納米材料在漁用疫苗中的研究進展

陳信錦，王忠良，黃 瑜，樊博琳，簡紀常, ，王 蓓,

（1.廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院/廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病原生物學(xué)及流行病學(xué)重點實驗室/廣東省水產(chǎn)經(jīng)濟動物病害控制重點實驗室，廣東 湛江 524088；2.中國科學(xué)院實驗海洋生物學(xué)重點實驗室/中國科學(xué)院海洋研究所/海洋生物學(xué)與生物技術(shù)功能實驗室/青島海洋科學(xué)與技術(shù)試點國家實驗室，山東 青島 266071）

我國是漁業(yè)大國，養(yǎng)殖面積和產(chǎn)量均居世界首位。在我國的水產(chǎn)養(yǎng)殖環(huán)境中，傳染病已經(jīng)成為一個不可避免的問題，并造成了嚴重的經(jīng)濟損失。因此，迫切需要解決水產(chǎn)病害問題，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖生產(chǎn)率。雖然魚病的治療在過去幾年取得了重大進展，已經(jīng)從大量使用抗生素逐漸轉(zhuǎn)向疫苗開發(fā)，這些疫苗包括滅活疫苗、肽亞單位疫苗、重組蛋白疫苗、DNA疫苗和減毒活疫苗，但挑戰(zhàn)仍然存在。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中通常使用佐劑來提高疫苗效力，雖然佐劑在增強針對病原體的免疫反應(yīng)方面非常有效，但它們存在不同的副作用。大多數(shù)商業(yè)漁用疫苗是通過腹腔注射刺激免疫系統(tǒng)對病原體進行防御，而注射疫苗也是目前為止最有效和持久的免疫途徑。然而腹腔注射方式有可能會導(dǎo)致不良反應(yīng)，如肉芽腫［1］、注射部位損傷［2］等。此外，麻醉和搬運也可能會導(dǎo)致魚類產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)甚至死亡，而且注射魚類的成本也可能使養(yǎng)殖者望而卻步。雖然開發(fā)新穎的口服和浸泡接種疫苗方法已取得了不同程度的成功，但其攝取效率難以測量，還需進一步探討。在這種情況下，研究者將納米技術(shù)引入疫苗開發(fā)領(lǐng)域，使用納米遞送系統(tǒng)作為一種替代策略，不僅可以解決上述問題，還可以幫助改善傳統(tǒng)疫苗的問題，提高疫苗效力［3］。而且納米疫苗能夠通過增強靶向和觸發(fā)理想的免疫反應(yīng)來誘導(dǎo)有效的免疫［4］。目前已經(jīng)嘗試利用多種類型的納米材料來開發(fā)有效的候選疫苗，不同納米顆粒具有許多不同的理化性質(zhì)，顆粒的多樣性導(dǎo)致了納米疫苗的不同，每種材料都有自身的優(yōu)點和缺點，因此每種納米顆粒開發(fā)的疫苗都有待研究探討。本文總結(jié)了作為疫苗遞送系統(tǒng)的不同納米材料，包括聚乳酸-羥基乙酸納米顆粒、殼聚糖納米顆粒、脂質(zhì)體和碳納米管等，這些遞送系統(tǒng)已被描述為魚疫苗或免疫刺激的遞送工具。

1 “聚乳酸-羥基乙酸”遞送載體

基于聚合物納米粒子的藥物遞送系統(tǒng)是最活躍的研究領(lǐng)域之一，已被廣泛研究了60年，目前普遍使用的有聚乳酸-羥基乙酸（polylactic acidglycolic acid，PLGA）、聚乙烯亞胺，這些均已被用于制備納米疫苗。從商業(yè)角度來看，聚合物納米顆粒成本低，易于合成，使得該類化合物越來越受青睞。更重要的是聚合物納米粒子可以提供靶向藥物遞送，使藥物在體內(nèi)緩慢釋放而不引起單核吞噬細胞系統(tǒng)的激活，具有非免疫原性、無毒、水溶性以及良好的生物降解性和生物相容性［5］。Xu等［6］證實了裝載有卵清蛋白抗原表位的聚酰胺納米復(fù)合物可有效用于疫苗遞送，并能夠避開內(nèi)溶酶體系統(tǒng)而誘導(dǎo)強大的抗原特異性細胞免疫。此外，疫苗遞送效果受聚合物納米顆粒大小影響，納米粒子小于300 nm的免疫效果更好，可使機體產(chǎn)生更高的抗體效價，而且較小顆粒對于抗原的吸附量更高。但想要延遲釋放抗原，較大的聚合物納米顆粒為更優(yōu)選擇［7］。

1.1 PLGA包裹細菌抗原的研究

PLGA是用于藥物輸送最常用的可生物降解聚合物之一，通常由乳酸和羥基乙酸隨機聚合而成［8］。PLGA納米顆粒疫苗是典型的封裝疫苗，是疫苗遞送系統(tǒng)的首選，除了其出色的安全性和商業(yè)化，更重要的是該疫苗可以減輕針對自身抗原的異常免疫反應(yīng)，同時保留針對外來抗原和病原體的免疫反應(yīng)［9］。目前，在魚類中普遍使用的PLGA納米顆粒制備方法是復(fù)乳化溶劑揮發(fā)法，其基礎(chǔ)是將適量的PLGA溶解在有機溶劑中，如二氯甲烷、氯仿或乙酸乙酯等，然后經(jīng)超聲、攪拌和揮發(fā)處理制成納米顆粒復(fù)合物。在大西洋鮭魚研究中，PLGA納米顆?？烧T導(dǎo)輕微的炎癥反應(yīng)，而包裹模型抗原和β-葡聚糖后大大增強了對免疫的促炎反應(yīng)，具有疫苗佐劑的潛力［10］。在隨后的研究中，同一小組評估了聚乳酸-納米顆粒（PLA-NPs）和聚乳酸-羥基乙酸納米顆粒（PLGA-NPs）包裹γ-球蛋白和β-葡聚糖在鮭魚中的免疫效果，證實PLA和PLGA能夠誘導(dǎo)更高的特異性抗體應(yīng)答［11］。Rauta等［12］比較了同樣具有良好機械強度的PLA-NPs與PLGANPs對嗜水氣單胞菌外膜蛋白抗原的包埋效果，PLGA-NPs的包封率和載藥量均比PLA-NPs高，而且體外釋放速度也快于PLA-NPs，這可能由于PLGA的親水性更強。

目前為止，滅活疫苗占水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)總疫苗使用量的很大比例，為了提高疫苗效力，廣泛使用了佐劑。用PLGA包裹嗜水氣單胞菌福爾馬林滅活細胞疫苗（FKC疫苗）接種鯉魚后，PLGA可以作為一種佐劑誘導(dǎo)細胞介導(dǎo)的免疫，增強IL-1b和TNF-a的mRNA相對表達［13］。而另一項研究中，牙鲆接種PLGA包裹的FKC疫苗后也得到相同結(jié)果，并且兩次生物測定中牙鲆存活率為100%［14］。此外，將質(zhì)粒DNA包裹在PLGA-NPs中對大西洋鮭魚肌肉注射后，發(fā)現(xiàn)PLGA-NPs包裹后的DNA疫苗可持續(xù)釋放，能有效上調(diào)抗病毒反應(yīng)，增強DNA疫苗的免疫原性［15］。

1.2 PLGA作為口服疫苗載體的研究

在漁用疫苗中，口服和浸泡可能是最理想的接種方式，將編碼淋巴囊腫病病毒（Lymphocystis disease virus，LCDV）主要衣殼蛋白（Major capsid protein，MCP）的質(zhì)粒包裹在PLGA-NPs中，并在牙鲆中進行檢測，攻毒后PLGA-NPs包裹的DNA疫苗組LCDV感染率為16.7%，裸DNA疫苗組感染率為100%，并在接種后10～90 d，鰓、腸、脾、腎中均檢測到MCP基因的表達［16］。間接證實了PLGA納米顆粒可能有助于抗原穿透微血管和腸道上皮，并有效地被吸收。盡管這項研究證實PLGA納米顆?？勺鳛镈NA疫苗的有效口服載體，但其包封率和載藥量較低的問題仍需要解決［16-19］，而且口服免疫的抗原劑量和持續(xù)時間還需要優(yōu)化［18-19］，以期在接種的魚類中誘導(dǎo)最高的保護作用。在另一項研究中，PLGA-NPs與殼聚糖（Chit）共同包裹遲緩愛德華氏菌DNA疫苗，與PLGA-NPs和Chit-NPs相比，PLGA-Chit-NPs對DNA疫苗的負載效率更高，而對露斯塔野鯪也有更好的保護，同時增強了IgM、IgD和IgZ的mRNA表達并驅(qū)動特異性粘膜免疫，這可能與殼聚糖帶正電荷有關(guān)［20］。因此，PLGA作為口服疫苗遞送系統(tǒng)還需要進一步研究。

2 “殼聚糖”遞送載體

殼聚糖是一種天然高分子聚合物，由甲殼素脫除部分乙?；纬傻漠a(chǎn)物，因其具有良好的生物相容性和生物降解性而具有廣泛的生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用前景。此外，殼聚糖還具有良好的生物粘附性和陽離子聚電解質(zhì)性質(zhì)，可提供強正電與帶負電的細胞膜發(fā)生離子相互作用，使其具有更高的被抗原呈遞細胞（Antigen-presenting cells,APC）吸收的能力。很多研究已經(jīng)證明了殼聚糖在魚類上的有益應(yīng)用，在這些研究中，殼聚糖納米顆粒通過飼料口服給藥，可以促進生長、提高水產(chǎn)動物的免疫抗病能力和改善血液學(xué)指標［21］。在鰱魚傳染性脾腎壞死病毒滅活疫苗研究中，聚肌胞苷酸、殼聚糖、山莨菪堿和IMS1312佐劑均能顯著提高抗病毒功能，但殼聚糖對于鰱魚具有更好的保護，是優(yōu)先選擇的佐劑［22］。

2.1 殼聚糖作為口服疫苗載體的研究

目前，殼聚糖主要用于口服疫苗研究，在浸泡疫苗中也有少量報道。將諾達病毒的DNA疫苗包裹在殼聚糖中并將其整合到魚類飼料中，鱸魚口服后激發(fā)特異性抗體的產(chǎn)生，而且該口服疫苗能對歐洲鱸魚幼魚提供部分保護作用（45%）［23］。將DNA疫苗（PGPD+IFN）與殼聚糖納米粒進行納米偶聯(lián)，對露斯塔野鯪進行口服、浸泡和注射給藥，免疫后7～21 d IgM的產(chǎn)生逐漸增加，而口服組抗體滴度較高，其次是浸泡組，此外，在艾美耳球蟲攻擊后，口服免疫的露斯塔野鯪相對存活率最高（81.82%），其次是浸泡免疫組（72.73%），結(jié)果顯示，殼聚糖包裹的口服疫苗效果具有相當(dāng)大優(yōu)勢［24］。而Ramos等［25］研究表明，殼聚糖可使質(zhì)粒DNA免受胃酸降解，研究者將一種表達β-半乳糖苷酶的報告基因包裹在殼聚糖中，與飼料一起投喂羅非魚，免疫后在羅非魚的胃、脾和鰓中可以檢測到β-半乳糖苷酶的表達。這些研究間接驗證了殼聚糖是轉(zhuǎn)移質(zhì)粒DNA的有效口服載體，協(xié)助質(zhì)粒DNA被機體吸收，這種載體的使用可能有助于保護質(zhì)粒DNA不被食道和胃腸道中的核酸酶和酸降解。

另有研究表明，在pH2.0和pH4.5時，殼聚糖包裹的納米復(fù)合物呈現(xiàn)較完整的球形，并能在此條件下持續(xù)2 d釋放鰻弧菌胞外產(chǎn)物；而在pH7.4和pH9.0時，復(fù)合物逐漸變得疏松，之后裂解沉淀［26］。此外，在對殼聚糖進行化學(xué)修飾后，納米復(fù)合物的包封率達到92.38%，接種后血清抗體效價、溶菌酶活性以及免疫相關(guān)基因表達顯著升高，斑點叉尾鮰生物相對存活率也從30%提高到60%［27］。而用海藻酸鈉和PLGA修飾的殼聚糖包裹嗜水氣單胞菌外膜蛋白，更是大大提高了復(fù)合微球包封率，誘導(dǎo)更強的免疫應(yīng)答并持續(xù)9周［28］。大量研究已經(jīng)證明了殼聚糖在魚類上的有益應(yīng)用，如在鯪魚、虹鱒魚、草魚、羅非魚、大菱鲆和鯉魚的飼料中添加殼聚糖［29-30］表明，殼聚糖可以促進生長、提高天然免疫力、疾病和抗應(yīng)激能力，改善血液學(xué)指標，改善水質(zhì)。因此，殼聚糖可用于向水產(chǎn)養(yǎng)殖中的魚類輸送免疫刺激劑或疫苗。

2.2 殼聚糖作為浸泡疫苗載體的研究

將殼聚糖修飾的柱狀病毒仿生納米疫苗浸泡羅非魚30 min，在接種后30、60 d，有大于60%的羅非魚得到保護，與對照組相比成活率顯著提高57%［30］。Kole等［31］首次報道將滅活的病毒性出血性敗血癥病毒（Viral haemorrhagic septicaemia virus，VHSV）全病毒抗原包埋于殼聚糖中，通過浸泡途徑和口服途徑接種牙鲆，結(jié)果牙鲆內(nèi)血清、皮膚粘液和腸道粘液中的抗VHSV抗體效價均顯著提高，而浸泡效果優(yōu)于口服效果，這與殼聚糖包裹DNA疫苗效果相反，可能是口服免疫無法保護全病毒抗原導(dǎo)致在腸道中酶解。魚的體表有豐富的粘液，這種粘液含有粘蛋白，具有粘彈性和粘附性以及保護作用，這些粘膜特性可用于藥物控制釋放和免疫調(diào)節(jié)。

3 “脂質(zhì)體”遞送載體

脂質(zhì)體是球形的封閉結(jié)構(gòu)，由磷脂雙層組成，能將周圍部分溶劑包裹到其內(nèi)部。脂質(zhì)體具有高安全性、生物降解性、生物相容性以及可同時裝載親水性和疏水性制劑的能力，在疫苗遞送系統(tǒng)中，脂質(zhì)體是最廣泛使用的疫苗遞送載體之一［32］，它不僅緩慢釋放抗原并保持抗原的完整性，還能增加APC細胞吞噬顆粒的能力，從而促進體液和細胞免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)［33］。此外，作為免疫佐劑，脂質(zhì)體比市場普通免疫佐劑能夠更有效地誘導(dǎo)機體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答［34］。

3.1 脂質(zhì)體包裹病毒抗原和細菌抗原的研究

將編碼VP2衣殼蛋白的質(zhì)粒包裹在脂質(zhì)體中，然后整合到飼料中飼喂大西洋鮭魚，結(jié)果大西洋鮭魚體內(nèi)白細胞與單核細胞數(shù)量顯著增加，而且雙劑量免疫組（13%）、單劑量免疫組（16%）死亡率均低于肌肉注射組（20%）和對照組死亡率（38%）［35］。與傳統(tǒng)疫苗不同的是，負載免疫刺激劑的納米脂質(zhì)體能保護魚類免受細菌和病毒的感染。例如脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）和聚肌胞苷酸（Poly I:C）等病毒dsRNA的合成類似物，是一種與病毒感染相關(guān)的分子模式。同時包裹Poly I:C和LPS的脂質(zhì)體能引起斑馬魚免疫相關(guān)基因顯著上調(diào)，可為70%～80%的斑馬魚提供有效保護，降低魚類幼體對疾病的易感性［36］。

在脂質(zhì)體中，陽離子脂質(zhì)體與帶負電荷的脂質(zhì)體或中性脂質(zhì)體相比，陽離子脂質(zhì)體是更有效的佐劑，與重組質(zhì)粒結(jié)合時能夠減少質(zhì)粒用量、提高免疫應(yīng)答水平［37］。同時陽離子脂質(zhì)體被認為是DNA疫苗最有前景的遞送載體之一，因為它們可以凝結(jié)形成帶正電的強脂質(zhì)體-DNA復(fù)合物，從而保護質(zhì)粒DNA免受核酸酶的消化，并促進細胞膜的穿越和進入細胞質(zhì)，激活T細胞［38］。將dsRNA-YHV蛋白酶基因（dsYHV）分別包裹在4種陽離子脂質(zhì)體中，基于膽固醇的陽離子脂質(zhì)體-dsYHV復(fù)合物可使南美白對蝦避免黃頭病毒（YHV）感染，且降低病毒保護中有效的dsRNA濃度并延長dsRNA活性［39］。

3.2 脂質(zhì)體包裹其他化合物的研究

肉桂醛是從肉桂中提取的一種天然化合物，被包裹在脂質(zhì)體中。這些脂質(zhì)體對副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、哈氏弧菌（Vibrio harveyi）和遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella tarda）具有抑菌效果，隨著脂質(zhì)體濃度增加抑菌效果顯著上升，與肉桂醛相比，肉桂醛脂質(zhì)體易溶于水，更適于疫苗遞送載體［40］。此外，干擾素α（IFN-α）疫苗包埋于脂質(zhì)體后注射到草魚中，在草魚肝、腎、脾和腸中可檢測到IFN-α、干擾素調(diào)節(jié)因子1（IRF1）、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活因子3（STAT3）等免疫相關(guān)基因表達，保護草魚免受草魚呼腸孤病毒感染［41］。

4 “碳納米管”遞送載體

碳納米管（Carbon nanotubes,CNT）是合成的具有圓柱形納米結(jié)構(gòu)的碳同素異形體，由呈六邊形排列的碳原子構(gòu)成數(shù)層到數(shù)十層的同軸圓管，一般分為單壁碳納米管（Single-walled carbon nanotubes,SWCNT）和多壁碳納米管（Multi-walled carbon nanotube,MWCNT）。因碳納米管具有高比表面積、易功能化、酶底物催化性、良好的生物相容性等優(yōu)點而廣泛應(yīng)用于藥物傳遞系統(tǒng)［42］。作為一種極具潛力的納米載體，碳納米管能將大量抗原/佐劑遞送至APC細胞，具有遞送靶向性和低毒性，同時具有多種結(jié)構(gòu)形態(tài)以及跨細胞脂質(zhì)雙層增強轉(zhuǎn)運［43-45］。在漁用疫苗應(yīng)用中，碳納米管作為遞送系統(tǒng)的研究最近才開始，研究重點是碳納米管與蛋白質(zhì)的功能化以及DNA疫苗封裝。

4.1 碳納米管作為多肽和蛋白質(zhì)載體的研究

大多數(shù)生物大分子，如蛋白質(zhì)，由于細胞膜的選擇滲透性而不能進入細胞，這阻礙了疫苗的應(yīng)用。而碳納米管承載的蛋白質(zhì)可以通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用或被動運輸將疫苗裝載到細胞內(nèi)。研究表明，基于SWCNTs的浸泡疫苗可增強免疫相關(guān)基因（IgM,TGF-β,IL-1β,IL-8,TNF-α,CD4）的表達，使相對存活率提高了15%～30%［46-49］。與注射疫苗相比，Zhang等［49］針對鯉魚病毒血癥設(shè)計了注射和浸泡兩種接種方式，而特異性抗體的產(chǎn)生在接種后第4周達到高峰，其他免疫參數(shù)如血清溶菌酶活性、補體活性或堿性磷酸酶活性也被激發(fā)。重要的是，在抵抗鯉魚病毒血癥中，浸泡免疫和肌肉注射的SWCNTs-pET32a-G組均高于pET32a-G組，但浸泡接種方式的相對存活率為52.6%，較肌肉注射方式（71.1%）低，表明碳納米管疫苗可能是一種潛在有效的針對魚類病毒病原體的浸泡疫苗。而在對碳納米管進行化學(xué)修飾后，可顯著提高浸泡疫苗的功效，用純化的草魚呼腸孤病毒VP7蛋白與甘露糖修飾的碳納米管結(jié)合獲得CNTs-M-VP7疫苗，通過浸泡方式接種草魚，結(jié)果顯示草魚的成活率為96%，CNTs-M-VP7可以顯著誘導(dǎo)APC細胞的成熟和呈遞過程，引發(fā)強大的免疫反應(yīng)［50］?；谀壳暗难芯口厔?，碳納米管在漁用浸泡疫苗的遞送系統(tǒng)具有廣泛應(yīng)用前景。

4.2 碳納米管作為基因載體的研究

通過對碳納米管表面修飾，核酸可以和碳納米管結(jié)合。研究證明，與普通的裸DNA疫苗相比，這種碳納米管-核酸復(fù)合物可以有效避免DNA在組織中的快速清除和降解，延長DNA疫苗在體內(nèi)的使用時間，將錦鯉皰疹病毒的DNA疫苗裝載到碳納米管，經(jīng)肌肉注射后魚中抗體水平和免疫相關(guān)酶活性顯著提高，免疫持續(xù)時間也有所提高［51］。此外，將編碼鯉魚病毒血癥蛋白的DNA包裹在碳納米管中，經(jīng)浸泡給藥后誘導(dǎo)了顯著的抗體免疫反應(yīng)，并能對鯉魚提供中等水平的保護（相對存活率46.3%）［52］。另一種傳染性脾腎壞死病毒蛋白構(gòu)建的DNA疫苗被碳納米管包裹后，通過浸泡接種鱖魚幼魚，MCP基因在肌肉、脾臟和腎臟組織中均有表達；在疫苗接種后14 d，82.4%的鱖魚幼魚免受傳染性脾腎壞死病毒的攻擊［53］。Jia等［54］研究表明，碳納米管是一種通過浸泡給藥的優(yōu)秀DNA遞送系統(tǒng)，相較于裸DNA疫苗可提高相對存活率52.6%。可見，碳納米管是一種很有前景的DNA疫苗載體，有可能通過浸泡給藥的方式大規(guī)模用于幼魚的免疫。

5 展望

納米疫苗免疫遞送系統(tǒng)是抗原遞送系統(tǒng)研究領(lǐng)域中的熱點。納米材料具有可降解性、靶向性和藥物緩釋性等良好特性，已被美國食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration，F(xiàn)DA）認定為可用于人的可降解的高分子材料，因此，納米遞送系統(tǒng)在未來的疫苗市場具有廣闊的應(yīng)用前景。但目前納米顆粒用于水產(chǎn)養(yǎng)殖的研究仍處于早期階段，而市場上也沒有基于納米遞送系統(tǒng)的疫苗，盡管疫苗遞送的納米技術(shù)克服了許多現(xiàn)有障礙，但還存在許多亟待解決的問題，比如納米材料種類繁多，一種或多種材料使用效果不一，因此不能合成一種單一的尺寸和形狀，而是每種疫苗具有不同的最佳大小和其他屬性。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，口服和浸泡是最理想的免疫途徑，但目前對魚的免疫系統(tǒng)仍有許多方面未清楚，如口服和浸泡疫苗后涉及哪些細胞類型或粘膜免疫作用。至今，納米顆粒用于水產(chǎn)疫苗研究最多的是DNA疫苗，但目前只有一種商業(yè)DNA疫苗在加拿大獲得了許可，盡管如此，它們?nèi)允亲钣星巴镜膶共《靖腥镜墓ぞ?，因此，開發(fā)新型的包囊系統(tǒng)改善它們的管理和效率非常重要。

聚合物納米顆粒、殼聚糖納米顆粒、脂質(zhì)體納米顆粒和碳納米管等用于納米疫苗遞送系統(tǒng)，能實現(xiàn)更好的APC識別和激活，而這種穩(wěn)定的遞送系統(tǒng)確?？乖瓬蚀_遞送至APC誘導(dǎo)機體產(chǎn)生一系列免疫應(yīng)答，使疫苗在體內(nèi)緩慢釋放而減少重復(fù)接種。此外，納米顆粒的穩(wěn)定性也使其在體內(nèi)過度聚積的風(fēng)險相對較低。免疫反應(yīng)的類型和質(zhì)量可以通過改變顆粒的尺寸大小、電荷大小和形狀等來改變。目前，PLGA和殼聚糖的研究較多，其性質(zhì)和用法也較清楚，但其特性會發(fā)生變化，因此需要驗證抗原的功能結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性和免疫原性。而碳納米管或固體脂質(zhì)納米粒仍處于早期開發(fā)階段，但已顯示出較好的預(yù)期效果，特別是碳納米管，在國內(nèi)的研究相當(dāng)多，其對于疫苗的包裹效果非常好。此外，納米材料用于漁用疫苗遞送系統(tǒng)，具有疫苗佐劑效果。盡管納米粒子具有很好的生物降解性，但在水中可以檢測到納米材料降解產(chǎn)物的毒性，而在體內(nèi)是否可完全清除尚未清楚，還需要深入研究?？偟膩碚f，納米材料用于疫苗遞送系統(tǒng)是一個非常有前景的策略，能促進養(yǎng)殖魚類有效疫苗的開發(fā)，并明顯改善漁用疫苗給藥途徑。