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    2015~2019年北京市海淀區(qū)食源性腹瀉患者致瀉大腸埃希氏菌型別分布和耐藥性分析

    2021-12-14 06:09:08尹可欣韓喜榮施麗飛北京市海淀區(qū)疾病預(yù)防控制中心北京100094
    關(guān)鍵詞:耐藥檢測(cè)

    劉 偉,白 婧,尹可欣,韓喜榮,施麗飛(北京市海淀區(qū)疾病預(yù)防控制中心,北京 100094)

    致瀉大腸埃希氏菌(diarrheagenic Escherichia coli, DEC)是一類能引起人體以腹瀉癥狀為主的大腸埃希氏菌,可經(jīng)過(guò)污染食物引起人類發(fā)病。常見(jiàn)的DEC主要包括腸道致病性大腸埃希氏菌(EPEC)、腸道侵襲性大腸埃希氏菌(EIEC)、產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌(ETEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希氏菌(STEC)[包括腸道出血性大腸埃希氏菌(EHEC)]和腸道集聚性大腸埃希氏菌(EAEC)[1],為了解海淀區(qū)DEC 的型別分布特點(diǎn)和耐藥性情況,為食源性疾病的防控和治療提供參考,我們將2015~2019年海淀區(qū)開(kāi)展食源性疾病監(jiān)測(cè)的2 家哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本進(jìn)行了DEC 的分離培養(yǎng)、生化鑒定、多重實(shí)時(shí)熒光PCR 毒力基因測(cè)定和藥敏檢測(cè),檢測(cè)結(jié)果報(bào)告如下。

    1 材料與方法

    1.1 研究對(duì)象 2015~2019年海淀區(qū)開(kāi)展食源性疾病監(jiān)測(cè)的2 家哨點(diǎn)醫(yī)院送檢的1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本,病例定義為由食品或懷疑由食品引起的,以腹瀉為主要癥狀的病例,每日腹瀉≥3 次且糞便性狀異常的就診患者。

    1.2 試劑和儀器

    1.2.1 試劑:麥康凱、三糖鐵、營(yíng)養(yǎng)瓊脂購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司,GN 細(xì)菌生化鑒定卡購(gòu)自美國(guó)生物梅里埃公司,五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京卓成惠生生物科技股份有限公司;革蘭陰性需氧菌藥敏檢測(cè)板購(gòu)自上海星佰生物技術(shù)有限公司,所有試劑均在有效期內(nèi)使用。

    1.2.2 儀器:VITEK 2 compact 全自動(dòng)微生物生化鑒定系統(tǒng)由美國(guó)生物梅里埃公司生產(chǎn),7500fast 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀器由美國(guó)AB 公司生產(chǎn)。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 DEC 檢測(cè)方法:將糞便直接劃線接種在麥康凱培養(yǎng)基上培養(yǎng),挑選5 個(gè)以上可疑菌落進(jìn)行生化鑒定,然后用五種致瀉大腸埃希氏菌核酸多重實(shí)時(shí)熒光PCR 檢測(cè)試劑盒對(duì)菌株進(jìn)行特征性基因檢測(cè)。

    1.3.2 藥敏試驗(yàn)方法:對(duì)確認(rèn)為DEC 的菌株用微量肉湯稀釋法測(cè)定其藥物敏感性,用商品化藥敏板進(jìn)行檢測(cè),肉眼對(duì)藥敏板進(jìn)行判讀,得到最低抑菌濃度(minimum inbibitory concentration, MIC)值。對(duì)照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)獲得相應(yīng)敏感(S)、中度敏感(I)和耐藥(R)的結(jié)果。選擇大腸埃希氏菌ATCC 25922 作為藥敏試驗(yàn)質(zhì)控菌株。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 16.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,采用χ2檢驗(yàn),P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 1 810 份腹瀉病人糞便標(biāo)本DEC 檢出情況 見(jiàn)表1。1 810 份糞便標(biāo)本檢出DEC 214 株,檢出率為11.8%,各年度檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.858,P=0.028)。檢出DEC 共有四種型別,分別為EAEC 96 株(44.9%),ETEC 89 株(41.6%)EPEC 24 株(11.2%),EIEC 5 株(2.3%)。

    表1 2015~2019年各種DEC 分布情況[株(%)]

    2.2 藥敏試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表2。藥敏檢測(cè)結(jié)果顯示214 株菌除對(duì)亞胺培南無(wú)耐藥外,對(duì)其余11 種抗生素均有不同程度的耐藥。

    表2 214 株DEC 對(duì)12 種藥物敏感檢測(cè)結(jié)果[株(%)]

    2.3 214 株DEC 各年度耐藥率 見(jiàn)表3。結(jié)果顯示頭孢西丁、頭孢他啶和氯霉素呈現(xiàn)較低的耐藥性,而氨芐西林、復(fù)方磺胺、頭孢噻肟和四環(huán)素均呈現(xiàn)較嚴(yán)重的耐藥性。

    表3 214 株DEC 各年度耐藥率[n(%)]

    2.4 多重耐藥性結(jié)果 214株DEC中,70株(32.7%)全部敏感,有144 株(67.3%)耐藥。在耐藥株中,28 株(19.4%)單耐藥,17 株(11.8%)雙耐藥,3種到9 種抗生素多重耐藥株有99 株(68.8%)。有63 種耐藥譜,單耐藥譜AMP 有15 株(10.4%),然后依次是AMP-CXT-CFZ 耐藥譜11 株(7.6%)、TET-SXT 耐 藥 譜8 株(5.6%),TE,AMP-TETSXT,AMP-AMS-TET-SXT,AMP-TET-GEN-SXT這4 種耐藥譜各5 株菌(3.5%),其它耐藥譜的菌株數(shù)在1~4 株不等。AMP,TET,AMS 等抗生素在三種及三種以上的多重耐藥譜中出現(xiàn)的次數(shù)最多。

    3 討論

    本研究結(jié)果顯示5年來(lái)北京市海淀區(qū)DEC 的總檢出率同北京市懷柔區(qū)[2]2014~2018年檢出率(11.6%)相近,與北京市豐臺(tái)區(qū)[3]2017年(12.43%)、北京市順義區(qū)[4]2013~2015年(8.55%)檢出率相比略有差異。同其他省份地區(qū)相比高于淮安市[5]2014~2015年(7.10%)和沈陽(yáng)地區(qū)[6]2012~2014年(6.65%)的檢出率,低于濟(jì)南市[7]2014~2018年(28.55%)和貴陽(yáng)市[8]2010年(34.65%)的檢出率。海淀區(qū)檢出的DEC 以EAEC 和ETEC 為優(yōu)勢(shì)型別,其次是EPEC,與濟(jì)南市[7]檢出的各型別DEC 排序完全一致,優(yōu)勢(shì)型別方面與淮安市[5]、沈陽(yáng)地區(qū)[6]、貴陽(yáng)市[8]一致,與北京市其它區(qū)[2-4]和上海市寶山區(qū)[9]存在差異。說(shuō)明不同地區(qū)DEC 檢出率以及優(yōu)勢(shì)型別分布各不相同,出現(xiàn)這種情況的原因可能與各地區(qū)所處的環(huán)境條件、衛(wèi)生狀況、居民衛(wèi)生安全意識(shí)有關(guān),農(nóng)村和城鄉(xiāng)結(jié)合部地區(qū)的檢出率可能就會(huì)高于城市,同時(shí)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)能力和檢測(cè)手段也可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)差異。另外有資料[10]顯示DEC 可疑暴露食物種類陽(yáng)性檢出率最高的飲料冷凍飲品、肉類制品和水果類制品與DEC 常污染的食物相一致。

    藥敏結(jié)果顯示,檢出的DEC 除有2 株中介外,其余212 株均對(duì)亞胺培南(IMP)敏感,與北京市豐臺(tái)區(qū)[3]報(bào)道的全部敏感基本一致,說(shuō)明IMP 對(duì)治療本地區(qū)DEC 感染非常有效。頭孢他啶、氯霉素和頭孢西丁的藥敏結(jié)果提示在臨床治療時(shí)可以在這幾種抗生素做適當(dāng)?shù)倪x擇。在耐藥性方面,不同菌株的耐藥情況差別很大,種類繁多的耐藥譜為臨床醫(yī)生的治療選擇帶來(lái)壓力。在各種多重耐藥譜中AMP-CXT-CFZ 耐藥譜所占的比例最大。所有耐藥株中對(duì)氨芐西林耐藥性最高,其次是四環(huán)素和復(fù)方磺胺,對(duì)3 種及以上抗生素產(chǎn)生多重耐藥的菌株達(dá)68.8%,最嚴(yán)重的耐藥株對(duì)9 種抗生素產(chǎn)生多重耐藥。檢測(cè)數(shù)據(jù)提示海淀區(qū)DEC 耐藥情況不容樂(lè)觀,而且多重耐藥譜廣,給臨床合理選擇抗生素以及合理聯(lián)合用藥帶來(lái)了挑戰(zhàn)。

    本研究通過(guò)對(duì)DEC 毒力基因測(cè)定來(lái)確定各種DEC 型別的分布以及對(duì)菌株的耐藥性檢測(cè),為DEC 的流行、溯源和臨床治療參考提供了可靠的數(shù)據(jù),同時(shí)也提示要加強(qiáng)對(duì)抗生素的合理使用及管理,延緩耐藥株的產(chǎn)生和傳播。

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