不同豬支原體肺炎滅活疫苗免疫效果評(píng)價(jià)及比較

肖 婷，陳忠偉，蔣家霞，盧冰霞，覃國(guó)喜，韓定角，郭 旋，段群棚，趙 武，韋明宇，何 穎

（1.廣西獸醫(yī)研究所，廣西獸醫(yī)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西南寧 530001；2.廣西大學(xué)，廣西南寧 530005；3.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)新興公司，廣西柳州 545112；4.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)金光公司，廣西南寧 530022；5.廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)，廣西南寧 530022）

豬支原體肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的一種慢性、接觸性呼吸道傳染病，具有持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)、難治愈、常誘發(fā)患病豬其他病原體感染等特點(diǎn)[1]，臨床上有獨(dú)特的咳嗽和喘氣癥狀，又稱豬喘氣病或豬氣喘病[2]。有調(diào)查[3-4]顯示，全球豬群Mhp 感染陽(yáng)性率約為70%～80%，發(fā)病率為40%以上，哺乳仔豬、保育豬、育肥豬、公豬以及母豬均易感。此病會(huì)導(dǎo)致豬生長(zhǎng)速度緩慢，出欄時(shí)間延長(zhǎng)，飼料轉(zhuǎn)化率降低，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失[5]。

MPS 是一種持續(xù)性慢性疾病，抗支原體藥物可以抑制病原生長(zhǎng)和繁殖但不能將其根除，停藥后易復(fù)發(fā)并產(chǎn)生耐藥性。受國(guó)家限制使用抗生素政策的影響，接種疫苗成為預(yù)防該病的主要手段[6]。近幾年我國(guó)Mhp 疫苗使用越來越廣泛，普遍認(rèn)為疫苗接種可以減輕Mhp 對(duì)感染動(dòng)物肺臟的損傷，降低料肉比和死淘率，且使用滅活疫苗可以降低病原體數(shù)量，減少排毒，提高免疫豬群的日增重[7-8]。于淼等[9]通過調(diào)查發(fā)現(xiàn)，有過Mhp 疫苗免疫的豬場(chǎng)感染比例顯著降低。趙明禮等[10]發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)階段疫苗免疫接種組豬只比非免疫組在增重上提高了3.85 kg，日增重提高了22.64 g，平均飼料節(jié)約了4 kg/頭，料肉比降低了5.2%，成活率提高了2.0%。Moreau 等[11]通過研究發(fā)現(xiàn)，免疫接種商品化Mhp 疫苗3 個(gè)月后免疫豬群的平均日增重比未免疫豬高42 g/頭。杜德燕等[12]也發(fā)現(xiàn)，屠宰時(shí)免疫豬平均日增重比非免疫豬多20 g 以上。

當(dāng)前國(guó)內(nèi)外控制MPS 使用的疫苗以滅活苗為主。國(guó)內(nèi)上市的進(jìn)口Mhp 滅活疫苗株主要是J株、P 株、BQ14 株、P-5722-3 Ⅰ株和P-5722-3 Ⅱ株[13]，其中J 株在國(guó)內(nèi)外使用最廣泛[14]。商品化Mhp 疫苗種類繁多，不同疫苗產(chǎn)品之間免疫效果差異較大。為探究不同Mhp 滅活疫苗對(duì)豬只的免疫效果，選擇了3 種常用不同廠家的滅活疫苗進(jìn)行試驗(yàn)。其中：疫苗A 以高效的J 株為疫苗株，使用Emunade 水包油佐劑（保留了15 種Mhp 抗原蛋白）；疫苗B 以BQ14 株為免疫原，其將全菌和特選菌膜蛋白構(gòu)成雙效抗原，配合氫氧化鋁膠佐劑制成滅活疫苗（能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答）；疫苗C 則以J 株作為疫苗株，以左旋咪唑和carbomer為佐劑（左旋咪唑和樹脂分別具有增強(qiáng)免疫和緩慢釋放抗原的作用）[15-16]。本研究旨在篩選出安全可靠、效果優(yōu)良且適合豬場(chǎng)豬群接種的疫苗，以達(dá)到期望的免疫效果，從而提高豬群生產(chǎn)性能，提升豬場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料

1.1 試驗(yàn)試劑

選取3 種不同廠家的Mhp 滅活疫苗，分別為疫苗A（J 株）、疫苗B（BQ14 株）和疫苗C（J 株）；Mhp 抗體檢測(cè)試劑盒，由美國(guó)IDEXX 公司生產(chǎn)。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物

本試驗(yàn)所用豬均為1 日齡健康仔豬，由廣西某規(guī)模豬場(chǎng)提供，共計(jì)800 頭。

2 方法

2.1 試驗(yàn)分組

將規(guī)模豬場(chǎng)800 頭試驗(yàn)豬隨機(jī)分成4 組，每組200 頭，分別為疫苗A 組、疫苗B 組、疫苗C組和空白組。

2.2 免疫程序

對(duì)試驗(yàn)組豬只使用相應(yīng)疫苗按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行免疫，在7 日齡和21 日齡分別進(jìn)行免疫（每次1 頭份/ 頭），對(duì)空白組豬只僅注射生理鹽水（2 mL/只）。所有試驗(yàn)豬按照常規(guī)飼養(yǎng)進(jìn)行管理。

2.3 生產(chǎn)性能測(cè)定

記錄各組試驗(yàn)豬初始體重、保育出欄體重、育肥出欄體重，各階段飼料消耗情況，計(jì)算并分析各試驗(yàn)組不同時(shí)期料肉比和平均日增重（死亡豬的數(shù)據(jù)排除在生產(chǎn)性能評(píng)價(jià)之外）。其中：料肉比=消耗飼料總量／增重總量；平均日增重=（末期體重－初期體重）／測(cè)定天數(shù)。

2.4 臨床觀察

試驗(yàn)期間，每天密切觀察各組試驗(yàn)豬的活動(dòng)及采食情況，詳細(xì)記錄保育階段和育肥階段的咳嗽情況，每天定時(shí)觀察，記錄每頭仔豬10 min 內(nèi)的咳嗽次數(shù)，計(jì)算不同階段每組每天的平均咳嗽頻率。若試驗(yàn)期間發(fā)現(xiàn)有死亡豬只，則應(yīng)記錄死亡時(shí)間和數(shù)量，統(tǒng)計(jì)保育階段和育肥階段豬的死淘率。計(jì)算公式：死淘率=死淘頭數(shù)／飼養(yǎng)頭數(shù)×100%。

2.5 經(jīng)濟(jì)效益

記錄試驗(yàn)階段不同時(shí)期疫苗耗費(fèi)的成本，計(jì)算單頭疫苗費(fèi)用。

2.6 肺臟及肺葉病變指數(shù)統(tǒng)計(jì)

每組隨機(jī)抽取10 頭試驗(yàn)豬于180 日齡屠宰，觀察肺臟病變情況。參考Madec 評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)[17]進(jìn)行盲評(píng)并記錄，將肺臟分為7 個(gè)肺葉，每個(gè)肺葉根據(jù)實(shí)變比例評(píng)分：無(wú)實(shí)變記0 分，約1/4 實(shí)變記1 分，1/2 實(shí)變記2 分，3/4 實(shí)變記3 分，全部實(shí)變記4 分，各肺葉評(píng)分相加，總分28 分。評(píng)分均由同一人操作，評(píng)分人員不清楚相關(guān)試驗(yàn)安排。

2.7 疫苗免疫后豬血清抗體水平監(jiān)測(cè)

每組隨機(jī)抽取15 頭試驗(yàn)豬，分別于21、48、80 及140 日齡通過前腔靜脈采血并分離血清，按照ELISA 抗體檢測(cè)試劑盒說明書進(jìn)行檢測(cè)，在波長(zhǎng)為650 nm 處測(cè)量并記錄樣品和對(duì)照的吸光度值。檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：S/P＜0.3 為陰性，S/P＞0.4為陽(yáng)性，0.3 ≤S/P≤0.4 為可疑。

2.8 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用IBM SPSS Statistics V21.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析，數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P＜0.05 表示差異顯著。

3 結(jié)果與分析

3.1 保育階段各項(xiàng)指標(biāo)

由表1 可知，在保育階段，A 組和B 組的料肉比顯著低于C 組和空白組（P＜0.05），A 組比B 組更低但兩組之間沒有顯著差異（P＞0.05），C 組與空白組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；A、B 組平均日增重和轉(zhuǎn)欄單頭均重較C 組和空白組顯著提高（P＜0.05），C 組和空白組之間無(wú)明顯差異（P＞0.05），A 組平均日增重和保育出欄重最高，從高到低為A 組＞B 組＞C 組＞空白組；注射Mhp 滅活疫苗后A、B、C 組的死淘率、咳嗽頻率和藥苗成本均降低，A、B、C 組死淘率相對(duì)空白組分別降低了2.64%、2.20%、1.14%，咳嗽頻率較空白組分別降低了6.38%、5.64%、1.22%，單頭藥苗成本較空白組分別降低了2.1、1.1、0.5 元。

表1 保育階段各項(xiàng)指標(biāo)分析表

3.2 育肥階段各項(xiàng)指標(biāo)

由表2 可知，在育肥階段，A 組料肉比顯著低于B 組、C 組和空白組（P＜0.05），B 組、C組相對(duì)于空白組有所降低，但三組之間沒有差異性（P＞0.05）；A 組平均日增重較C 組和空白組顯著提高（P＜0.05），與B 組之間無(wú)明顯差異（P＞0.05），B 組與C 組、空白組之間也無(wú)明顯差異（P＞0.05）；A、B 組的育肥階段出欄單頭均重較C 組和空白組顯著提高（P＜0.05），C 組和空白組之間無(wú)明顯差異（P＞0.05），平均日增重和出欄單頭均重從高到低順序均為A 組＞B 組＞C 組＞空白組；注射疫苗后在育肥階段豬的死淘率降低，A組較空白組降低了1.88%；A、B、C 組咳嗽頻率較空白組分別降低了6.0%、3.8%、4.8%，使用疫苗后藥苗成本有所降低，成本由高到低為空白組＞C 組＞B 組＞A 組。

表2 育肥階段各項(xiàng)指標(biāo)分析表

3.3 肺臟及各個(gè)肺葉病變?cè)u(píng)分

對(duì)各組豬肺臟眼觀病變測(cè)量及計(jì)算的結(jié)果（表3）顯示：A 組豬肺臟病變程度最低，與其他組相比差異顯著（P＜0.05），病變程度由高到低為空白組＞C 組＞B 組＞A 組；B、C 兩組病變程度顯著低于空白組（P＜0.05），但兩者之間差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，3 種疫苗免疫后均可以減輕肺臟的病變程度，其中A組疫苗效果最好，有效減輕了肺臟的病變程度。

表3 各組豬肺臟病變?cè)u(píng)分 單位：分

3.4 疫苗免疫后豬血清抗體水平和抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)

由表4～5、圖1 可看出，在21 日齡免疫仔豬中檢測(cè)到Mhp 血清抗體，但仔豬的抗體水平均較低，A、B、C 組抗體水平與空白組之間差異不顯著（P＞0.05），3 組抗體陽(yáng)性率均為0；48 日齡時(shí)，A、B、C 組Mhp 抗體水平升高，與空白組相比差異顯著（P＜0.05），其中A 組抗體水平較B、C 組高，但差異不顯著（P＞0.05），免疫組抗體陽(yáng)性率也明顯提高，均超過80%，且A 組比B、C組均高6.7%，空白組抗體陽(yáng)性率仍然為0；80 日齡時(shí)，試驗(yàn)組抗體水平和抗體陽(yáng)性率都有所下降，但與空白組相比仍差異顯著（P＜0.05）；140 日齡時(shí)，試驗(yàn)組Mhp 抗體水平明顯上升，A、B、C組和空白組之間差異顯著（P＜0.05），抗體水平由高到低分別為A 組、B 組、C 組和空白組，試驗(yàn)組和空白組抗體陽(yáng)性率均明顯上升，空白組出現(xiàn)一頭陽(yáng)性抗體豬，抗體陽(yáng)性率上升到6.7%，A 組陽(yáng)性率最高，為93.3%。

表4 不同Mhp 滅活疫苗抗體水平檢測(cè)結(jié)果

表5 不同Mhp 滅活疫苗抗體陽(yáng)性率統(tǒng)計(jì)結(jié)果 %

圖1 不同日齡下的豬血清抗體檢測(cè)結(jié)果趨勢(shì)

4 討論

在本研究中，試驗(yàn)組在育肥階段和保育階段的料肉比和死淘率均較空白組有所降低，平均日增重顯著提高，且疫苗A 在提高生長(zhǎng)性能方面優(yōu)于疫苗B 和C。Maes 等[18]對(duì)不同商品豬經(jīng)Mhp 疫苗免疫對(duì)其平均日增重的影響進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)免疫可以使豬的平均日增重提2%～8%；彭濤等[19]、晉春霞等[20]通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，免疫滅活疫苗組豬只與對(duì)照組相比平均增重都有所提高；毛春玲等[21]發(fā)現(xiàn)，疫苗免疫組的豬在斷奶重、出欄重、平均日增重、飼料增重比方面顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）；張寧等[22]對(duì)國(guó)內(nèi)外3 種知名Mhp 疫苗進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，整個(gè)試驗(yàn)階段在對(duì)照組試驗(yàn)開始個(gè)體重有優(yōu)勢(shì)的情況下，3 個(gè)疫苗組的出欄重及日增重均好于對(duì)照組；寧明剛等[23]在免疫M(jìn)hp 疫苗后發(fā)現(xiàn)，免疫組豬只跟對(duì)照組相比，保育階段料肉比降低了0.04，育肥階段料肉比降低了0.07。以上試驗(yàn)結(jié)果均與本研究結(jié)果一致，說明及時(shí)進(jìn)行豬Mhp 疫苗免疫對(duì)提高豬的日增重以及增加收益非常重要，且從各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)可看出疫苗A 作用效果優(yōu)于疫苗B、C。

屠宰病變?cè)u(píng)估是通過對(duì)出欄豬的組織臟器進(jìn)行肉眼病變觀察，進(jìn)而對(duì)豬群的健康狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)的一種評(píng)估方法，是評(píng)價(jià)豬抗病力和疫苗效力的重要手段[24]。通過對(duì)肺臟眼觀病變?cè)u(píng)分發(fā)現(xiàn)，疫苗免疫后各組豬肺臟病變程度均小于空白組，且A 組效果最佳，表明疫苗免疫后能對(duì)豬肺臟產(chǎn)生免疫保護(hù)。彭濤等[19]試驗(yàn)結(jié)果表明，接種滅活疫苗組豬只肺臟病變程度相對(duì)空白對(duì)照組降低了11.54%，與本研究結(jié)果一致，說明接種疫苗能對(duì)豬肺臟產(chǎn)生一定保護(hù)作用。

Mhp 通過感染破壞上呼吸道纖毛，導(dǎo)致纖毛脫落，抑制機(jī)體免疫應(yīng)答，破壞巨噬細(xì)胞功能，從而導(dǎo)致豬體的體液免疫和細(xì)胞免疫功能降低[25-26]。Mhp 滅活疫苗能誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生較高水平的體液免疫應(yīng)答，當(dāng)機(jī)體同時(shí)產(chǎn)生較好的體液免疫、細(xì)胞免疫與局部的黏膜免疫保護(hù)時(shí)，可進(jìn)一步抵抗Mhp野毒感染[27]，降低疾病感染率。Bai 等[28]、朱蓓蓓等[29]發(fā)現(xiàn)，分別給豬只免疫滅活苗后進(jìn)行攻毒和接種滅活疫苗，免疫組血清中IgG 抗體均會(huì)升高。在本試驗(yàn)中，免疫組豬只的抗體水平和抗體陽(yáng)性率表現(xiàn)相同變化趨勢(shì)，21 日齡時(shí)基本檢測(cè)不到Mhp血清抗體；二次免疫后，48 日齡時(shí)Mhp 血清抗體水平和陽(yáng)性率大幅度提高；80 日齡時(shí)血清抗體水平和陽(yáng)性率略有下降，可能與疫苗產(chǎn)生抗體的半衰期有關(guān)[30]；而在140 日齡時(shí)，抗體水平和陽(yáng)性率回升且總體水平超過50 日齡，整體變化趨勢(shì)與毛春玲等[21]、張艷等[30]研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)表明，接種Mhp 滅活疫苗J 株可以提高豬的抗體水平，增強(qiáng)免疫能力，降低感染率，且在抗體水平和抗體陽(yáng)性率上，疫苗A 每個(gè)階段都優(yōu)于其他疫苗。

各滅活疫苗之間的區(qū)別主要在于有效抗原含量、佐劑及生產(chǎn)工藝不同[31]。疫苗A 作用效果優(yōu)于疫苗B，除了生產(chǎn)工藝的差異外，推測(cè)原因：一方面是疫苗A 的佐劑效果優(yōu)于疫苗B。有研究[32]表明，相對(duì)于油包水佐劑和鋁佐劑，水包油型佐劑具有更好的免疫安全性。另一方面可能是因?yàn)閺V西本地當(dāng)前流行株與J 株之間的同源性比BQ14 株要高。P97 作為Mhp 的黏附因子，在Mhp 感染過程中起著重要作用，也具有很好的免疫原性。黎珂鈺等[33]曾以15 株廣西陸川豬Mhp 毒株和3 株廣西其他品種豬Mhp 毒株為研究對(duì)象，發(fā)現(xiàn)各分離株與國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株Mhp J 株的P97基因R1 區(qū)核苷酸同源性達(dá)到80.9%～91.7%，但關(guān)于BQ14 株與本地流行株同源性比較還暫未有相關(guān)研究報(bào)道。疫苗A與疫苗C 作用效果差異主要在于佐劑與生產(chǎn)工藝之間的不同。從試驗(yàn)結(jié)果來看，Mhp 滅活疫苗以Emunade 水包油為佐劑的使用效果可能相對(duì)比左旋咪唑和carbomer 為佐劑使用效果好。

總之，本研究通過對(duì)3 種常用不同廠家的Mhp 滅活疫苗進(jìn)行試驗(yàn)，以廣西本地生豬養(yǎng)殖企業(yè)為基礎(chǔ)，得到了不同疫苗在臨床中作用效果的高低。結(jié)果顯示，疫苗A 在保育階段和育肥階段料肉比、平均日增重、死淘率、咳嗽頻率、單頭藥苗費(fèi)、肺部病變等方面均優(yōu)于疫苗B 和C，且接種疫苗A 的豬能獲得更高的抗體水平，抗體陽(yáng)性率也更高，臨床使用疫苗A 具有明顯優(yōu)勢(shì)。本研究結(jié)果為豬場(chǎng)篩選疫苗提供了一定參考，也為生豬產(chǎn)業(yè)的生產(chǎn)實(shí)踐提供了一定理論數(shù)據(jù)。