三陰性乳腺癌早期患者雄激素受體、Ki67、p53、表皮生長因子受體表達水平及其與臨床病理特征關(guān)系研究

徐英杰，李 巍

(錦州醫(yī)科大學(xué)，遼寧 錦州 121001)

隨著乳腺癌治療研究和癌癥篩查的快速發(fā)展，越來越多的患者在患病早期便能得到及時的診斷和治療，從而有效提升治愈的可能并改善預(yù)后[1-2]。其中，各類癌癥因子、腫瘤標志物的檢測和分析對癌癥篩查工作的進行提供了巨大的幫助，傳統(tǒng)檢測指標如雌激素受體(Estrogen receptor，ER)、孕激素受體(Progesterone receptor，PR)及人類表皮生長因子受體-2(Human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)對于常規(guī)Luminal A和Luminal B型乳腺癌均具有較好的診斷價值[3-4]。但對于上述指標表達均為陰性的三陰性乳腺癌(Triple-negative breast cancer，TNBC)，常見的檢測指標難以判斷此種高度異質(zhì)性腫瘤的發(fā)生。同時，根據(jù)已有文獻和報道[5-7]，TNBC的侵襲性更強，遠端轉(zhuǎn)移可能性更高，特異治療手段的缺乏也使得患者預(yù)后更差，且患者的腫瘤標志物水平較非三陰性乳腺癌(Non-triple-negative breast cancer，NTNBC)呈現(xiàn)不同的表現(xiàn)特征。本研究對比TNBC和NTNBC早期患者雄激素受體(Androgen receptor，AR)、Ki67、p53和表皮生長因子受體(Epidermal growth factor receptor，EGFR)等指標，以揭示TNBC患者在患病早期各指標的變化情況及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院于2018年1月至2020年12月間收治的經(jīng)臨床病理診斷確診的TNBC早期患者80例作為TNBC組，其中年齡36～74歲，平均(52.38±4.10)歲；腫瘤<2 cm者55例，腫瘤≥2 cm者25例。病例納入標準：①患者經(jīng)穿刺病理活檢確診為乳腺癌；②患者病理標本檢測均顯示ER、PR及HER-2表達陰性；③根據(jù)世界衛(wèi)生組織第5版乳腺腫瘤分類[8]和美國癌癥聯(lián)合委員會第8版乳腺癌分期系統(tǒng)[9]確認臨床分期為0-Ⅱ期的早期乳腺癌；④患者入院前未接受任何形式的手術(shù)治療、放療或化療。排除標準：①合并存在其他嚴重器質(zhì)性病變或臟器功能不足；②合并存在其他惡性腫瘤；③精神狀態(tài)較差，無法有效配合研究的開展。另外，選取同期于院內(nèi)進行治療的臨床分期為0-Ⅱ期的NTNBC患者80例作為NTNBC組，排除合并其他嚴重疾病及精神疾病，其中年齡34 ～77歲，平均(53.16±4.37)歲；腫瘤<2 cm者53例，腫瘤≥2 cm者27例。兩組患者年齡、腫瘤大小比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。本研究具體方案和內(nèi)容經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會審核通過，患者本人及其家屬對研究內(nèi)容知曉且簽署知情同意書。

1.2 研究方法 采集患者腫瘤組織部位標本，應(yīng)用10%甲醛溶液進行石蠟包埋處理后連續(xù)切片。對切片標本進行脫蠟水化處理和微波修復(fù)抗原處理，分別加入鼠抗人AR、Ki67、p53及EGFR單克隆一抗(批號依次為LOT210601、LOT210528、LOT210601、LOT210601，上海鈺博生物科技有限公司)。次日取出標本加入磷酸鹽緩沖液進行清洗后再次加入對應(yīng)標記的二抗(批號依次為LOT210601、LOT210528、LOT210601、LOT210601，上海鈺博生物科技有限公司)室溫孵育30 min，最后利用二氨基聯(lián)苯胺進行顯色沖洗，蘇木精復(fù)染后進行封片判讀。判讀時將已經(jīng)確認為陽性的腫瘤組織切片作為陽性對照，將磷酸鹽緩沖液沖洗后的切片作為陰性對照。由病理科兩位具有判讀經(jīng)驗的醫(yī)師按照實驗說明進行雙盲判讀：AR視野內(nèi)腫瘤細胞核著色比例<10%判為陰性(-)，≥10%判為陽性(+)；Ki67視野內(nèi)腫瘤細胞核著色比例<14%判為陰性(-)，≥14%判為陽性(+)；p53視野內(nèi)腫瘤細胞核著色比例<10%判為陰性(-)，≥10%判為陽性(+)；EGFR視野范圍內(nèi)出現(xiàn)任何數(shù)量的腫瘤細胞胞質(zhì)或胞膜著色即判為陽性(+)，否則判為陰性(-)。

1.3 觀察指標 比較兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況，分析TNBC組內(nèi)患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況與患者臨床病理特征(年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤組織脈管內(nèi)浸潤)的關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況比較 見表1。TNBC組患者AR陽性表達率顯著低于NTNBC組，Ki67、p53及EGFR陽性表達率顯著高于NTNBC組(均P<0.05)。

表1 兩組患者AR、Ki67、p53及EGFR表達情況比較[例(%)]

2.2 TNBC患者臨床病理特征與AR、Ki67表達情況關(guān)系 見表2。AR陽性表達患者中無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比例高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)。Ki67陽性表達患者中組織學(xué)分級Ⅱ期患者比例高于Ⅰ期患者(P<0.05)。

2.3 TNBC患者臨床病理特征與p53、EGFR表達情況關(guān)系 見表3。p53和EGFR陽性表達患者中有脈管內(nèi)浸潤患者比例高于無脈管內(nèi)浸潤患者(均P<0.05)。EGFR陽性表達患者中腫瘤直徑≥2 cm的患者比例高于腫瘤直徑<2 cm的患者(P<0.05)。

表2 TNBC患者臨床病理特征與AR、Ki67表達情況關(guān)系[例(%)]

表3 TNBC患者臨床病理特征與p53、EGFR表達情況關(guān)系[例(%)]

3 討 論

TNBC是目前臨床實踐中比較棘手的一類乳腺癌分型[10]。報道[11-12]顯示，TNBC患者相較于其他分型的乳腺癌患者，腫瘤組織呈現(xiàn)更強的侵襲性，更易發(fā)生遠端轉(zhuǎn)移和脈管內(nèi)浸潤，患者預(yù)后情況往往較差，且生存率也較低。同時，由于TNBC組織的ER、PR和HER-2表達均為陰性，針對Luminal分型腫瘤的內(nèi)分泌治療方案無法應(yīng)用于TNBC患者的治療，抗HER-2靶向藥物也在TNBC患者的治療中收效甚微，特異治療方案的缺乏和患者病情的迅速發(fā)展使得TNBC成為目前學(xué)界對于乳腺癌研究的關(guān)注重點[13]。

從TNBC的發(fā)生機制看，典型內(nèi)分泌指標的低表達決定了其與常見的激素依賴型乳腺癌的發(fā)生存在顯著區(qū)別。按照激素依賴的治療路徑，ER、PR表達陽性的乳腺癌可以通過針對性的激素調(diào)節(jié)得以治療，但在TNBC中ER和PR的表達并不活躍，激素調(diào)節(jié)的治療路徑并不可行[14]。但乳腺癌患者體內(nèi)的激素變化并不限于ER和PR，AR受體在乳腺細胞的增殖中同樣發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。從相關(guān)研究[15-16]來看，AR對于ER和PR的應(yīng)答均有一定的反饋促進作用，尤其在Luminal A型乳腺癌中AR表達與ER和PR呈現(xiàn)顯著正相關(guān)性，因此通過免疫組化測定患者AR表達情況對于分型判斷、預(yù)后評估和病情分析均具有重要價值。本研究中，AR陽性表達患者比例在TNBC患者中更低，且AR陰性表達的TNBC患者更易發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，可見AR在抑制癌細胞增殖、控制遠端轉(zhuǎn)移發(fā)生中存在一定作用。馬少君等[17]研究也認為，AR能夠激活乳腺癌相關(guān)靶細胞以及靶細胞下游介導(dǎo)的細胞增殖通路，從而抑制腫瘤組織的增殖并降低轉(zhuǎn)移發(fā)生的可能性。

Ki67是腫瘤組織增殖細胞的重要核抗原，在腫瘤組織細胞的增殖和凋亡中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，因此Ki67表達情況在抗腫瘤研究領(lǐng)域被廣泛用于評價腫瘤細胞增殖[18-19]。本研究中，TNBC患者Ki67陽性表達比例較NTNBC患者更高，且Ki67陽性表達患者的組織學(xué)分級更高，可見Ki67在TNBC患者細胞增殖中同樣發(fā)揮重要的作用，但Ki67較為普遍的評價意義對于特異化治療方案的制訂參考價值有限。

p53是人體細胞中重要抑癌基因的表達產(chǎn)物，但半衰期極短，難以使用現(xiàn)有檢驗學(xué)手段測定。但在某些致癌因素的影響下，p53會出現(xiàn)從抑癌基因轉(zhuǎn)化為顯性癌基因的情形，從而使p53不再存在抑癌的特性，轉(zhuǎn)而作用于癌細胞的增殖和轉(zhuǎn)移，這種突變型p53基因的表達產(chǎn)物在癌細胞組織中較為穩(wěn)定，易被免疫組化法所測定[20]。本研究中，在TNBC患者中有較高比例呈現(xiàn)p53陽性，且p53陽性患者更易出現(xiàn)脈管內(nèi)浸潤。而EGFR作為典型的表皮生長因子指標，在腫瘤細胞增殖中充當著重要角色，對于HER-2陰性表達患者，EGFR無疑是良好的參考指標[21]。本研究中，EGFR陽性表達的患者腫瘤直徑更長，且患者出現(xiàn)脈管內(nèi)浸潤的比例更高，提示EGFR和p53陽性在TNBC患者治療中具有重要參考價值。

綜上所述，TNBC早期患者AR表達降低，Ki67、p53、EGFR表達增加，且各指標與TNBC早期患者臨床病理特征間均存在一定相關(guān)關(guān)系。