高效液相色譜法測定不同炮制工藝的鮮竹瀝中糠醇的含量

周宇星，周志強(qiáng)，歐陽姝，付輝政，羅躍華，肖小武

1.江西省藥品檢查員中心，江西 南昌 330001；2.江西省藥品檢驗(yàn)檢測研究院，江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330029；3.江西生物技術(shù)職業(yè)學(xué)院，江西 南昌 330200

鮮竹瀝為禾本科植物粉綠竹Phyllostachys glauca McCluve、凈竹Phyllostachys nuda McClure及同屬的數(shù)種植物的鮮桿經(jīng)加熱后自然瀝出的液體［1］，具有清熱化痰之功效，用于肺熱咳嗽痰多，小兒痰熱驚風(fēng)等癥，稱之為“痰家之圣劑”［2-3］，也是用于治療痰熱咳嗽等常見呼吸病癥中藥大品種鮮竹瀝、復(fù)方鮮竹瀝液、祛痰靈口服液、竹瀝達(dá)痰丸的主要原料藥材。調(diào)研得知，目前鮮竹瀝的炮制工藝主要有直火法以及模擬古法的倒懸炭火逼制的干餾法兩種，李紅等［4］利用GC-MS 鑒定干餾法制備的鮮竹瀝中31 個(gè)化合物并測定了其相對百分含量，其中糠醇相對百分含量達(dá)到4.63%。而糠醇在其他中藥材中也有相應(yīng)的研究報(bào)道，如劉義寧和劉明生等［5-6］在太子參和銀柴胡揮發(fā)油中發(fā)現(xiàn)了糠醇，閆素君［7］在對西藏產(chǎn)雙孢菇的芳香物質(zhì)研究中也發(fā)現(xiàn)了含量較高的糠醇。目前未見對鮮竹瀝中糠醇分析檢測技術(shù)的相關(guān)報(bào)道［8-12］。本文參考相關(guān)研究［13-15］建立了高效液相色譜法對直火燒制和干餾兩種炮制工藝的鮮竹瀝中的糠醇進(jìn)行測定，可對鮮竹瀝的炮制方法和質(zhì)量控制提供借鑒和參考。

1 儀器與試劑

1260 Infinity 型氣相色譜儀（美國Agilent 公司），配置四元梯度泵，自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱和二極管陣列檢測器，Openlab 色譜工作站。BT25S 型十萬分之一電子天平（瑞士賽多利斯公司）。糠醇（DREhrenstorfer 批號：G1080821，純度99.61%），乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。鮮竹瀝樣品來自江西和湖南4 家生產(chǎn)企業(yè)，由不同工藝制備而得。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

取糠醇對照品適量，精密稱定，用水溶解成每1 mL 含0.025 mg 糠醇的對照品溶液，即得。

2.2 供試品溶液的制備

取鮮竹瀝，濾過，即得。

2.3 色譜條件

以C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）為色譜柱,以0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相A，以乙腈為流動(dòng)相B，按表1 進(jìn)行梯度洗脫。流速為1.0 mL/min，柱溫30 ℃，檢測器波長220 nm，進(jìn)樣10 μL。依照上述色譜條件測定，結(jié)果色譜圖中其他成分對糠醇無干擾，分離度良好，色譜圖見圖1。

圖1 溶液的色譜圖：A.對照品，B.供試品

表1 梯度洗脫程序

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取糠醇對照品23.32 mg 至25 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，作為對照品母液。依次取對照品母液用水稀釋成6 個(gè)所需的質(zhì)量濃度，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件測定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積A 為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并進(jìn)行回歸分析，糠醇的回歸方程為：Y=11 456X+33.426，r=0.999 9，糠醇在0.023 32～1.166 0 μg 之間線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)

取“2.4”項(xiàng)目下的對照品母液，用水稀釋50 倍，按“2.3”項(xiàng)條件下連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積。結(jié)果糠醇峰面積的RSD（n=6）分別為0.77%，表明儀器精密度好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取鮮竹瀝（批號：20210329-1），按“2.2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液6 份，在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測定，結(jié)果表明糠醇平均含量為18.031 2 μg/mL、RSD（n=6）分別為1.02%、表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取鮮竹瀝（批號：20210329-1），按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述“2.3”條件下分別于0、6、12、18、24 h 進(jìn)行分析測定峰面積，結(jié)果糠醇的峰面積的RSD（n=5）為1.13%，表明糠醇在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取鮮竹瀝（批號：20210329-1）6 份，每份10 mL，至25 mL 容量瓶中，分別加入精密稱定的糠醇對照品溶液（18.656 μg/ mL）10 mL,加水稀釋至刻度，按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試溶液，在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測定，計(jì)算回收率，結(jié)果表明樣品按本標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)，回收率良好，結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.9 樣品的測定

取10 批次的復(fù)方鮮竹瀝液樣品（每家企業(yè)3批次），按“2.2”項(xiàng)下方法制備，每批平行處理兩份，每份進(jìn)兩針。在上述“2.3”條件下進(jìn)行分析測定，以平均峰面積計(jì)算糠醇含有量，結(jié)果見表2。

表3 樣品的測定結(jié)果

3 討論

3.1 試驗(yàn)方法的選擇

試驗(yàn)首先考察了毛細(xì)管氣相色譜法來測定鮮竹瀝中糠醇的含量，但因鮮竹瀝為水樣直接進(jìn)樣對毛細(xì)管氣相色譜柱的損傷較大。試驗(yàn)嘗試了用有機(jī)萃取處理后再測定，但因糠醇水溶性較強(qiáng)，方法回收率較低且還存在色譜干擾，故本試驗(yàn)最終確定了高效液相色譜法來測定鮮竹瀝中的糠醇。

3.2 波長的確定

采用二極管陣列檢測器對糠醇190～400 nm 波段進(jìn)行光譜掃描，結(jié)果糠醇在220 nm 有最大吸收，且吸收峰平穩(wěn)，故本試驗(yàn)采用220 nm 為測定波長。

3.3 樣品結(jié)果分析

從樣品測定結(jié)果分析，干餾和直火燒制工藝都含有糠醇，但干餾工藝鮮竹瀝的含量明顯高于直火燒制工藝。根據(jù)課題組調(diào)研得知干餾工藝的制備時(shí)間遠(yuǎn)長于直火燒制工藝，這可能是干餾工藝下糠醇含量高于直火燒制工藝的原因。

3.4 糠醇來源分析

糖和氨基酸可發(fā)生美拉德反應(yīng)生成糠醇［5］，鮮竹瀝中含有含量較高的糖和氨基酸［11-12］，而糖和氨基酸在干餾和直火燒制兩種炮制工藝下均有可能發(fā)生此反應(yīng)生成糠醇，而根據(jù)目前研究報(bào)道竹子里面沒有糠醇［16］，故糠醇有可能不是鮮竹瀝中的天然存在成分。

本文建立了高效液相色譜法測定鮮竹瀝中糠醇含量的方法，方法準(zhǔn)確穩(wěn)定，重復(fù)性好，可為鮮竹瀝的炮制方法和質(zhì)量控制提供參考。