西葫蘆病毒病的研究進(jìn)展

田佳星 張國(guó)裕 邱艷紅 張 帆 賈長(zhǎng)才 李海真

〔北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華北地區(qū)園藝作物生物學(xué)與種質(zhì)創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部都市農(nóng)業(yè)（北方）重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100097〕

西葫蘆（Cucurbita pepoL.）又名美洲南瓜，屬于葫蘆科（Cucurbitaceae）的南瓜屬（Cucurbitaspp.），是世界范圍內(nèi)廣泛種植的瓜類蔬菜。由于具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和獨(dú)特的風(fēng)味（羅伯祥 等，2002），深受廣大消費(fèi)者的喜愛，是增加農(nóng)民收入的重要經(jīng)濟(jì)作物，在我國(guó)的年均栽培面積及產(chǎn)量均居世界前列。然而，病毒病的普遍發(fā)生造成嚴(yán)重的產(chǎn)量和經(jīng)濟(jì)損失，已成為制約西葫蘆生產(chǎn)的重要因素。為此，本文就西葫蘆常見病毒病及其主要傳播途徑、發(fā)病癥狀、防治方法以及抗病育種等方面進(jìn)行綜述，以期為西葫蘆病毒病防治提供相關(guān)基礎(chǔ)知識(shí)和依據(jù)。

1 侵染西葫蘆的病毒病

西葫蘆病毒病又稱花葉病，是危害西葫蘆的重要病害。1980 年，Lovisolo 首先總結(jié)了可侵染葫蘆科作物的病毒種類，共25 個(gè)確定種，6 個(gè)待定種以及1 個(gè)類病毒（Lovisolo，1980）。2019 年，彭斌根據(jù)最新的國(guó)際病毒分類委員會(huì)（International Committee on Taxonomy of Viruses，ICTV）報(bào)告以及前人文獻(xiàn)，并借助NCBI Virus 數(shù)據(jù)庫（Hatcher et al.，2016），總結(jié)統(tǒng)計(jì)侵染葫蘆科作物的病毒種類為125 種，包括99 個(gè)ICTV 收錄正式種和26 個(gè)待定種（彭斌，2019）。目前，對(duì)我國(guó)西葫蘆生產(chǎn)造成嚴(yán)重危害的主要病毒有：小西葫蘆黃化花葉病毒（zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）、黃瓜花葉病毒（cucumber mosaic virus，CMV）、西瓜花葉病毒（watermelon mosaic virus，WMV）、番木瓜環(huán)斑病毒（papaya ring sopt virus，PRSV）和黃瓜綠斑駁花葉病毒（cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）；此外，瓜類褪綠黃化病毒（cucurbit chlorotic yellows virus，CCYV）和中國(guó)南瓜曲葉病毒（squash leaf curl china virus，SLCCNV）是近年來報(bào)道的可感染西葫蘆的新植物病毒。

1.1 小西葫蘆黃化花葉病毒

小西葫蘆黃化花葉病毒（ZYMV）是馬鈴薯Y病毒科（Potyviridae）馬鈴薯Y 病毒屬（Potyvirus）的成員，可侵染葫蘆科、莧科、豆科等11 個(gè)屬的植物（唐超 等，2016）。自然條件下，ZYMV 的主要傳播方式包括介體傳播、機(jī)械傳播以及種子傳播。ZYMV 在西葫蘆上表現(xiàn)為系統(tǒng)侵染，如整株花葉、黃化、葉片皺縮、果實(shí)畸形、品質(zhì)下降，最終嚴(yán)重影響產(chǎn)量。ZYMV 最早在意大利和法國(guó)的小西葫蘆上發(fā)現(xiàn)（Lisa et al.，1981），然后快速暴發(fā)成為制約西葫蘆生產(chǎn)最重要的病原之一，至今已經(jīng)遍布全球50 多個(gè)國(guó)家與地區(qū)。目前，我國(guó)的華北、華南、西南和華東地區(qū)都發(fā)現(xiàn)了ZYMV 的分布。

1.2 黃瓜花葉病毒

黃瓜花葉病毒（CMV）屬于雀麥花葉病毒科（Bromoviridae）黃瓜花葉病毒屬（Cucumovirus），是單鏈正義RNA 病毒。CMV 主要利用蚜蟲作為介體進(jìn)行傳播，也可通過機(jī)械、種子等方式傳播；感病后植株一般會(huì)表現(xiàn)出系統(tǒng)性侵染癥狀，主要表現(xiàn)為葉片出現(xiàn)斑駁花葉，嚴(yán)重時(shí)葉片出現(xiàn)皺縮、蕨葉、枯死等癥狀。該病毒的首次報(bào)道是在1916年，由Doolittle 和Jagger 在黃瓜上發(fā)現(xiàn)（Doolittle，1916；Jagger，1916），此后傳播至世界各國(guó)，包括我國(guó)的大部分地區(qū)。CMV 可侵染包括西葫蘆在內(nèi)的1 000 余種植物（Edwardson &Christie，1991），是寄主最多、分布最廣、最具經(jīng)濟(jì)危害的植物病毒之一。

1.3 西瓜花葉病毒

西瓜花葉病毒（WMV）屬于馬鈴薯Y 病毒科馬鈴薯Y 病毒屬。1965 年，根據(jù)寄主的生物學(xué)差異WMV 被分為西瓜花葉病毒1（WMV-1）和西瓜花葉病毒2（WMV-2）（Webb &Scott，1965），后經(jīng)研究表明WMV-1 是番木瓜環(huán)斑病毒（PRSV）的株系。WMV 主要通過蚜蟲以非持久方式進(jìn)行傳播，可通過汁液機(jī)械傳播（李鳳梅 等，2002）。WMV 侵染西葫蘆后，出現(xiàn)葉片斑駁、皺縮，植株矮化，嚴(yán)重時(shí)葉片只剩葉脈，呈雞爪狀。目前，WMV 廣泛分布于我國(guó)華北、東北和新疆等地，可侵染包括西葫蘆在內(nèi)的170 多種植物。

1.4 番木瓜環(huán)斑病毒

番木瓜環(huán)斑病毒（PRSV）是屬于馬鈴薯Y 病毒科馬鈴薯Y 病毒屬的正鏈單分體RNA 病毒。美國(guó)在20 世紀(jì)40 年代對(duì)PRSV 進(jìn)行了首次報(bào)道，目前PRSV 在亞洲、北美、非洲普遍發(fā)生，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。根據(jù)寄主的不同，將PRSV 分為番木瓜株系（PRSV-P）和西瓜株系（PRSV-W）兩個(gè)株系（Yeh &Gonsalves，1984）。PRSV-P 主要侵染番木瓜，PRSV-W 常單獨(dú)或與其他病毒復(fù)合侵染西葫蘆等葫蘆科作物。PRSV-W 由人工、機(jī)械摩擦或蚜蟲等方式進(jìn)行非持久性傳播，且葫蘆科作物的帶毒種子也可傳毒。感染PRSV-W 后，西葫蘆葉片表現(xiàn)出花葉、泡斑、蕨葉的癥狀，植株矮化，形成畸形果實(shí)，嚴(yán)重影響西葫蘆產(chǎn)量與果實(shí)的商品性（王凱玥 等，2021）。

1.5 黃瓜綠斑駁花葉病毒

黃瓜綠斑駁花葉病毒（CGMMV）屬于桿狀病毒科（Virgaviridae）煙草花葉病毒屬（Tobamovirus），常溫下病毒侵染力可保持?jǐn)?shù)月。1935 年首次在英國(guó)黃瓜上發(fā)現(xiàn)了CGMMV（Ainsworth，1935），而國(guó)內(nèi)最早在從日本引進(jìn)的種苗中檢測(cè)到。CGMMV通過種子、土壤、水、介體和機(jī)械接觸等多種方式進(jìn)行傳播，還能利用菟絲子作為介體進(jìn)行傳播，黃瓜葉甲也是可能的傳播介體（張永江，2006；李俊香和古勤生，2015）。在自然環(huán)境中，CGMMV的寄主范圍相對(duì)較為狹窄，主要侵染西葫蘆、西瓜、黃瓜等葫蘆科作物，一般會(huì)使葫蘆科作物出現(xiàn)花葉癥狀，導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢、矮化、結(jié)果延遲等。目前，該病毒在全世界各地廣泛發(fā)現(xiàn)，尤其是中國(guó)、韓國(guó)和日本等嫁接葫蘆科作物地區(qū)，病害擴(kuò)散迅速。

1.6 瓜類褪綠黃化病毒

瓜類褪綠黃化病毒（CCYV）屬于長(zhǎng)線病毒科（Closteroviridae）毛形病毒屬（Crinivirus），是近年來報(bào)道的一種新植物病毒，其各項(xiàng)研究工作均處于起步階段。該病害最早于2004 年在日本發(fā)現(xiàn)，2010 年完成該病毒基因組的全序列測(cè)定（Okuda et al.，2010）。該病毒2007 年最先在我國(guó)寧波、上海等地發(fā)現(xiàn)，并于2011 年首次進(jìn)行了報(bào)道（古勤生 等，2011；Gu et al.，2011），目前該病害已分布于我國(guó)多個(gè)省市（Huang et al.，2010；劉珊珊 等，2013；唐鑫 等，2017；楊世安 等，2017），給我國(guó)瓜類作物生產(chǎn)造成了嚴(yán)重危害。CCYV 由B 型和Q型煙粉虱以半持久性方式特異性傳播（唐雪飛 等，2017），Q 型傳毒效率高于B 型（Li et al.，2016），不能通過摩擦或其他方式進(jìn)行人工接種。該病毒侵染瓜類后引起的典型癥狀是葉片褪綠黃化，但葉脈保持綠色。CCYV 在自然界主要危害西瓜、甜瓜、黃瓜3 種葫蘆科作物，也有文獻(xiàn)報(bào)道其可以感染苦瓜、西葫蘆、南瓜（古勤生 等，2011）。近幾年，北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心多次從山東西葫蘆主產(chǎn)區(qū)采集新鮮病葉樣品，利用RT-PCR 等方法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)樣品中存在CCYV，且有CCYV 和其他病毒（例如CMV）復(fù)合侵染西葫蘆的現(xiàn)象。目前對(duì)于CCYV 的防治措施主要是控制傳毒介體煙粉虱，并且加快培育抗病毒品種。

1.7 中國(guó)南瓜曲葉病毒

中國(guó)南瓜曲葉病毒（SLCCNV）是一類具有孿生顆粒形態(tài)的植物單鏈DNA 病毒，屬雙生病毒科（Geminiviridae）菜豆金色花葉病毒屬（Begomovirus），目前國(guó)內(nèi)外對(duì)SLCCNV 的 研究甚少。在國(guó)內(nèi)，洪益國(guó)等于1994 年首次報(bào)道了SLCCNV 侵染南瓜植株（洪益國(guó) 等，1994）。SLCCNV 自然條件下主要侵染葫蘆科作物，由煙粉虱以持久方式傳播（Polston et al.，2014），感染SLCCNV 可導(dǎo)致葉部皺縮、植株矮化、產(chǎn)量降低以及品質(zhì)下降（Wu et al.，2020）。目前SLCCNV 分布在泰國(guó)、越南、中國(guó)、印度、巴基斯坦、馬來西亞及菲律賓等國(guó)家地區(qū)（Ito et al.，2008；車海彥 等，2017；吳會(huì)杰，2019），在印度和巴基斯坦均有SLCCNV 侵染西葫蘆并導(dǎo)致嚴(yán)重的生產(chǎn)與經(jīng)濟(jì)損失的報(bào)道（Tahir et al.，2010；Saritha et al.，2011）。2020 年北京市農(nóng)林科學(xué)院蔬菜研究中心在山東淄博和壽光的西葫蘆葉片樣品中檢測(cè)到SLCCNV。

2 主要傳播途徑

西葫蘆病毒病傳播迅速，傳播途徑多樣，主要包括種子傳播、介體傳播、機(jī)械傳播、土壤傳播等。種子傳播是指種子自身攜帶病毒。如果用于播種的種子沒有經(jīng)過消毒處理，那種子自身可能會(huì)攜帶病毒，進(jìn)而導(dǎo)致病毒病的暴發(fā)。攜帶病毒的種子還可作為毒源，通過蚜蟲、機(jī)械摩擦、貿(mào)易和長(zhǎng)距離運(yùn)輸?shù)确绞絺鞑ゲ《?，從而造成病毒的大面積遠(yuǎn)距離傳播。介體傳播是指利用蚜蟲、煙粉虱等昆蟲作為傳播媒介進(jìn)行傳播，通過它們的啃食使植物產(chǎn)生創(chuàng)口，病毒借助創(chuàng)口侵染植物。根據(jù)病毒傳播后保持時(shí)間的長(zhǎng)短可分為3 種類型：非持久性傳播、半持久性傳播和持久性傳播。機(jī)械傳播是指通過農(nóng)事操作、機(jī)械耕作等方式，將已經(jīng)染病植株上的病毒傳播到其他植株。西葫蘆的栽培和田間管理過程中需要進(jìn)行人工操作，例如吊蔓、整枝，病毒就會(huì)通過這些操作，隨著人的走動(dòng)傳給其他植株，人為傳播是西葫蘆病毒傳播的重要途經(jīng)。土壤傳播是指土壤中含有病毒進(jìn)而傳染到植物上。如果土壤上年度種植過感病西葫蘆，而沒有經(jīng)過消毒處理，那么土壤中病株殘?bào)w攜帶的病毒就會(huì)繼續(xù)侵染新的西葫蘆植株（鄭志強(qiáng)，2015）。

3 發(fā)病癥狀

西葫蘆病毒病是系統(tǒng)侵染性病害，感病植株常表現(xiàn)為多個(gè)部位發(fā)病，對(duì)西葫蘆植株的生長(zhǎng)、品質(zhì)和產(chǎn)量都造成嚴(yán)重影響。西葫蘆病毒病的典型癥狀包括：葉片出現(xiàn)花葉、褪綠黃化、皺縮卷曲或者畸形斑駁，植株矮小并且生長(zhǎng)緩慢，果實(shí)畸形甚至掉落。一般情況下，西葫蘆病毒病發(fā)病癥狀與其他真菌、細(xì)菌病害的癥狀區(qū)別比較明顯。西葫蘆病毒病的侵害時(shí)期持續(xù)較長(zhǎng)，幼苗期和成株期均可發(fā)病。發(fā)病嚴(yán)重程度與寄主感染時(shí)期有一定關(guān)系。苗期感染病毒病危害比較大，不僅對(duì)結(jié)瓜有影響，而且還會(huì)大大降低被侵染植株收獲種子的發(fā)芽率（秦碧霞等，2004）。此外，環(huán)境因素對(duì)西葫蘆病毒病的發(fā)病也有一定影響。例如，溫度對(duì)西葫蘆感染ZYMV的癥狀有一定影響：15～25 ℃時(shí)，以花葉或葉片輕微畸形為主；較高溫度25～35 ℃時(shí)，會(huì)出現(xiàn)較嚴(yán)重的癥狀（Desbiez &Lecoq，1997）。在高溫干旱、肥水不足、種植密度大以及管理粗放的條件下，西葫蘆病毒病發(fā)病癥狀會(huì)更加嚴(yán)重。除單獨(dú)感染一種病毒外，還經(jīng)常出現(xiàn)多種病毒復(fù)合侵染的現(xiàn)象，復(fù)合侵染可導(dǎo)致寄主植株癥狀的加重甚至死亡（劉勇 等，2019）。

4 防治方法

目前，西葫蘆病毒病的防治主要包括種子消毒、加強(qiáng)田間管理、控制介體昆蟲、化學(xué)防治、交叉保護(hù)以及選育抗病品種等。

4.1 種子消毒

種子消毒方法主要分為物理法和化學(xué)法。物理法主要包括干熱處理、激光處理、微波處理、水選法、機(jī)械篩除法等；化學(xué)法主要利用化學(xué)藥劑、種子包衣、拌種等方法殺死或鈍化病毒（鄭棚峻 等，2017）。此外，加強(qiáng)對(duì)帶毒種子檢測(cè)，也是有效防止西葫蘆病毒通過種子傳播的重要手段之一。

4.2 加強(qiáng)田間管理

選擇合適的時(shí)間進(jìn)行播種，從而使苗期避開有翅蚜遷飛高峰期，減少蚜蟲對(duì)病毒病的傳播。生長(zhǎng)期加強(qiáng)肥水管理，培育壯苗，可提高西葫蘆植株抗病能力并緩解病株癥狀。在人工操作時(shí)應(yīng)盡量避免對(duì)植株造成傷口，還要避免機(jī)械和操作人員通過沾染毒源傳播病毒。收獲后要及時(shí)清理瓜皮、瓜瓤等廢棄物，并對(duì)土壤進(jìn)行消毒，減少病毒殘留。此外，通過實(shí)行輪作倒茬，可避免病毒病的交叉感染，非病毒寄主作物是田間輪作的首選。

4.3 控制介體昆蟲

蚜蟲是西葫蘆病毒病的主要傳播介體，因此預(yù)防蚜蟲是防治西葫蘆病毒病的關(guān)鍵措施（古勤生，2002）。目前防治蚜蟲主要通過使用藥劑、間作套種、物理覆蓋、天敵昆蟲以及RNA 干擾技術(shù)（RNA interfernce，RNAi）等方法（唐超 等，2016）。近年來，RNAi 技術(shù)為解決蚜蟲傳毒提供了新思路，Whyard 等（2009）通過對(duì)蚜蟲注射和飼喂特異性的雙鏈RNA 實(shí)現(xiàn)了靶基因的高效沉默，為RNAi技術(shù)控制蚜蟲傳毒提供了可能。

近幾年報(bào)道的西葫蘆新病毒病，例如CCYV和SLCCNV，由煙粉虱進(jìn)行傳播，因此可通過控制煙粉虱來防治西葫蘆病毒病。目前煙粉虱的防治方法主要有農(nóng)業(yè)防治、生物防治、物理防治和化學(xué)防治（楊益芬 等，2020）。生物防治主要利用煙粉虱的自然天敵，例如麗蚜小蜂和漿角蚜小蜂?；瘜W(xué)防治是目前防治煙粉虱的主要方法，盡量選用高效、低毒、低殘留，對(duì)天敵相對(duì)安全的藥劑，同時(shí)結(jié)合精準(zhǔn)施藥技術(shù)（關(guān)雪和胡瓊波，2020）。

4.4 化學(xué)防治

化學(xué)防治具有見效快、效率高等特點(diǎn)，目前比較受廣大農(nóng)民歡迎?；瘜W(xué)藥劑主要分為3 類：殺滅蚜蟲、煙粉虱等病毒病的傳播媒介，殺滅西葫蘆病毒病的病原，增強(qiáng)植株抗病能力（鄭志強(qiáng)，2015）。目前，已有研究發(fā)現(xiàn)外施植物來源的化合物如水楊酸、葡聚糖等能夠在一定程度上減輕ZYMV的病癥（Radwan et al.，2007；Raie et al.，2018）。目前對(duì)于化學(xué)防治西葫蘆病毒病的機(jī)制還有待進(jìn)一步探索，今后應(yīng)加強(qiáng)化學(xué)防治病毒病的分子機(jī)制研究，有助于化學(xué)防治的廣泛應(yīng)用。

4.5 交叉保護(hù)

交叉保護(hù)是指通過預(yù)先接種病毒的弱毒株系來防治同一病毒強(qiáng)毒株系的侵染，是防治病毒病最有效的手段之一。目前利用交叉保護(hù)防治ZYMV 的技術(shù)相對(duì)成熟（Yarden et al.，2000），許多國(guó)家和地區(qū)均已廣泛使用商品化的弱毒株系防治ZYMV。土耳其、美國(guó)和以色列已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了ZYMV 弱毒株系的商品化，防治ZYMV 取得了良好的效果。ZYMV 的弱毒株系除天然獲得外，還可通過人工誘變、ZYMV HC-Pro 的定點(diǎn)突變等方式獲得（Kosaka et al.，2006；Lin et al.，2007）。由于會(huì)受到溫度、寄主、保護(hù)間隔期、株系?；纫蛩氐挠绊?，交叉保護(hù)的應(yīng)用受到一定限制。

4.6 選育抗病品種

選育抗病品種是防治西葫蘆病毒病最經(jīng)濟(jì)有效的方法，有廣闊的應(yīng)用前景。目前已經(jīng)選育出了一些抗病毒病的西葫蘆品種，并進(jìn)行了推廣應(yīng)用。Gallerani 和Talame（1997）培育了2 個(gè)西葫蘆雜交品種Sofia 和Linia，這2 個(gè)品種可同時(shí)抗3 種病毒?。篫YMV、CMV 和WMV-2。李海真等（2014）將常規(guī)育種方法與分子標(biāo)記輔助選擇育種技術(shù)相結(jié)合，選育出抗ZYMV 和白粉病的京葫CRV4。由于不同地區(qū)的病毒種類和株系可能有所不同，在推廣應(yīng)用前應(yīng)先對(duì)抗病品種進(jìn)行試種。

5 抗病育種

5.1 抗病種質(zhì)資源

篩選和創(chuàng)制抗病種質(zhì)資源，可為抗病基因的獲得以及抗病品種的選育奠定基礎(chǔ)。西葫蘆抗病毒病育種可利用一些具有抗性的野生南瓜種作為抗源材料，例如中國(guó)南瓜Nigerian Local 同時(shí)抗ZYMV、WMV、PRSV-W 和CMV（Munger &Provvidenti，1987），中國(guó)南瓜Menina、Bolina（Paris et al.，1988）和Soler（Wessel-Beaver，2005）抗ZYMV。Provvidenti 等（1978）通過對(duì)大量育種材料進(jìn)行鑒定，篩選出高抗PRSV-W 的2 個(gè)野生種，為培育南瓜屬抗病品種奠定了材料基礎(chǔ)。此外，de Oliveira 等（2003）利用具有PRSV-W 抗性的中國(guó)南瓜種作為抗源，通過種間雜交將抗病基因轉(zhuǎn)到西葫蘆中。

5.2 抗病基因定位和分子標(biāo)記開發(fā)

對(duì)西葫蘆抗病基因進(jìn)行定位并開發(fā)與其緊密連鎖的分子標(biāo)記，不僅為抗病分子機(jī)理研究奠定了理論基礎(chǔ)，還能提高西葫蘆抗病育種的效率和精準(zhǔn)度。之前已有一些研究對(duì)PRSV 抗病基因的遺傳規(guī)律進(jìn)行了探索（Nogueira et al.，2011；Menezes et al.，2015；張棟，2016；王凱玥 等，2021）。張棟（2016）利用SSR 引物對(duì)西葫蘆PRSV-W 抗性位點(diǎn)進(jìn)行了初步定位。王凱玥（2020）進(jìn)一步將抗病基因CpPRSV-W定位在753 kb 的區(qū)間內(nèi)，包含30 個(gè)候選基因；并開發(fā)了與該抗病基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，應(yīng)用于西葫蘆分子標(biāo)記輔助選擇育種。此外，西葫蘆ZYMV 的抗病基因定位也取得了一些進(jìn)展。Zraidi 等（2007）利用RAPD、AFLP、SSR 和形態(tài)標(biāo)記技術(shù)對(duì)ZYMV 抗性基因進(jìn)行定位，在連鎖群LGpz1 和LGpz2 上各發(fā)現(xiàn)了1 個(gè)與西葫蘆ZYMV 抗性連鎖的標(biāo)記。蘇敏（2011）將西葫蘆抗ZYMV 基因定位在2 個(gè)分子標(biāo)記CmTm227 與WMG28 之間，遺傳距離分別為13.8 cM 和3.9 cM。Pachner 等（2015）開發(fā)了3 個(gè)與西葫蘆ZYMV 抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記，包括1 個(gè)SCAR 標(biāo)記和2 個(gè)SSR 標(biāo)記。2017年，Capuozzo 等又開發(fā)了與西葫蘆ZYMV 抗性緊密連鎖的3 個(gè)SNP 標(biāo)記并對(duì)抗性基因進(jìn)行了預(yù)測(cè)（Capuozzo et al.，2017）。張沙沙（2020）將西葫蘆ZYMV 抗病基因定位在包含40 個(gè)候選基因的673 kb 的區(qū)間內(nèi)，并開發(fā)分子標(biāo)記用于輔助選擇育種。雖然目前已經(jīng)獲得一些與西葫蘆病毒病抗性緊密連鎖的分子標(biāo)記，但分子標(biāo)記輔助選擇育種開展得并不多。今后應(yīng)加強(qiáng)分子標(biāo)記的利用，通過聚合抗病育種獲得同時(shí)攜帶多個(gè)病毒病抗性基因的目標(biāo)植株，有效加快種質(zhì)創(chuàng)新速度。

5.3 基因工程育種

至今，已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道通過遺傳轉(zhuǎn)化成功獲得轉(zhuǎn)基因抗病毒西葫蘆。1995 年美國(guó)出現(xiàn)第1 個(gè)轉(zhuǎn)基因西葫蘆品種，這個(gè)商業(yè)品種攜帶ZYMV 和WMV 的外殼蛋白基因，表現(xiàn)出對(duì)這2 個(gè)病毒的單一和混合侵染的抗性（Fuchs &Gonsalves，1995；Tricoli et al.，1995）。隨后，另一個(gè)轉(zhuǎn)基因西葫蘆CZW-3 被報(bào)道，它包含ZYMV、WMV 和CMV的外殼蛋白基因，表現(xiàn)出對(duì)這3 種病毒單一和混合侵染的抗性（Tricoli et al.，1995；Fuchs et al.，1997，1998）。Pang 等（2000）將南瓜花葉病毒（squash mosaic virus，SqMV）的外殼蛋白蛋白基因轉(zhuǎn)入西葫蘆，獲得抗SqMV 的西葫蘆品種。此外，前人對(duì)轉(zhuǎn)基因抗病西葫蘆的安全性也進(jìn)行了研究。Fuchs 等（2004a，2004b）報(bào)道了轉(zhuǎn)基因抗病西葫蘆與野生型雜交后的下一代仍具有抗病性和可育性，表明外源基因可通過雜交方式從轉(zhuǎn)基因植株流入野生種中。Klas 等（2006）研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因西葫蘆可通過防止植物到植物的二次傳播來改變ZYMV 和WMV 的傳播動(dòng)態(tài)。至今，中國(guó)還沒有轉(zhuǎn)基因西葫蘆品種在生產(chǎn)中應(yīng)用。

6 展望

西葫蘆病毒病相關(guān)研究已取得一些成果和進(jìn)展，但西葫蘆與病毒互作的分子調(diào)控機(jī)制還有待深入研究。目前，西葫蘆全基因組測(cè)序已完成（Montero-Pau et al.，2018），分子生物學(xué)、生物信息學(xué)技術(shù)也快速發(fā)展，這些都有助于推進(jìn)西葫蘆抗病基因的克隆和抗病機(jī)制的解析。在抗病育種方面，西葫蘆抗病毒病的精準(zhǔn)鑒定與評(píng)價(jià)體系仍需進(jìn)一步建立和完善，同時(shí)應(yīng)繼續(xù)開發(fā)與抗病基因連鎖的分子標(biāo)記，提高分子標(biāo)記的篩選效率。通過利用分子標(biāo)記輔助育種、單倍體培養(yǎng)、基因工程等手段，將生物技術(shù)和常規(guī)育種相結(jié)合，進(jìn)一步提高西葫蘆抗病育種效率并實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)設(shè)計(jì)育種。