通過相關(guān)數(shù)據(jù)庫篩選出來，搜索得到高脂血癥疾病靶點，構(gòu)建“成分-靶標(biāo)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，探究荷丹片治療高脂血癥的可能作用機制，以期為該藥的進(jìn)一步的深入研究提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 荷丹片類藥成分和對應(yīng)靶標(biāo)的獲取 應(yīng)用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)分析平臺（TCMSP）（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）搜索荷丹片中荷葉、丹參、番瀉葉、山楂、補骨脂的化學(xué)成分。以口服生物利用度（OB）≥30%、血腦屏障（BBB）≥-0.3、類藥性（DL）≥0.18為篩選條件，得到荷丹片的生物活性成分及其相關(guān)靶標(biāo)蛋白，將TCMSP篩選出的成分靶點全稱輸入DrugBank獲取基因簡稱和Uniprot ID。中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫（TCMSP）未收錄的藥物在中醫(yī)藥百科全書（ETCM）（http：//www.nrc.ac.cn：9090/ETCM/index.php/Home/Index/index.html）數(shù)據(jù)庫中搜索得到。

1.2 高脂血癥疾病靶點的獲取 登錄DisGeNET（http：//www.disgenet.org/web/DisGeNET/menu/search）數(shù)據(jù)庫，設(shè)置檢索詞為“hyperlipidemia”，搜索得到高脂血癥的疾病靶點。

1.3 藥物與疾病共同靶點篩選及互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將高脂血癥疾病靶點與荷丹片類藥活性成分的作用靶點在線繪制韋恩圖（https：//www.omicshare.com/），獲得藥物與疾病的共同靶點，在STRING數(shù)據(jù)平臺（https：//string-db.org/）在線輸入共同作用靶點，構(gòu)建靶點互作（PPI）網(wǎng)絡(luò)，選擇物種為“Homo sapiens”，設(shè)置最低相互作用閾值為“medium confidence”，根據(jù)分析結(jié)果統(tǒng)計靶點關(guān)聯(lián)頻次獲取蛋白相互作用信息，從而得到關(guān)鍵靶點。

1.4 構(gòu)建中藥-活性成分-疾病-靶點互作網(wǎng)絡(luò) 將中藥化學(xué)成分的預(yù)測靶點與高脂血癥相關(guān)靶點取交集，所得交集靶點即為荷丹片作用于高脂血癥的預(yù)測靶點。構(gòu)建中藥-活性成分-疾病-靶點互作網(wǎng)絡(luò)，利用Cytoscape3.7.1軟件中的“Network Analyzer”功能對中藥-活性成分-疾病-作用靶點網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行分析，節(jié)點（node）代表荷丹片中所含藥物化學(xué)成分與潛在作用靶點，邊（edge）展現(xiàn)了中藥成分和其作用靶點之間的聯(lián)系，根據(jù)化合物與靶點連接情況篩選出荷丹片作用于高脂血癥的關(guān)鍵化合物。

1.5 GO生物學(xué)過程富集分析和KEGG通路富集分析 將荷丹片-高脂血癥基因數(shù)據(jù)集導(dǎo)入DAVID6.8 數(shù)據(jù)庫（https：//david.ncifcrf.gov/）進(jìn)行 GO和KEGG通路富集分析，從而得到基因的功能水平分析結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 荷丹片中類藥活性成分 通過TCMSP、ETCM數(shù)據(jù)庫對荷丹片中5味中藥進(jìn)行檢索，得到類藥活性成分61個，其中荷葉7個、丹參41個、番瀉葉2個、山楂4個、補骨脂7個，見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼表1。

2.2 高脂血癥疾病靶點的篩選及共同靶點PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 通過檢索DisGeNET數(shù)據(jù)庫獲得高脂血癥相關(guān)的疾病靶點231個。將231個疾病靶點與281個中藥類藥活性成分的作用靶點在線繪制韋恩圖（https：//www.omicshare.com/），結(jié)果顯示，高脂血癥與荷丹片類藥成分共同作用靶點20個，分別為CYP19A1、PPARA、CYP2D6、CYP2C19、F2、CYP2C9、ALB、PTGS1、CYP27A1、NR1I2、ADRB2、ESRRA、AKR1B1、SOAT1、ACHE、PPARG、NOS3、MTTP、ABCB1、AHR，此即荷丹片治療高脂血癥具有重要意義的作用靶點。在STRING數(shù)據(jù)平臺（https：//string-db.org/）在線輸入20個共同作用靶點，選擇物種為“homo sapiens”，檢索獲得蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，設(shè)置置信度蛋白質(zhì)參數(shù)評分值＞0.4，分析后得到PPI作用網(wǎng)絡(luò)圖，在網(wǎng)絡(luò)中，1個節(jié)點的度（degree）表示網(wǎng)絡(luò)中和節(jié)點相連的路線的條數(shù)，degree越高，說明在PPI中起著更為關(guān)鍵的作用，結(jié)果提示degree值較高的潛在靶點分別是 CYP2C19、CYP2C9、F2、ALB、PTGS1、PPARA、ESRRA、CYP2D6、ADRB2，見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖1。

2.3 構(gòu)建中藥-活性成分-疾病-靶點互作網(wǎng)絡(luò) 在Cytoscape3.6.0軟件中導(dǎo)入中藥、活性成分、疾病、作用靶點的信息進(jìn)行拓?fù)浞治觯玫胶傻て兴?活性成分-疾病-靶點可視化網(wǎng)絡(luò)圖，此網(wǎng)絡(luò)包括67個節(jié)點、196條邊（黃色方形節(jié)點代表中藥，黃色圓形節(jié)點代表疾病，綠色節(jié)點代表化合物，紅色節(jié)點代表靶蛋白）。由圖2可見，不同的靶點可對應(yīng)同一個的活性成分，單個靶點也可與不同的活性成分相對應(yīng)，由此可見荷丹片治療高脂血癥具有多成分、多靶點的作用特點。通過Degree值的大小，荷丹片中發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂作用的中藥主要是丹參、山楂、補骨脂，其中關(guān)鍵的化合物為 Ergosterol、Guercetol、Corylinal、（X {2212}）-Epicatechin，Epicatechin，Epicatechin，Epicatechol，Epigallocatechin、neocryptotanshinone、Isoneobavachalcone等，關(guān)鍵的作用靶點為 PTGS1、ADRB2、F2、PPARG 等。

圖2 中藥-化合物-核心靶點-疾病的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

2.4 GO功能富集分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫對荷丹片-高脂血癥潛在靶點進(jìn)行動態(tài)GO富集分析，荷丹片和高脂血癥的交集靶基因共20個，影響了199個生物學(xué)過程，篩選得到P-value＜0.05的GO條目33個，其中細(xì)胞組分（CC）條目10個，分子功能（MF）條目6個、生物過程（BP）條目17個，見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖3。P-value越小的通路，與荷丹片治療高脂血癥關(guān)系越為密切。GO分析結(jié)果顯示，富集比例較高，P值較小的在CC分析，開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖4中為內(nèi)膜系統(tǒng)（endomembrane system）、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（endoplasmic reticulum）、細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)合細(xì)胞器（intracellularmembrane-boundedorganelle）、膜結(jié)合細(xì)胞器（membrane-bounded organelle）、細(xì)胞質(zhì)部分（cytoplasmic part）、高爾基體（Golgi apparatus）等；MF分析，開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖5中為氧化還原酶活性（oxidoreductase activity）、脂質(zhì)結(jié)合（lipid binding）、離子結(jié)合（ion binding）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性（signal transducer activity）、核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性（nucleic acid binding transcription factor activity）等；BP分析，開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖6中為脂質(zhì)代謝過程（lipid metabolic process）、單細(xì)胞代謝過程（single-organism metabolic process）、小分子代謝過程（small molecule metabolic process）、細(xì)胞增殖（cell proliferation）、 有機物代謝過程（organic substance metabolic process）等。

2.5 KEGG通路富集分析 利用DAVID數(shù)據(jù)庫對荷丹片治療高脂血癥的潛在靶點進(jìn)行KEGG通路富集分析，見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖7，得到52條信號通路，顯著性較大的前20條信號通路見開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼圖8，其中P-value≤0.05的信號通路有13條，結(jié)果顯示荷丹片治療高脂血癥的靶標(biāo)主要與含血清素的神經(jīng)突觸（Serotonergic synapse）、PPAR 信號通路（PPAR signaling pathway）、藥物代謝細(xì)胞色素P450（Drug metabolism cytochrome P450）、花生四烯酸代謝（Arachidonic acid metabolism）、亞油酸的新陳代謝（Linoleic acid metabolism）、膽固醇代謝（Cholesterol metabolism）、脂肪細(xì)胞脂解的調(diào)節(jié)（Regulation of lipolysis in adipocyte），細(xì)胞色素P450對外源性藥物代謝的影響（Metabolism of xenobiotics by cytochrome P450）、精氨酸生物合成（Arginine biosynthesis）、類固醇生物合成（Steroid biosynthesis）、初級膽汁酸生物合成（Primary bile acid biosynthesis）、血小板激活（Platelet activation）、葉酸生物合成（Folate biosynthesis）、PKG信號通路戊糖和葡萄糖醛酸鹽相互轉(zhuǎn)化（cGMP-PKG signaling pathway Pentose and glucuronate interconversions）、cAMP 信號通路（cAMP signaling pathway）、果糖和甘露醇代謝（Fructose and mannose metabolism）、半乳糖代謝（Galactose metabolism）、鈣信號通路（Calcium signaling pathway）關(guān)系較為密切。

3 討論

荷丹片由荷葉、丹參、山楂、番瀉葉、補骨脂5味藥物配伍而成，具有化痰降濁、活血祛瘀之功效，用于高脂血癥屬痰濁挾瘀證者。方中荷葉祛濕降濁、升發(fā)清陽、健脾行氣，為君藥；山楂活血消積，行瘀通絡(luò)助荷葉清化濕熱，為臣藥；丹參活血祛瘀，涼血除煩，用補骨脂以溫補脾腎，扶正納氣，共為佐藥；番瀉葉為使藥，清熱利濕，行滯通便，全方升清降濁，補瀉兼施，合活血、行氣、化濕、利水、扶正于一方，共奏清熱化濕，健運脾陽，祛瘀活絡(luò)，暖肝益腎之功[9-10]，見圖9。徐麗瑛等[11]研究發(fā)現(xiàn)，荷丹片可降低NAFLD模型大鼠血脂和肝脂，改善肝臟病理組織學(xué)改變。周玉娟等[12]報道荷丹片可降低APOE-/-小鼠血脂和TNF-α、hs-CRP水平，升高脂聯(lián)素水平，從而抑制動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展。Tian等[13]發(fā)現(xiàn)高脂血癥和肥胖癥患者使用荷丹片治療12周后TG和LDL-C水平明顯降低。徐瑞霞等[14]研究發(fā)現(xiàn)荷丹片能使患者血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平輕度下降，總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（PCSK9）濃度無變化。荷丹片治療提高了高脂血癥患者高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）的大顆粒亞型的濃度和大顆粒亞型的比例，HDL-C小顆粒亞型的濃度及比例減少，但HDL-C的血漿水平無變化。

圖9 荷丹片治療痰濁瘀阻證高脂血癥思維導(dǎo)圖

本研究所收集的荷丹片治療高脂血癥的主要類藥活性成分61個，包括荷葉堿、環(huán)阿屯醇、丹參酮ⅡA、新隱丹參酮、丹參新酮、二氫丹參酮、丹參醇A、丹參醇B、香紫蘇醇、紫丹參素C、柳杉酚、異歐前胡素、多孔甾醇、谷甾醇、豆甾醇、丁二酸、麥角固醇、補骨脂異黃酮醛、補骨脂呋喃查耳酮等。Li等[15]將分離的SD大鼠脂肪組織懸浮于含三羧酸溶液的器官浴中，觀察了荷葉水提取物對游離脂肪酸（FFA）釋放的影響，結(jié)果表明荷葉水提物能有效促進(jìn)游離脂肪組織中FFA釋放；體內(nèi)實驗中，荷葉水提物大大提高PPAR-γ和瘦素的表達(dá)，可促進(jìn)脂質(zhì)動員和分解，顯著降低實驗性肥胖大鼠的體質(zhì)量和血脂。Chao等[16]研究發(fā)現(xiàn)荷葉堿通過PPAR/PGC1信號通路減輕STZ誘導(dǎo)的高脂飲食糖尿病小鼠肝臟脂代謝紊亂。Lim等[17]觀察了丹參甲醇提取物對高脂飲食誘導(dǎo)高脂血癥小鼠的影響，研究表明丹參甲醇提取物對高脂血癥小鼠體質(zhì)量增加無顯著影響，但能顯著降低血液TG含量，發(fā)現(xiàn)在DNA復(fù)制中起關(guān)鍵作用的微小脂質(zhì)體維持（Mcm）家族蛋白是改善高脂血癥的分子靶點。二氫丹參酮I通過抑制膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）降低高脂血癥大鼠血清和肝臟中TC和TG[18]。植物甾醇破壞膠束中膽固醇的增溶作用，并能抑制NPC1L1和HMG-CoA還原酶在小腸中的表達(dá)，減少膽固醇進(jìn)入腸細(xì)胞，進(jìn)而降低血漿膽固醇濃度[19]。山楂醇提物可以顯著下調(diào)膽固醇生物合成中的限速酶HMGCR，上調(diào)膽固醇7-羥化酶（CYP7A1），催化膽固醇代謝轉(zhuǎn)化為膽汁酸[20]。常燕琴等[21]研究發(fā)現(xiàn)補骨脂水煎劑可改善去卵巢肥胖大鼠的脂代謝紊亂，清除過多的自由基，提高脂質(zhì)抗氧化能力。Zhou等[22]研究數(shù)據(jù)表明補骨脂（PC）能顯著改善非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎（NAFLD/NASH）小鼠的肝功能異常、肝臟TG、TC積累和胰島素抵抗。PC還緩解了肝脂肪變性，炎性細(xì)胞浸潤和門脈區(qū)域的纖維化。另外，PC抑制NF-κB的活化和炎性因子的mRNA表達(dá)，同時增強肝組織中的PI3K/Akt信號傳導(dǎo)。PC還可以降低肝臟中的超氧陰離子水平，肝組織中NADPH氧化酶的活性以及p47phox蛋白的表達(dá)和PKCα的活化。因此PC可有效治療幼年小鼠NASH，其機制可能與通過PKC-α/NADPH氧化酶信號傳導(dǎo)途徑減輕肝氧化應(yīng)激有關(guān)。

荷丹片治療高脂血癥的中藥-活性成分-疾病-靶點可視化網(wǎng)絡(luò)圖推測發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂作用的中藥主要是丹參、山楂、補骨脂，其中關(guān)鍵的化合物為Ergosterol、Guercetol、Corylinal、（X{2212}）-Epicatechin，Epicatechin，Epicatechin，Epicatechol，Epigallocatechin、neocryptotanshinone、Isoneobavachalcone 等，關(guān)鍵的作用靶點為 PTGS1、ADRB2、F2、PPARG 等。荷丹片中關(guān)鍵成分是否可通過作用于PTGS1、ADRB2、F2、PPARG調(diào)節(jié)相關(guān)通路達(dá)到改善血脂的作用仍需相關(guān)實驗研究進(jìn)一步證實與探討。

通過GO生物學(xué)富集分析發(fā)現(xiàn)，荷丹片的活性成分可能通過改善氧化還原酶活性（oxidoreductase activity）、脂質(zhì)結(jié)合（lipid binding）、離子結(jié)合（ion binding）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性（signal transducer activity）、核酸結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性（nucleic acid binding transcription factor activity）、 脂 質(zhì) 代 謝 過 程（lipid metabolic process）、單細(xì)胞代謝過程（single-organism metabolic process）、小分子代謝過程（small molecule metabolic process）、細(xì)胞增殖（cell proliferation）、有機物代謝過程（organic substance metabolic process）等生物學(xué)過程發(fā)揮調(diào)節(jié)血脂的作用。

KEGG通路富集分析結(jié)果表明，荷丹片關(guān)鍵基因靶點富集的主要通路涉及含血清素的神經(jīng)突觸（Serotonergic synapse），PPAR 信 號 通 路（PPAR signaling pathway），藥物代謝細(xì)胞色素P450（Drug metabolism cytochrome P450），花生四烯酸代謝（Arachidonic acid metabolism），亞油酸的新陳代謝（Linoleic acid metabolism），膽固醇代謝（Cholesterol metabolism），脂肪細(xì)胞脂解的調(diào)節(jié)（Regulation of lipolysis in adipocyte）等。含血清素的神經(jīng)突觸（Serotonergic synapse）以多種方式對大腦功能進(jìn)行調(diào)節(jié)，涉及睡眠-覺醒周期、食欲、情緒和心理健康等關(guān)鍵方面。既往研究表明，通過刺激含血清素的神經(jīng)突觸（Serotonergic synapse）把血清素（5-羥色胺）釋放到大腦突觸中，通過直接刺激突觸后血清素受體，抑制其再攝取到突觸前神經(jīng)元。根據(jù)控制食欲的血清素假說，這些效應(yīng)可以減少食物攝入量，從而減輕體質(zhì)量[23]。過氧化物酶體增殖激活受體信號通路（PPAR signaling pathway）被認(rèn)為是治療代謝綜合征及其相關(guān)危險因素的潛在治療靶點。PPAR是一類由配體激活的核轉(zhuǎn)錄因子，分為PPARα、PPARβ、PPARγ 3種亞型。PPARα和PPARγ主要參與調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、胰島素敏感性和葡萄糖穩(wěn)態(tài)，其激動劑用于治療高脂血癥和2型糖尿病。而PPARβ的功能是調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，葡萄糖穩(wěn)態(tài)，抗炎和脂肪酸氧化，其激動劑用于治療代謝綜合征和心血管疾病[24]。細(xì)胞色素 P450（Cytochrome P450）是肝微粒體混合功能氧化酶中最重要的一族，是一組由多種同工酶組成的超家族，能夠介導(dǎo)多種內(nèi)源性和外源性物質(zhì)的代謝，在這些物質(zhì)的氧化性代謝中起到重要作用[25]?；ㄉ南┧岽x（Arachidonic acid metabolism）通路在心血管疾病和代謝性疾病的病理生理學(xué)中起著至關(guān)重要的作用?；ㄉ南┧峒捌溲苌飳I養(yǎng)代謝與免疫、炎癥聯(lián)系起來，在肥胖、糖尿病、非酒精性脂肪肝和心血管疾病等常見疾病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用[26]。脂肪三酰甘油脂肪酶（ATGL）是主要介導(dǎo)三酰甘油分解代謝的酶，膳食中適量的花生四烯酸可以下調(diào)ATGL的表達(dá)，改善脂質(zhì)代謝和抗氧化反應(yīng)，保持脂類分解與生成的平衡[27]。

綜上所述，本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的技術(shù)與方法，發(fā)現(xiàn)荷丹片中的主要藥效成分Ergosterol、Guercetol、Corylinal、（X{2212}）-Epicatechin，Epicatechin，Epicatechin，Epicatechol，Epigallocatechin、neocryptotanshinone、Isoneobavachalcone可通過 PTGS1、ADRB2、F2、PPARG 等多個靶點參與，涉及含血清素的神經(jīng)突觸、PPAR信號通路、藥物代謝細(xì)胞色素P450、花生四烯酸代謝、亞油酸的新陳代謝、膽固醇代謝、脂肪細(xì)胞脂解的調(diào)節(jié)等信號通路，初步清晰地闡述了荷丹片的主要藥效成分及其作用靶點和相關(guān)通路在高脂血癥治療中具有重要的研究價值，結(jié)論雖然尚有待于后續(xù)的實驗驗證，但為更多的基礎(chǔ)研究及臨床研究提供了理論基礎(chǔ)。