對1例血液標本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象病例的報告

熊穎婕

（佛山市婦幼保健院，廣東 佛山 528000）

冷凝集素是一種能在低于37℃的條件下凝集細菌、紅細胞（red blood cell，RBC）等顆粒性抗原的抗體，其引起凝集反應(yīng)時的溫度條件通常小于30℃，當溫度上升至37℃時相關(guān)凝集現(xiàn)象可消失[1]。本文主要是介紹1 例紅斑狼瘡患者血液標本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的具體情況及相應(yīng)的處理方法。

1 病例資料

患者女，30 歲，發(fā)熱4 d（體溫最高39℃），存在畏寒、干咳、咽痛、頭暈、乏力不適等癥狀，自行服用感冒藥后癥狀無好轉(zhuǎn)，遂至我院就診。后于我院被確診為紅斑狼瘡。

2 實驗室檢查情況

在對該患者進行血常規(guī)檢查后，我們發(fā)現(xiàn)其RBC 計數(shù)極低，其平均紅細胞血紅蛋白量（mean corpuscular hemoglobin，MCH）、平均紅細胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin contentration，MCHC）均明顯偏高。對其血液標本的外觀進行檢視發(fā)現(xiàn)，試管壁上明顯附著有斑塊樣凝集顆粒，搖動試管即可見到顆粒出現(xiàn)（說明血液標本出現(xiàn)了冷凝集現(xiàn)象）?？梢姡皽y得的RBC 計數(shù)不準確，白細胞（white blood cell，WBC）計數(shù)及分類結(jié)果也可能有誤。因此，我們根據(jù)以往的經(jīng)驗對上述血液標本進行了多種預(yù)處理及重新檢測，并最終獲得了令人滿意的檢測結(jié)果。具體的處理過程及檢測方法如下：1）將血液標本置于37℃的水浴中，約30 min 后發(fā)現(xiàn)其中的凝集顆粒略有解離，遂立即以閉蓋急檢模式進行上機測定。但檢測結(jié)果與第1 次檢測的結(jié)果類似，肉眼檢視標本外觀，可見血液冷凝集現(xiàn)象未消失。2）將血液標本用37℃的溫生理鹽水稀釋4 倍后立即上機測定，然后將測得檢測結(jié)果中RBC、WBC、血紅蛋白（hemoglobin，HGB）、血小板（blood platelet，PLT）的計數(shù)結(jié)果均×4，所得測定結(jié)果仍不理想。3）采用傳統(tǒng)的顯微鏡法對血液標本進行檢測。將血液標本置于37℃的水箱內(nèi)孵育30 min，用加樣器取孵育好的血液標本10 μL，并迅速將其稀釋于2 mL 的溫生理鹽水（溫度為37℃）中?；旌暇鶆蚝螅蔚接嫈?shù)板上進行計數(shù)[2]。在顯微鏡下仍然可見有少許聚在一起的RBC，無法準確計數(shù)。用力振搖幾下稀釋后的血液標本，然后再次滴到計數(shù)板上觀察。發(fā)現(xiàn)RBC 在計數(shù)板上分布均勻，隨后采用顯微鏡計數(shù)法對RBC進行了計數(shù)。在完成RBC 計數(shù)后，分別使用WBC 稀釋液和PLT 稀釋液對孵育后的血液標本進行了稀釋，并同樣采用顯微鏡計數(shù)法對其進行了WBC 計數(shù)和PLT 計數(shù)。為了進行WBC 分類計數(shù)，我們制作了血涂片。但在將血液標本滴于載玻片上后，其中的RBC 立即出現(xiàn)聚集。因此，我們嘗試先將載玻片放在暖氣片上進行預(yù)溫，然后再將血液標本滴在載玻片上，并立即進行推片。雖然涂片上的RBC 仍存在聚集的情況，但能夠清晰地觀察到散在的WBC（見圖1）。隨后我們采用顯微鏡計數(shù)法完成了WBC 的分類計數(shù)。

圖1 冷凝集血液標本血涂片的瑞-姬染色圖像

3 討論

由血液標本出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象所導(dǎo)致的血常規(guī)檢驗無法完成的情況并不少見，相關(guān)文獻中多有報道，其解決方法也有多種[3]。針對本病例，我們嘗試用了3 種方法對其血液標本進行了處理和檢測。相關(guān)的研究指出，冷凝集現(xiàn)象可對部分血液標本W(wǎng)BC、PLT 計數(shù)結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響[4-7]。在本研究中，經(jīng)顯微鏡計數(shù)法確認，冷凝集現(xiàn)象對儀器法測得的WBC、PLT 計數(shù)未產(chǎn)生明顯的影響。有研究表明，冷凝集素效價過高可導(dǎo)致血型鑒定錯誤和交叉配血不合[8-9]，在臨床采供血工作中應(yīng)對上述情況予以重視。冷凝集素是一種冷反應(yīng)型抗RBC 抗體，在0 ～4℃時最易與RBC 抗原相結(jié)合。正常情況下，其效價＜1:32，不會出現(xiàn)與RBC 的凝集反應(yīng)[10-11]。冷凝集素綜合征又叫冷凝集素病。此病是一種自身免疫性疾病。此病患者的主要臨床表現(xiàn)為體表皮膚溫度降低時出現(xiàn)肢體末端血管內(nèi)紅細胞凝集、皮膚微循環(huán)障礙、手足紫紺等情況。其血液標本在20℃以下時會出現(xiàn)明顯的冷凝集現(xiàn)象。有研究指出，冷凝集素與RBC 抗原的結(jié)合是完全可逆的。將出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的血液標本置于37℃的水浴箱中，其RBC 凝集情況可自行消失。使用冷凝集現(xiàn)象消失后的血液標本進行上機測定，仍然可以獲得準確的實驗結(jié)果。但血液標本的冷凝集現(xiàn)象若非常嚴重（出現(xiàn)RBC 凝集成大團塊現(xiàn)象），僅對其進行水浴處理可能無法完全消除其中RBC 凝集的情況或從水浴箱中將其取出后其中的RBC 會再次迅速凝集。對于存在上述情況的血液標本，需要采用震蕩等方法對其進行處理。相關(guān)的研究指出，冷凝集素效價顯著增高主要見于原發(fā)性冷凝集素綜合征患者的血液標本，其效價可高達1:1。而冷凝集素效價輕度增高常見于非特異性炎癥性疾病、間質(zhì)性肺炎、自身免疫性疾病、多發(fā)性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、傳染性單核細胞增多癥等病毒感染性疾病、肺炎支原體肺炎等疾病患者的血液標本[12-14]。本研究中的病例后續(xù)接受了多項檢查。血常規(guī)檢查提示其存在重度貧血，其進行直接、間接COOMB’S 試驗的結(jié)果均為陽性，考慮其存在溶血性貧血。其抗核抗體定量檢測的結(jié)果＞500 AU/mL，抗雙鏈DNA 抗體檢測的結(jié)果呈陽性，補體C3、C4 的水平較低，尿蛋白檢測的結(jié)果呈陽性（2+），最終考慮將其病情診斷為系統(tǒng)性紅斑狼瘡、自身免疫性溶血性貧血。筆者認為，在進行血液檢驗的過程中，尤其是冬季室溫較低時，檢驗人員應(yīng)注意觀察血液標本是否出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象。一旦發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)冷凝集現(xiàn)象的血液標本，應(yīng)先對其進行妥善的處理，然后再對其進行檢測，以確保檢測結(jié)果的準確。