β-地中海貧血患兒血小板參數(shù)顯示不全原因分析

張白杜 李文利 鮑麗娟 張林圓 顧曉瓊， 皮 蕾

1 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心臨床檢驗(yàn)部(廣州 510000) 2 廣州市婦女兒童醫(yī)療中心臨床生物資源庫(廣州 510000)

β-地中海貧血(β-thalassemia，β-地貧)，是β-珠蛋白基因突變導(dǎo)致β-珠蛋白生成障礙性的溶血性貧血，是一組常染色體遺傳性疾病，我國南方地區(qū)如廣西、海南、貴州及廣東等地區(qū)多見[1]，患兒表現(xiàn)為不同嚴(yán)重程度的慢性進(jìn)行性溶血，呈小細(xì)胞低色素性貧血[2]。

絕大部分β-地貧患者表型的嚴(yán)重程度主要取決于其β珠蛋白基因型。正常β-珠蛋白基因型為βN/βN。靜止型β-地貧基因型為β++/βN，紅細(xì)胞參數(shù)為基本正?；蚺R界，通常僅能通過分子診斷識(shí)別。輕型β-地貧基因型為β+/βN或β0/βN，表現(xiàn)為小細(xì)胞低色素和血紅蛋白(hemoglobin，Hb)A2值升高，靜止型和輕型β-地貧個(gè)體均無臨床癥狀，無需治療。中間型β-地貧基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異比較大，患者存在輕中度貧血，無需終生依賴輸血，但在某些臨床狀況下如感染、手術(shù)或妊娠等需要偶爾或間斷輸注紅細(xì)胞，又稱非輸血依賴型地貧(non-transfusion-dependent thalassemia，NTDT)。而重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，表現(xiàn)為嚴(yán)重貧血(Hb持續(xù)<70 g/L)，需終生定期輸血并配合規(guī)范的除鐵治療才能存活，因此也稱為輸血依賴型地貧(transfusion-dependent thalassemia，TDT)[3-4]。

β-地貧常規(guī)血細(xì)胞分析，主要表現(xiàn)為紅細(xì)胞參數(shù)的變化，如紅細(xì)胞數(shù)量(red blood cell，RBC)減少，Hb降低，平均紅細(xì)胞體積(mean corpuscular volume，MCV)降低等，直方圖表現(xiàn)為波峰左移，峰底變寬(MCV減少，紅細(xì)胞分布寬度增大)。在臨床實(shí)際工作中時(shí)我們發(fā)現(xiàn)，β-地貧患兒血常規(guī)檢查表現(xiàn)不僅有紅細(xì)胞參數(shù)的改變，部分患兒的血小板(platelet，PLT)參數(shù)也出現(xiàn)異常，直方圖出現(xiàn)URI(upper region interference)報(bào)警[5]，分布峰的右側(cè)上揚(yáng)，呈拖尾狀，并且常伴有PLT參數(shù)顯示不全的現(xiàn)象。PLT相關(guān)參數(shù)反映PLT的數(shù)量、大小及分布狀態(tài)，主要包括PLT計(jì)數(shù)、PLT壓積(plateletcrit，PCT)、PLT平均容積(mean platelet volume，MPV)、PLT分布寬度(platelet distribution width，PDW)和大PLT比率(platelet large cell ratio，P-LCR)，這些參數(shù)在一定程度上反映PLT活性變化或新生PLT數(shù)量比例、以及骨髓的代償增生情況。為調(diào)查β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全的情況和原因，本研究對(duì)301例確診β-地貧患兒在Sysmex-2100進(jìn)行血細(xì)胞分析，根據(jù)基因分型將病例分為重型β-地貧組和非重型β-地貧組，對(duì)患兒PLT參數(shù)顯示情況進(jìn)行比較分析。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2017年4月—2020年4月我院確診β-地貧患兒301例，其中男180例，女121例，年齡25天至18歲，所有病例均為骨髓移植前病例，按基因分型分為重型組和非重型組：重型組基因型為β+/β0或β0/β0，共計(jì)204例，其中男126例，女78例；其他基因型的病例分為非重型組，共計(jì)97例，其中男55例，女42例。

1.2 資料

血液分析儀采用Sysmex-2100全自動(dòng)血液分析儀，檢測(cè)試劑為其配套試劑和質(zhì)控品(日本希斯美康株式會(huì)社)；顯微鏡(日本OLYMPUS-CX21)，瑞氏-吉姆薩染色液(貝索生物技術(shù)公司)，EDTA-K2真空抗凝采血管(廣州陽普醫(yī)療科技股份有限公司)。

1.3 方法

采用Sysmex-2100對(duì)301例β-地貧患兒進(jìn)行血細(xì)胞分析，血涂片制作依照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(第三版)，經(jīng)瑞氏-吉姆薩染色后，由主管技師及以上檢驗(yàn)人員進(jìn)行人工鏡檢，所有操作按照實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行(在采血后2 h內(nèi)完成檢測(cè))。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié) 果

301例β-地貧患兒中，重型組204例，其中男126例，女78例；非重型組97例，其中男55例，女42例；兩組患兒年齡及男女比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。血常規(guī)結(jié)果顯示，PLT參數(shù)顯示不全者102例，占比33.89%；重型β-地貧組PLT參數(shù)顯示不全者75例，非重型β-地貧組PLT參數(shù)顯示不全者27例，兩組患兒PLT參數(shù)顯示不全比例差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表1。

表1 重型β-地貧和非重型β-地貧PLT參數(shù)顯示不全比例對(duì)比情況

PLT參數(shù)顯示不全的102例中，PLT直方圖異常93例，占91.18%。瑞氏-吉姆薩染色PLT參數(shù)顯示不全的血涂片，鏡檢主要表現(xiàn)為小紅細(xì)胞低色素、紅細(xì)胞大小不一，可見橢圓形、靶形紅細(xì)胞等異型紅細(xì)胞以及紅細(xì)胞碎片的97例，占95.10%。對(duì)比PLT參數(shù)顯示不全病例和PLT參數(shù)全顯示病例的MCV值，PLT參數(shù)全顯示病例的MCV高于PLT參數(shù)顯示不全病例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，結(jié)果見表2。

表2 PLT參數(shù)顯示不全病例與PLT參數(shù)全顯示病例MCV差異情況

3 討 論

β-地中海貧血是由于血紅蛋白β基因缺陷所導(dǎo)致的β鏈合成障礙性疾病。臨床多表現(xiàn)為慢性進(jìn)行性面色蒼白，部分具有典型珠蛋白貧血面容，嚴(yán)重者肝脾腫大等，當(dāng)患兒出現(xiàn)脾功亢進(jìn)時(shí)，可表現(xiàn)為紅系和白系細(xì)胞不同程度地減少。地貧患兒對(duì)PLT影響不一，α-地貧一般無明顯影響，重度β-地貧可能出現(xiàn)PLT升高[6]。

某些疾病中，患者的PLT參數(shù)如MPV、PDW、PCT及P-LCR可能發(fā)生明顯變化，這些變化與患者自身的因素及藥物作用有關(guān)，與疾病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的判斷都密切相關(guān)[7-8]。Sysmex-2100血細(xì)胞分析儀的PLT檢測(cè)是采用激光法和電阻抗法雙通道技術(shù)，激光法運(yùn)用PLT-O/RET通道，電阻抗法運(yùn)用RBC/PLT通道。電阻抗法為日常操作中常規(guī)使用，即在RBC/PLT通道內(nèi)通過顆粒大小來鑒別RBC和PLT，在25～250 fl的范圍內(nèi)計(jì)數(shù)紅細(xì)胞，在2～30 fl的范圍內(nèi)計(jì)數(shù)PLT，由于PLT與紅細(xì)胞共用同一RBC/PLT通道，因此，當(dāng)有小紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片存在時(shí)，就會(huì)被誤判為PLT，從而產(chǎn)生PLT增高的假象。而大PLT可能被誤判為紅細(xì)胞，從而造成PLT假性降低，兩種情況均使PLT直方圖發(fā)生異常改變。因此，PLT的測(cè)量信號(hào)易受影響，紅細(xì)胞碎片、小紅細(xì)胞等因素導(dǎo)致假性升高，而PLT凝集、大PLT等因素則引起PLT假性降低。

PLT參數(shù)顯示不全原因多種多樣，除標(biāo)本因素、操作因素、病理因素、生理狀態(tài)、臨床用藥影響等之外，紅細(xì)胞的變化如小細(xì)胞、低色素、紅細(xì)胞大小不一及紅細(xì)胞碎片等也是影響PLT參數(shù)顯示的重要因素。β-地貧患兒由于珠蛋白合成障礙，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜僵硬，紅細(xì)胞容易變形，并且在循環(huán)中容易遭受各種機(jī)械損傷從而形成紅細(xì)胞碎片[9]。因此血涂片鏡檢時(shí)以小細(xì)胞低色素性及大小不一的紅細(xì)胞為主要表現(xiàn)，常見紅細(xì)胞碎片，偶見橢圓形及靶形等異型紅細(xì)胞，上述細(xì)胞及碎片，均可被血細(xì)胞分析儀誤判為PLT系，導(dǎo)致PLT計(jì)數(shù)假性升高，超出血細(xì)胞分析儀設(shè)定的參數(shù)范圍時(shí)則出現(xiàn)PLT參數(shù)顯示不全的情況[10]。在此次研究中，102例PLT參數(shù)顯示不全標(biāo)本MCV低于PLT參數(shù)全顯示的標(biāo)本，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，血涂片瑞氏-吉姆薩染色鏡檢也驗(yàn)證了有小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、PLT聚集97例，占95.10%，證明了這一觀點(diǎn)。因此，對(duì)儀器檢測(cè)PLT參數(shù)顯示不全的標(biāo)本，均應(yīng)進(jìn)行血涂片瑞氏-吉姆薩染色，顯微鏡復(fù)檢積極查找原因。由于Sysmex-2100血細(xì)胞分析儀PLT-O通道采用了DNA/RNA核酸熒光染色，在檢測(cè)含有小紅細(xì)胞、細(xì)胞碎片、或大PLT的標(biāo)本時(shí)，有較強(qiáng)的抗干擾能力[11]，因此，對(duì)于PLT參數(shù)顯示不全的標(biāo)本，應(yīng)使用網(wǎng)織紅細(xì)胞通道或PLT激光流式法(PLT-O)檢測(cè)PLT。

β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全中，PLT直方圖異常共93例，占91.18%，表明絕大多數(shù)PLT參數(shù)顯示不全的結(jié)果會(huì)表現(xiàn)為PLT直方圖異常。從異常的PLT直方圖形態(tài)可初步判斷其原因：小紅細(xì)胞干擾引起的PLT直方圖異常主要表現(xiàn)為直方圖右側(cè)翹尾，整條曲線基本是平滑的；而PLT凝集、細(xì)胞碎片或紅細(xì)胞變形時(shí)的異常PLT直方圖則表現(xiàn)為右側(cè)上翹，并且整條曲線不規(guī)則，尤其是右側(cè)曲線，可能出現(xiàn)鋸齒狀表現(xiàn)。因此，臨床工作中可通過PLT直方圖正常與否以及形態(tài)可大致判斷PLT參數(shù)的可信度，以及影響PLT參數(shù)顯示的原因。同時(shí)說明該儀器的報(bào)警信息可信度較高[12-14]，應(yīng)密切關(guān)注儀器的報(bào)警信息。

PLT檢測(cè)是研究止血與凝血功能的主要指標(biāo)之一，其檢測(cè)結(jié)果的可靠性至關(guān)重要。β-地貧患兒PLT參數(shù)顯示不全發(fā)生比例較高，可能影響臨床判斷。對(duì)于PLT參數(shù)顯示不全的β-地貧患兒標(biāo)本，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參考PLT直方圖形態(tài)，使用網(wǎng)織紅細(xì)胞或PLT-O通道檢測(cè)，并進(jìn)行血涂片瑞氏-吉姆薩染色，顯微鏡復(fù)檢，以提供準(zhǔn)確而有臨床價(jià)值的信息資料，使臨床醫(yī)生對(duì)患者做出正確的診斷和有效的治療。