深圳地區(qū)妊娠期子癇前期孕婦血清中IL-22，IL-17，IL-10，TGF-β水平表達(dá)及IL-22基因rs2227485 T/C位點多態(tài)性分析

崔普芳，龔 源，劉愛勝，李 喆，張 燕，季新梅，劉國棟

（深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院 a.婦產(chǎn)科；b.檢驗科，廣東深圳 518109）

子癇前期（preeclampsia，PE）是指妊娠20 周后出現(xiàn)以高血壓、蛋白尿為主要臨床特征的一種妊娠特異性綜合征[1-2]。PE 發(fā)生發(fā)展過程十分復(fù)雜，目前認(rèn)為PE 可能與遺傳、氧化應(yīng)激、免疫失衡、炎癥及胎盤功能異常等多種因素有關(guān)。有研究表明，輔助性T 細(xì)胞（T helper cells，Th）及其分泌的白細(xì)胞介素（interleukin，IL）家族成員水平及基因多態(tài)性突變在PE 發(fā)病和進(jìn)展中發(fā)揮了重要的作用，其中由Th17 分泌的IL-22 是一種促炎細(xì)胞因子，其基因多個位點存在多態(tài)性，且多態(tài)性分布存在地域性差異[3-6]，目前國內(nèi)少數(shù)地區(qū)已有相關(guān)研究報道，但深圳地區(qū)未見相關(guān)報道。為了探討IL-22水平及其基因多態(tài)性與PE 發(fā)病之間的相關(guān)性，本研究對深圳地區(qū)PE 和健康孕婦IL-22，IL-17，IL-10，TGF-β 水平及IL-22 基因rs2227485 T/C 多態(tài)性進(jìn)行了對比研究分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2019年3月～2020年12月深圳市龍華區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)中心確診的PE 孕婦87例為PE 組，年齡23～49 歲，平均年齡32.56±8.91歲；孕周20～29 周，平均25.02±3.18 周。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《妊娠期高血壓疾病診治指南（2015）》中PE 診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]，其中輕度PE 孕婦48 例，重度PE 孕婦39 例；②孕周≥20 周；③有規(guī)律產(chǎn)檢和資料完整者；④單胎孕婦者；⑤自愿并積極配合者；⑥患者及家屬知情同意者；⑦經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①伴有實質(zhì)器官性、免疫性及血液性等基礎(chǔ)疾病孕婦者；②伴有慢性高血壓、心臟病、肝病、腎病及糖尿病者；③多胎孕婦者；④甲狀腺功能異常者；⑤有免疫治療史者。另選取同期健康孕婦120 例為對照組，年齡22～50 歲，平均年齡33.07±9.78 歲；孕周21 ～30 周，平均25.73±3.65 周。確保兩組的年齡、孕周等一般性資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器與試劑 AE275 全自動酶免分析儀由深圳愛康科技有限公司提供；IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 酶聯(lián)免疫試劑盒由江蘇江萊生物科技有限公司提供；脫氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid，DNA）提取試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供；ABI7500 PCR 基因擴(kuò)增儀由美國ABI 公司提供。

1.3 方法

1.3.1 收集標(biāo)本： 均于清晨采集空腹外周靜脈血2份，其中1 份為EDTA-K2抗凝血，用于IL-22 基因rs2227485 T/C 位點單核苷酸多態(tài)性分析，另外1 份為無抗凝血，用于IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平檢測。

1.3.2 IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平檢測: 采用AE275 全自動酶免分析儀對IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平進(jìn)行檢測，操作按儀器和試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 DNA 提取: 采用DNA 提取試劑盒提取外周全血DNA，操作按儀器和試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.4 多態(tài)性分析: 采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（polymerase chain reaction - restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）法對IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態(tài)性進(jìn)行分析，具體操作參照文獻(xiàn)[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS22.0 統(tǒng)計軟件。計量資料服從正態(tài)或偏正態(tài)性分布以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以百分率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗；相關(guān)性采用Spearman 分析。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較 見表1。PE 組IL-22，IL-17 及TGF-β 水平比對照組明顯升高，而IL-10 水平比對照組明顯降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。

表1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平比較（±s）

表1 兩組IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β水平比較（±s）

項目 PE 組（n=87）對照組（n=120） t P IL-22（ng/L） 54.47±16.29 25.95±6.87 6.064 5 0.031 6 IL-17（ng/L） 51.86±15.35 28.43±6.18 4.851 3 0.037 2 IL-10（ng/L） 22.48±9.01 48.57±15.62 9.106 2 0.026 5 TGF-β（ng/ml） 19.62±2.51 8.36±1.73 8.395 1 0.029 4

2.2 不 同 程 度PE 孕 婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較 見表2。重度PE 孕婦血清中IL-22，IL-17 及TGF-β 水平明顯高于輕度PE 孕婦，而IL-10 水平明顯低于輕度PE 孕婦，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（均P<0.05）。

表2 不同程度PE 孕婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較（±s）

表2 不同程度PE 孕婦IL-22，IL-17，IL-10 及TGF-β 水平比較（±s）

項目 輕度PE 孕婦（n=48）重度PE 孕婦（n=39） t P IL-22（ng/L） 38.72±11.63 73.86±18.50 7.0145 0.0309 IL-17（ng/L） 43.86±13.74 61.70±17.28 3.4290 0.0371 IL-10（ng/L） 27.31±10.53 16.54±8.65 4.5822 0.0356 TGF-β（ng/ml） 13.57±2.12 27.06±3.24 8.1647 0.0287

2.3 Hardy-Weinberg 遺傳平衡檢驗結(jié)果 兩組孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態(tài)性均檢出TT，TC 和CC 三種基因型。經(jīng)χ2檢驗，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.907 1，1.203 4；P=0.120 7，0.092 3），表明IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型和等位基因頻率分布符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡定律，具有樣本代表性。

2.4 兩組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較 見表3。PE 組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型及C 等位基因頻率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表3 兩組IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較[n（%）]

2.5 不同程度PE 孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點基因型及等位基因頻率比較 見表4。重度PE孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型及C等位基因頻率明顯高于輕度PE 孕婦，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表4 不同程度PE 孕婦IL-22 基因rs2227485 T/C位點基因型及等位基因頻率比較[n（%）]

2.6 PE 組不同基因型孕婦IL-22 水平比較 CC 基因型孕婦血清中IL-22 水平（71.05±18.62ng/L）明顯高于CT 和TT 基因型（46.25±11.57ng/L 和41.83±10.28ng/L），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.506 4，3.723 6；P=0.031 2，0.029 5），但CT 和TT 基因型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=1.325 1，P=0.067 6）。

2.7 相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，PE 組孕婦血清中IL-22 與IL-17，TGF-β 水平呈正相關(guān)（r=0.790 3，0.695 8；P=0.025 1，0.293 2），而與IL-10 水平呈負(fù)相關(guān)（r=-0.617 2，P=0.031 6）。

3 討論

PE 是妊娠期常見的一種并發(fā)癥，常累及多個器官功能，出現(xiàn)一系列嚴(yán)重的母嬰并發(fā)癥，并易導(dǎo)致不良妊娠結(jié)局。PE 好發(fā)于孕中晚期，其發(fā)病率約為5%～14%，致死率約為10%～15%，且隨著我國“二孩政策”的全面開放呈明顯上升趨勢，嚴(yán)重威脅孕產(chǎn)婦及胎兒健康，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦及胎兒死亡的主要原因之一[8-10]。但PE 早期癥狀不明顯或較為輕微，易被漏診。因此，加強(qiáng)妊娠期PE 監(jiān)測和評估對早期診斷、治療、干預(yù)及預(yù)防PE 具有重要的臨床意義。

有研究表明，免疫耐受失衡特別是母胎界面的免疫耐受失衡所引起的激活免疫細(xì)胞比例發(fā)生改變，從而導(dǎo)致滋養(yǎng)細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)，是導(dǎo)致PE發(fā)病的重要因素之一，其中Th1/Th2 和/或Th1/Th17 比例失衡可能與PE 的發(fā)病有關(guān)[11]。有研究表明，PE 發(fā)生和進(jìn)展與多種細(xì)胞因子互相作用有密切關(guān)系[12-13]，其中Th17 是新發(fā)現(xiàn)的分泌IL-17 和IL-22 促炎細(xì)胞因子的一種CD4+T 淋巴細(xì)胞亞群，與多種自身免疫性和炎癥反應(yīng)性疾病有密切關(guān)系。轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）是反映胎盤功能狀態(tài)的一個指標(biāo)，正常狀態(tài)下呈低水平表達(dá)，當(dāng)胎盤功能異常時TGF-β 水平大幅增加。IL-10 是由Treg 細(xì)胞通過活化的初始CD4+T 細(xì)胞并在TGF-β 介導(dǎo)作用下所分泌的一種具有免疫抑制作用的細(xì)胞因子，其不僅可以抑制多種促炎細(xì)胞因子的產(chǎn)生，還可抑制一氧化氮（nitric oxide，NO）和腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）介導(dǎo)的免疫反應(yīng)發(fā)生，是維持妊娠必不可少的細(xì)胞因子之一。本研究結(jié)果顯示，PE 組IL-22，IL-17 及TGF-β 水平明顯升高，而IL-10 水平明顯降低，且與病情分級有關(guān)，與有關(guān)文獻(xiàn)報道的結(jié)論基本一致[11-13]，這表明促炎細(xì)胞因子在PE 孕婦體內(nèi)可能占主導(dǎo)地位，促使PE 發(fā)生和發(fā)展。此外，結(jié)果還顯示，PE 組IL-22 與IL-17，TGF-β 及IL-10 水平存在一定相關(guān)性，這可能與PE 孕婦Th17 細(xì)胞數(shù)明顯增加而Treg 細(xì)胞數(shù)減少有關(guān)，同時也表明Th17 可能是通過TGF-β 介導(dǎo)發(fā)揮作用的。

PE 病因和發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，目前尚未明確，多數(shù)認(rèn)為PE 與免疫耐受失衡、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)及遺傳等多種因素有關(guān)，其中遺傳在PE 發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮了重要的作用[14-15]。IL-22 是一種主要由Th17 細(xì)胞分泌的在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用的促炎細(xì)胞因子，其基因多個位點存在單核苷酸多態(tài)性。有研究表明，IL-22 基因多態(tài)性與PE 的易感性有關(guān)，但基因多態(tài)性分布因不同地區(qū)人群的遺傳背景、免疫及環(huán)境等因素的不同而可能存在一定差異[5]。本研究結(jié)果顯示，深圳地區(qū)PE 組IL-22基因rs2227485 T/C 位點CC 基因型頻率明顯高于對照組，且與病情分級有關(guān)，這表明深圳地區(qū)PE發(fā)病可能與IL-22 基因rs2227485 T/C 位點多態(tài)性突變有關(guān)，其中CC 基因型可能是該地區(qū)PE 發(fā)病的易感基因之一。另外，結(jié)果還顯示，CC 基因型PE孕婦IL-22 水平明顯高于其它基因型，這說明IL-22基因rs2227485 T/C 位點多態(tài)性在PE 發(fā)病中的作用機(jī)制可能是其基因突變通過影響IL-22 水平表達(dá)或改變其結(jié)構(gòu)來實現(xiàn)的，具體作用機(jī)制有待深入研究。

綜上所述，PE 孕婦血清中IL-22，IL-17 及TGF-β 明顯升高，而IL-10 水平明顯降低，且與PE 病情分級有關(guān)。同時IL-22 基因rs2227485 T/C位點多態(tài)性與深圳地區(qū)PE 發(fā)病有一定相關(guān)性。因此，加強(qiáng)孕婦細(xì)胞因子水平及基因多態(tài)性分析，對早期診斷、干預(yù)性治療及預(yù)防具有重要的意義。