PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬應(yīng)用試驗

王芳蕊，袁雪濤，王 鎮(zhèn)，楊 穎，崔 捷

（1.天津市動物疫病預(yù)防控制中心，天津 300402；2.天津市農(nóng)業(yè)發(fā)展服務(wù)中心，天津 300402）

豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）俗稱豬藍(lán)耳病，按其病原致病力不同，分為經(jīng)典PRRS 和高致病性PRRS[1]，是當(dāng)前造成養(yǎng)豬業(yè)嚴(yán)重?fù)p失的重要疫病之一。因此，豬場應(yīng)加強PRRS 監(jiān)測，隨時關(guān)注豬群感染情況，科學(xué)選擇疫苗，做好PRRS 防控。而豬場選擇哪種PRRS 防控方案及疫苗種類，要根據(jù)豬場自身定位來決定。種豬場、育肥場以及PRRS陰性場、陽性穩(wěn)定場或不穩(wěn)定場，在疫苗方案選擇上都有一定的區(qū)別。本研究在天津市某PRRS 陽性豬場開展了PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）[2]和滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬試驗，以驗證該免疫方案的防控效果。

1 材料與方法

1.1 試驗豬場背景

2021 年3 月，天津市薊州區(qū)某豬場發(fā)生PRRS疫情并伴有氣喘病、流行性腹瀉等疾病。該豬場現(xiàn)存欄母豬200 余頭、保育900 頭；采取自繁自養(yǎng)模式，無購入史，曾免疫豬偽狂犬病活疫苗、豬瘟活疫苗、口蹄疫滅活疫苗，近期免疫流行性腹瀉疫苗，抗體均在正常范圍內(nèi)，未實施PRRS 疫苗免疫。

病死豬臨床表現(xiàn)為整體瘦弱，頭部有略微浮腫，全身出現(xiàn)藍(lán)紫色瘀斑，耳廓邊緣有明顯出血斑。肺臟表現(xiàn)為間質(zhì)性肺炎，呈現(xiàn)花斑肺（圖1），心尖葉有對稱性蝦肉樣變化，肺臟實質(zhì)有個別不規(guī)則分布的紫紅色實變區(qū)，腸道內(nèi)充滿稀薄的內(nèi)容物。采集病死豬頜下、腸系膜、腹股溝淋巴結(jié)以及肺臟、脾臟，使用高致病性PRRS 實時熒光檢測試劑盒進(jìn)行檢測，結(jié)果為核酸陰性，即非高致病性PRRS 疫情；使用類NADC-30 毒株核酸檢測試劑盒進(jìn)行檢測，結(jié)果為核酸陽性。隨機采集30 份血液樣本進(jìn)行PRRSV 抗原和抗體檢測，結(jié)果抗原檢測均為陰性，抗體檢測9 份陽性，抗體陽性率為30%。結(jié)合上述臨床、剖檢及抗原檢測結(jié)果，判定該養(yǎng)殖場為PRRS 陽性場。

圖1 剖檢所見病豬肺部病變

1.2 試驗材料

1.2.1 試驗豬 妊娠40 d 左右的健康母豬和有呼吸道癥狀的母豬[1]，試驗前應(yīng)用ELISA 抗體檢測試劑盒檢測其PRRSV 抗體水平。

1.2.2 疫苗 PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株），以下稱“疫苗A”，由杭州某動物疫苗有限公司提供，疫苗批號為 201205；PRRS 滅活疫苗，以下稱“疫苗B”，由杭州某動物疫苗有限公司提供，疫苗批號為201258。

1.2.3 試劑盒 PRRSV 間接ELISA 抗體檢測試劑盒，購自北京天之泰生物科技有限公司，批號為CPA.43X3。

1.3 試驗方法

1.3.1 疫苗安全性試驗 因疫苗B 為滅活疫苗，安全性相對較高，因此正式試驗前僅對疫苗A 開展安全性試驗（預(yù)試驗）。隨機選取妊娠40 d 和80 d 的母豬各5 頭，每頭母豬肌內(nèi)注射1 頭份疫苗A，觀察其體溫、精神狀態(tài)及采食量變化。

1.3.2 免疫效果評價試驗

1.3.2.1 分組 選取生產(chǎn)性能及生產(chǎn)時間相近的妊娠40 d 左右的健康母豬20 頭，隨機分成2 組（試驗1 組和對照組），每組10 頭；另選取妊娠40 d左右有呼吸道癥狀的母豬6 頭作為試驗2 組，進(jìn)行耳標(biāo)登記。

1.3.2.2 免疫方案 試驗預(yù)飼期為15 d，試驗豬只臨床無異常。試驗1 組10 頭母豬和試驗2 組6頭母豬均于妊娠42 d 每頭同時接種1 頭份疫苗A和2 mL 疫苗B，于頸部兩側(cè)肌肉分開注射，對照組10 頭母豬于妊娠42 d 同時注射同等劑量疫苗稀釋液。所有試驗豬群均在隔離狀態(tài)下飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境和管理方式相同。

1.3.2.3 安全性觀察 觀察并記錄接種后1～7 d母豬每天上午和下午體溫以及精神狀態(tài)和采食量變化，持續(xù)觀察60 d，并于免疫后不同時間采集肛拭子、豬舍糞土與水樣進(jìn)行疫苗毒RT-PCR 檢測。

1.3.2.4 免疫抗體檢測 在疫苗免疫后0、14、28、42、70 d，各采集5 mL 血液（對照組28 d 后不再采集），分離血清，測定PRRSV 抗體水平，并進(jìn)行抗體IRPC 值及其變異系數(shù)（CV）比較分析。CV=標(biāo)準(zhǔn)偏差/平均值×100%。

1.3.2.5 母豬生產(chǎn)成績觀察 記錄每頭試驗豬的分娩時間、產(chǎn)仔總數(shù)、健仔數(shù)，以及產(chǎn)木乃伊胎和死胎數(shù)等。

2 結(jié)果與分析

2.1 安全性

接種疫苗A 后7 d 內(nèi)，妊娠40 d 和80 d 母豬均未表現(xiàn)精神異常、采食下降等不良反應(yīng)[3]。體溫測定結(jié)果（圖2）顯示：妊娠40 d 母豬注射疫苗A后，全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.2 ℃；妊娠80 d 母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.3℃。兩個妊娠階段的試驗?zāi)肛i體溫均未見異常，符合健康母豬的正常體溫標(biāo)準(zhǔn)（38.0～39.5 ℃），表明疫苗A 具有良好的安全性。

圖2 妊娠母豬接種疫苗A 后平均體溫變化規(guī)律

2.2 免疫效果

2.2.1 安全性 接種聯(lián)合疫苗后7 d 內(nèi)，妊娠42 d母豬均未表現(xiàn)精神異常和采食下降等不良反應(yīng)。體溫測定結(jié)果（圖3）顯示：對照組母豬全程7 d 最高體溫為38.4 ℃，最低為38.0 ℃；試驗1 組母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.2 ℃；試驗2 組母豬全程7 d 最高體溫為38.7 ℃，最低為38.1 ℃。免疫后7、14、21、28、35、42、49 和60 d 采集試驗組豬肛拭子進(jìn)行病毒檢測，均未檢測到病毒；對試驗豬群飼養(yǎng)環(huán)境采集的豬舍糞土與水樣進(jìn)行RT-PCR 檢測，結(jié)果均為陰性。綜上，兩個試驗組豬體溫均正常，符合健康母豬正常體溫標(biāo)準(zhǔn)[4]（38.0～39.5 ℃），疫苗不存在通過糞便向外排毒的風(fēng)險，表明疫苗A+疫苗B 具有良好的安全性。

圖3 全部試驗妊娠母豬接種疫苗A+疫苗B 后平均體溫變化規(guī)律

2.2.2 抗體陽性率 采用PRRSV 間接ELISA 抗體檢測試劑盒，對采集的血清樣品進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)：免疫前（妊娠42 d），試驗1 組10 頭母豬抗體全部為陰性，試驗2 組有2 頭母豬抗體為陽性，但抗原為陰性；免疫后14、28、42、70 d，2 個試驗組母豬采集樣品的PRRSV 抗體陽性率均為100%。對照組均為陰性。

2.2.3 抗體IRPC 值 統(tǒng)計結(jié)果（表1）顯示：試驗1 組在免疫后28 d（妊娠70 d）抗體IRPC 平均值達(dá)到高峰195.5，免疫后42 d（妊娠84 d）仍維持在較高水平；試驗2 組雖然有2 頭母豬在免疫前曾受野毒感染，但免疫后14 d（妊娠56 d）抗體IRPC 值也快速上升，免疫后28 d（妊娠70 d）達(dá)到高峰172.3，免疫后42 d（妊娠84 d）仍維持在較高水平。結(jié)果表明，試驗?zāi)肛i注射疫苗A+疫苗B 可以很好地誘導(dǎo)機體產(chǎn)生正常的免疫反應(yīng)[5]。

表1 免疫前后不同時間各組母豬PRRSV 抗體IRPC 值

2.2.4 CV 統(tǒng)計結(jié)果（表2）顯示：與免疫前相比，免疫后14 d，試驗1 組和2 組CV 分別下降31 個和44 個百分點，表明免疫后血清抗體水平整齊度明顯上升。隨著免疫時間的延長，抗體IRPC值變異系數(shù)逐步升高；試驗2 組CV 值較試驗1 組CV 值變化更小。

表2 免疫前后不同時間各組母豬PRRSV 抗體CV 值 %

2.3 母豬生產(chǎn)成績

統(tǒng)計結(jié)果（表3）顯示：各組母豬分娩時間均正常，其中對照組各項生產(chǎn)指標(biāo)均低于試驗組；試驗2 組平均窩產(chǎn)活仔數(shù)略低于試驗1 組，但2 個試驗組的死胎和木乃伊胎總數(shù)占產(chǎn)仔數(shù)比例明顯低于對照組。試驗組母豬所產(chǎn)仔豬的均勻度、活潑程度均高于對照組。

表3 各組母豬生產(chǎn)成績匯總

3 討論

PRRSV 在我國豬群中呈現(xiàn)遺傳多樣性特征，不同個體對同一毒株的易感性也不同[6]，變異毒株間異源保護(hù)性不足造成缺少“通用疫苗”。因此，診斷監(jiān)測是防控PRRS 的重要前提[7]。豬場要確切了解PRRSV 本身及其感染狀態(tài)的變化和對生產(chǎn)造成的影響，追蹤后備母豬是否馴化成功以及母豬群的穩(wěn)定性、生長育肥豬感染狀況，這樣才能科學(xué)合理地選擇疫苗免疫方案，精準(zhǔn)控制PRRS[8]。

PRRS 活疫苗（PC 株）是利用基因嵌合技術(shù)，通過反向遺傳操作方法構(gòu)建的PC 株制備的，（既含有經(jīng)典株的部分基因，又含有高致病性變異株的部分基因），可同時預(yù)防經(jīng)典和高致病性PRRS。PC 株活疫苗與滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬，能更好地產(chǎn)生中和抗體和細(xì)胞介導(dǎo)免疫，在預(yù)防兩種類型PRRS 時，既能刺激機體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答，又能激發(fā)較強的細(xì)胞免疫應(yīng)答，實現(xiàn)更好的防控效果。

在本試驗中，母豬同時免疫PC 株活疫苗與滅活疫苗，1 周內(nèi)體溫變化范圍為0～0.6 ℃，對母豬分娩時間也沒有影響；免疫后60 d 試驗豬群肛拭子、豬舍糞土與水樣中均沒有檢測到病毒，證明疫苗不存在通過糞便向外排毒的風(fēng)險；在產(chǎn)仔性能方面，試驗1 組成績最好，成活率為100%；在仔豬初生重、均勻度和健壯活潑程度方面，試驗組優(yōu)于對照組。綜上，初步證明聯(lián)合免疫對母豬具有較好的安全性。母豬于妊娠42 d 同時接種PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗，免疫后28 d抗體達(dá)到峰值，而CV 值明顯降低，表明該疫苗免疫能夠很好地激發(fā)機體建立免疫反應(yīng)，并提高豬群抗體的整齊度。通過觀察母豬生產(chǎn)情況，試驗各組的生產(chǎn)成績均優(yōu)于對照組，證明臨床應(yīng)用PRRS 嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗聯(lián)合免疫母豬效果良好。

本研究采用嵌合病毒活疫苗（PC 株）和滅活疫苗聯(lián)合免疫方案，進(jìn)行病原、應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)以及免疫抗體檢測[9]，為PRRS 陽性豬場科學(xué)制定免疫程序提供了依據(jù)。但本次試驗受各方面條件限制，試驗動物較少（26 頭母豬），結(jié)論基于較少試驗動物得出具有一定局限性。若要對生產(chǎn)實際起到指導(dǎo)作用還需要大數(shù)據(jù)的驗證和支持[10]。下一步，將繼續(xù)追蹤觀察該場仔豬生長情況及PRRS 防控效果，并向同類型豬場推廣該項聯(lián)合免疫技術(shù)方案。