黃芪多糖對野百合堿誘導(dǎo)的肺動脈高壓大鼠肺動脈血管的保護作用及其機制

李 聰, 趙 坤, 張景良, 張英杰, 王洪新

（1.錦州醫(yī)科大學(xué)遼寧省心腦血管藥物研究重點實驗室，遼寧 錦州 121001；2.錦州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心血管內(nèi)科，遼寧 錦州 121000）

肺動脈高壓（pulmonary arteries hypertension ，PAH）是一種以肺動脈重塑為特征的臨床綜合征，可導(dǎo)致肺血管阻力增加和右心室功能障礙，最終導(dǎo)致死亡［1-2］。到目前為止，PAH 的具體發(fā)病機制尚不清楚，但是肺血管內(nèi)皮的損傷和功能障礙在疾病的進展中起關(guān)鍵作用［3］。炎癥小體由NOD 樣受體家族蛋白 3（NOD-like receptor protein 3，NLRP3）、凋亡相關(guān)斑點樣蛋白（apoptosisassociated speck-like protein，ASC）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 1（cysteinyl aspartate specific proteinase 1，Caspase-1）組成，其激活炎癥因子白細胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和白細胞介素18（interleukin-18，IL-18），參與機體的炎癥反應(yīng)［4-5］。PASQUA 等［6］研究顯示：NLRP3炎癥小體參與PAH 的進展。鈣蛋白酶（Calpain）是鈣依賴性非溶酶體的中性半胱氨酸內(nèi)肽酶家族，其參與多種生理過程，包括神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病和癌癥，Calpain 在動脈粥樣硬化和炎癥過程中發(fā)揮重要作用，而鈣蛋白酶1（Calpain-1）和鈣蛋白酶2（Calpain-2）是2個主要 的Calpain［7-8］。YU 等［9］研究顯示：Calpian-1 對NLRP3 炎癥小體的激活起一定作用。因此Calpian-1 可能是調(diào)控PAH 肺動脈血管炎癥機制的重要靶點。

黃芪 多糖（astragalus polysaccharides，APS）是一種中草藥，是從黃芪中提取的主要活性成分，APS 具有許多潛在的作用，如抗氧化、抗高血壓、免疫調(diào)節(jié)和減輕動脈炎癥［10-11］。研究［12-13］顯示：在ATP 刺激下，炎癥細胞Calpain 被激活從而促進IL-18 的分泌，并且Calpain 具有激活NLRP3 炎癥小體的作用。目前尚無關(guān)于野百合堿（monocrotaline，MCT）誘導(dǎo)的PAH 大鼠模型中APS 對Calpain-1 表達影響的相關(guān)報道。本研究建立MCT 誘導(dǎo)的大鼠PAH 模型，探討APS 對PAH大鼠肺組織中Calpain-1 表達和NLRP3 炎癥小體的影響。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、主要試劑和儀器60只健康雄性SD 大鼠，體質(zhì)量180～200 g，4～6周齡，由錦州醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供，動物使用許可證號：SYXK（遼）2019-007。APS（純度75%）和組織總蛋白提取試劑購自南京建成生物工程研究所，MCT 和MCC950購自美國Sigma公司，Calpain-1、NLRP3、ASC 、Caspase-1、B細胞淋巴瘤2（B cell lymphoma-2，Bcl-2）、Bcl-2 相關(guān)X蛋白（Bcl-2 assaciated X protein，Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3（cysteinyl aspartate specific proteinase-3，Caspase-3）一抗購自武漢愛博泰克生物科技有限公司，β-actin 一抗、兔二抗和鼠二抗購自武漢三鷹生物技術(shù)有限公司，ELISA 試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，Calpain 活性檢測試劑盒購自艾美捷科技有限公司，HE 染色試劑盒購自碧云天生物技術(shù)研究所，免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京中衫金橋生物公司。低溫高速離心機購自美國Thermo Fisher 公司，BL-420S 生物機能實驗系統(tǒng)購自成都泰盟科技有限公司，凝膠成像儀和半干轉(zhuǎn)印儀購自美國Bio-Rad 公司，Leica DMI 3000B 倒置顯微鏡購自德國Leica 公司。

1.2 PAH 大鼠模型的建立從60只SD 雄性大鼠中隨機取10只正常大鼠作為對照組，剩余50只大鼠腹腔注射60 mg·kg－1MCT 誘導(dǎo)PAH，隨后隨機分為PAH組、Calpain-1 抑制組、NLRP3 抑制劑組、低劑量APS組（400 mg·kg－1APS）和高劑量APS組（800 mg·kg－1APS）。NLRP3 抑制劑組大鼠每周給予MCC 950（NLRP3 抑制劑）3 mg·kg－1，Calpain-1 抑制劑組大鼠每周給予MDL 28170（MCT 抑制劑）10 mg·kg－1，其余各組大鼠腹腔注射相同體積的生理鹽水。各劑量APS組每天根據(jù)大鼠體質(zhì)量灌胃相應(yīng)劑量的黃芪多糖，其余各組大鼠給予相同容積的生理鹽水灌胃，持續(xù)4周。喂養(yǎng)期間密切觀察各組大鼠的健康狀況。

1.3 各組大鼠一般狀況觀察觀察各組大鼠的進食情況、毛發(fā)情況、呼吸情況和死亡情況，并及時解剖大鼠，分析大鼠死因。

1.4 各組大鼠右心室收縮壓（right ventricular systolic pressure，RVSP）和右心室肥厚指數(shù)（right ventricular hypertrophy index，RVHI）的測定各組大鼠飼養(yǎng)4周后，記錄大鼠體質(zhì)量。采用戊巴比妥鈉（40 mg·kg－1）進行腹腔注射麻醉，經(jīng)頸行正中切口，找到右頸外靜脈并分離出，采用經(jīng)頸靜脈右心導(dǎo)管插管的方法檢測RVSP，完成記錄后，立即處死大鼠取出心臟，剪去心房和心耳，分別稱量右心室（right ventricular，RV）、左心室（left ventricular，LV）和室間隔（interventricular septum，IVS）的質(zhì)量，采用濾紙吸干血液后稱質(zhì)量，RVHI＝RV 質(zhì)量/（LV 質(zhì)量+IVS 質(zhì)量）。

1.5 各組大鼠血清IL-1β 和IL-18 水平檢測各組大鼠心臟取血，4℃靜置0.5 h，3 000 r·min－1離心15 min，提取上清，凍存于－80℃條件下以待檢測。根據(jù)ELISA 試劑盒說明書檢測各組大鼠血清IL-1β 和IL-18水平。

1.6 各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)和血管厚度測定取各組大鼠左肺組織，并置于4% 甲醛固定24h后梯度乙醇脫水，石蠟包埋，切片4 μm 進行HE 染色，封片后置于光鏡下觀察各組大鼠肺組織病理形態(tài)表現(xiàn)。采用Image Pro Plus 5.1 軟件測量各組大鼠肺動脈血管，測量血管壁直徑（wall thickness，WT）、血管壁總直徑（total thickness，TT）、血管壁面積（vessel wall area，WA）和血管總面積（vessel total area，TA）。根據(jù)公式計算：血管壁中層厚度占血管總直徑的百分率（WT%）=（WT/TT）×100%，管壁面積占血管總面積的百分率（WA%）=（WA/TA）×100%。

1.7 免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠肺小動脈組織中Calpian-1 的表達將肺組織切片預(yù)熱二甲苯脫蠟，梯度乙醇脫水，抗原修復(fù)，3% 過氧化氫室溫氧化15 min，PBS 緩沖液漂 洗3次，每次5 min，山羊血清常溫封閉10 min 后滴加Calpain-1 一抗（1∶200），4℃過夜，PBS 緩沖液漂洗10 min，滴加二抗（1∶200）置于37℃放置1 h，PBS 緩沖液漂洗3次，每次5 min，DAB 顯色1～2 min，蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，光學(xué)顯微鏡下觀察出現(xiàn)棕褐色細顆粒為Calpain-1 陽性表達。采用Image-ProPlus 6.0 軟件分析Calpain-1 的表達情況。

1.8 Western blotting 法檢測各組大鼠肺組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3、NLRP3、ASC、Caspase-1 和Calpain-1 蛋白表達水平取約100 mg 大鼠肺組織，加入RIPA 強裂解液后剪碎，超聲粉碎30 s，4℃靜置30 min，離心后提取上清，BCA分析法檢測蛋白濃度。采用SDS-PAGE 凝膠電泳（上樣蛋白量為50 μg），轉(zhuǎn)膜后將PVDF 膜置于含5% 脫脂奶粉的TBST溶液封閉2h，分 別 加 入Calpain-1、NLRP3、Caspase-1、ASC、Caspase-3、Bax、Bcl-2和β-actin 抗體（1∶1 000），4℃孵育過夜，TBST洗膜3次（每次15 min）后加入二抗，室溫孵育1 h，TBST 洗膜3次（每次15 min），ECL 顯色液顯影，分析蛋白條帶灰度值計算目的蛋白表達水平。以目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參β-actin 條帶灰度值比值表示目的蛋白表達水平。

1.9 各組大鼠肺組織中Calpain 活性的檢測按照Calpain 活性檢測試劑盒中說明書中的相應(yīng)步驟操作上樣，水浴鍋37℃恒溫孵育1h后，在400 nm/505 nm 的激發(fā)波長條件下檢測Calpain 的熒光強度。Calpain 活性=測試組Calpain 的熒光強度/陰性對照組Calpain 的熒光強度。

1.10 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。各組小鼠RVSP 和RVHI，血清IL-1β和IL-18 水平，肺小動脈的WT% 和WA%，肺組織中Bcl-2、Bax、Caspase-3、NLRP3、ASC、Caspase-1 和Calpain-1 蛋白表達水平以及Calpain 活性均符合正態(tài)分布，以±s 表示，多組間樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠一般狀況腹腔注射MCT 后第15天，PAH組、低和高劑量APS組、Calpain-1 抑制劑組及NLRP3 抑制劑組大鼠逐漸出現(xiàn)明顯的呼吸困難，毛發(fā)粗糙，活動減少，體質(zhì)量增加緩慢，癥狀逐漸加重，在注射MCT 后28 d 時造模成功。對照組大鼠情況正常，全程無死亡，其余各組均出現(xiàn)死亡大鼠，PAH組大鼠在注射MCT 后第17天出現(xiàn)死亡，共死亡4只大鼠；高劑量APS組大鼠于注射MCT 后第20天出現(xiàn)死亡，共死亡2只大鼠；低劑量APS組大鼠于注射MCT 后第18天出現(xiàn)死亡，共死亡3只大鼠；Calpain-1 抑制劑組大鼠于注射MCT 后第19天出現(xiàn)死亡，共死亡2只大鼠；NLRP3 抑制劑組大鼠于注射MCT 后第18天出現(xiàn)死亡，共死亡3只大鼠。解剖死亡大鼠發(fā)現(xiàn)其胸腔有大量積液，肺組織呈淤血狀。

2.2 各組大鼠RVSP 和RVHI與對照組比較，PAH組大鼠RVSP 和RVHI 明顯升高（P＜0.05）；與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠RVSP 和RVHI 明顯降低（P＜0.05），相關(guān)癥狀得到改善。見表1。

表1 各組大鼠RVSP 和RVHITab.1 RVSP and RVHI of rats in various groups（±s）

表1 各組大鼠RVSP 和RVHITab.1 RVSP and RVHI of rats in various groups（±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH Calpain-1 inhibitor NLRP3 inhibitor APS Low dose High dose n 6 7 7 7 7 8 RVSP（P/mmHg）13.1±0.55 28.9±1.35*20.2±0.37△18.3±1.02△21.2±0.15△17.9±0.75△RVHI 0.21±0.02 0.53±0.03*0.38±0.01△0.31±0.02△0.41±0.01△0.32±0.02△

2.3 各組大鼠肺動脈血管病理形態(tài)表現(xiàn)和肺小動脈的WT%及WA%與對照組比較，PAH組大鼠肺組織小動脈管壁增厚明顯，管腔面積小，血管平滑肌細胞增生明顯，內(nèi)皮細胞壞死、脫落，肺血管及其周圍肺組織可見明顯的炎性細胞浸潤；與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠肺小動脈周圍的炎性細胞浸潤程度降低，血管壁增生程度也有所降低，而高劑量APS組大鼠減輕肺小動脈增厚更為明顯。見圖1。與對照組比較，PAH組大鼠WT% 和WA%明顯升高（P＜0.05）；與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠WT%和WA%明顯降低（P＜0.05）。見表2。

圖1 各組大鼠肺動脈血管病理形態(tài)表現(xiàn)（HE，×200）Fig.1 Pathomorphology of pulmonary artery of rats in various groups（HE，×200）

表2 各組大鼠肺小動脈WT%和WA%Tab.2 WT% and WA% of pulmonary artery of rats in various groups (n=6，±s，η/%）

表2 各組大鼠肺小動脈WT%和WA%Tab.2 WT% and WA% of pulmonary artery of rats in various groups (n=6，±s，η/%）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH Calpain-1 inhibitor NLRP3 inhibitor APS Low dose High dose WT%18.32±1.56 55.15±2.23*36.34±2.41△25.45±2.65△34.98±2.12△26.96±2.24△WA%22.45±1.67 60.45±3.32*41.34±2.34△28.46±2.56△42.78±2.78△33.12±1.23△

2.4 各組大鼠肺組織中Bcl-2、Bax 和Caspase-3 蛋白表達水平與對照組比較，PAH組大鼠肺組織中Bax 和Caspase-3 蛋白表達水平明顯升高，Bcl-2蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05）；與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠肺組織中Bax 和Caspase-3蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05），Bcl-2 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）。見圖2 和表3。

表3 各組大鼠肺組織中Bax、Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表達水平Tab.3 Expression levels of Bax, Bcl-2, and Caspase-3 proteins in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

表3 各組大鼠肺組織中Bax、Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表達水平Tab.3 Expression levels of Bax, Bcl-2, and Caspase-3 proteins in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH Calpain-1 inhibitor NLRP3inhibitor APS Low dose High dose Bcl-2 0.78±0.05 0.37±0.03*0.57±0.04△0.62±0.03△0.63±0.03△0.71±0.05△Bax 0.38±0.04 0.84±0.05*0.67±0.04△0.58±0.03△0.62±0.05△0.54±0.04△Caspase-3 0.31±0.06 0.88±0.08*0.53±0.05△0.44±0.04△0.58±0.03△0.49±0.03△

圖2 各組大鼠肺組織中Bax、Bcl-2 和Caspase-3 蛋白表達電泳圖Fig.2 Electrophoregram of expressions of Bax,Bcl-2，and Caspase-3 proteins in lung tissue of rats in various groups

2.5 各組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1蛋白表達水平與對照組比較，PAH組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達水平明顯升高（P＜0.05）；與PAH組比較，低和高劑量APS組、Calpain-1 抑制劑組和NLRP3 抑制劑組大鼠肺組織中NLRP3、Caspase-1 及ASC 蛋白表達水平明顯降低（P＜0.05），高劑量APS組大鼠肺組織中NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表達水平降低更為顯著（P＜0.05）。見圖3 和表4。

表4 各組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達水平Tab.4 Expression levels of NLRP3, ASC, and Caspase-1 proteins in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

表4 各組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達水平Tab.4 Expression levels of NLRP3, ASC, and Caspase-1 proteins in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH Calpain-1 inhibitor NLRP3 inhibitor APS Low dose High dose NLRP3 0.39±0.05 0.82±0.06*0.59±0.06△0.48±0.04△0.58±0.05△0.53±0.02△ASC 0.31±0.04 0.87±0.04*0.54±0.04△0.43±0.02△0.68±0.05△0.61±0.02△Caspase-1 0.39±0.04 0.92±0.06*0.62±0.06△0.48±0.03△0.63±0.03△0.44±0.04△

圖3 各組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達電泳圖Fig.3 Electrophoregram of expressions of NLRP3,ASC, and Caspase-1 proteins in lung tissue of rats in various groups

2.6 各組大鼠血清IL-1β 和IL-18 水平與對照組比較，PAH組大鼠血清IL-1β和IL-18水平升高（P＜0.05），表明炎性細胞因子增加；與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠血清中IL-1β 和IL-18水平降低（P＜0.05），高劑量APS組IL-1β、IL-18 水平降低更為明顯（P＜0.05）。見表5。

表5 各組大鼠血清IL-1β 和IL-18 水平Tab.5 Levels of IL-1β and IL-18 in serum of rats in various groups [n=6，±s，ρβ/（μg·L－1）］

表5 各組大鼠血清IL-1β 和IL-18 水平Tab.5 Levels of IL-1β and IL-18 in serum of rats in various groups [n=6，±s，ρβ/（μg·L－1）］

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH Calpain-1 inhibitor NLRP3 inhibitor APS Low dose High dose IL-1β 48.04±2.53 138.34±5.32*95.89±6.67△72.47±5.65△99.82±5.34△75.28±4.56△IL-18 16.89±2.13 96.39±3.78*69.23±3.19△55.81±3.71△68.49±3.32△52.78±2.12△

2.7 各組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平和Calpain 活性免疫組織化學(xué)檢測，與對照組比較，PAH組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達量增加；與PAH組比較，低和高劑量APS組及Calpain-1 抑制劑組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達量降低。見圖4。與對照組比較，PAH組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平升高，Calpain 活性升高（P＜0.05）；與PAH組比較，NLRP3 抑制劑組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），說明該抑制劑對Calpain-1 蛋白表達無作用；低和高劑量APS組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平降低（P＜0.05），Calpain活性降低（P＜0.05），高劑量APS組降低更明顯。見圖5、表6 和圖6。

圖6 各組大鼠肺組織中Calpain 活性Fig.6 Calpain activities in lung tissue of rats in various groups

表6 各組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平Tab.6 Expression levels of Calpain-1 protein in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

表6 各組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平Tab.6 Expression levels of Calpain-1 protein in lung tissue of rats in various groups (n=6，±s）

*P＜0.05 compared with control group；△P＜0.05 compared with PAH group.

Group Control PAH NLRP3 inhibitor Calpain-1 inhibitor APS Low dose High dose Calpain-1 protein 0.29±0.08 0.74±0.04*0.69±0.06 0.42±0.11△0.48±0.07△0.38±0.05△

圖5 各組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達電泳圖Fig.5 Electrophoregram of expressions of Calpain-1 protein in lung tissue of rats in various groups

3 討 論

PAH 是一種復(fù)雜的進行性疾病，由多種遺傳和致病原因引起，其增加肺血管阻力和右心室后負荷，從而導(dǎo)致右心室功能障礙和衰竭［2］。PAH 患者血管系統(tǒng)重塑的特征包括彈性近端肺動脈僵硬增加、肌肉動脈內(nèi)膜和（或）內(nèi)側(cè)層增厚和血管閉塞性病變的發(fā)展［1，14］。MCT 一直被廣泛應(yīng)用于PAH大鼠的動物模型制備，MCT 是一種大環(huán)吡咯烷核生物堿，該生物堿被吸收至肝臟中通過細胞色素P-450代謝轉(zhuǎn)化為MCT 吡咯入血，其破壞內(nèi)皮細胞的細胞內(nèi)膜和膜蛋白，使促進血管舒張的一氧化氮合成減少，導(dǎo)致內(nèi)皮屏障紊亂，加速了免疫細胞的聚集，加快了血管中的促炎反應(yīng)［15-16］。本研究結(jié)果顯示：與PAH組比較，低和高劑量APS組大鼠RVSP、RVHI、WA%及WT%降低，低和高劑量APS組大鼠肺組織中炎性細胞浸潤減少，肺動脈血管阻塞和增厚情況改善，說明APS 可以改善肺動脈增厚和阻塞相關(guān)指標(biāo)。

發(fā)生PAH 時，NLRP3 炎癥小體活化，并促使pro-Caspase-1 活化為Caspase-1，而Caspase-1 促進IL-1β 和IL-18 的表達水平升高，加快炎癥反應(yīng)，同時Caspase-1 的表達上調(diào)觸發(fā)細胞凋亡，進一步導(dǎo)致 血管內(nèi)皮功能紊亂［17-18］。本研究結(jié)果 顯示： 與PAH組比較，NLRP3 抑制劑組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達水平降低且血清IL-1β 和IL-18 水平降低，低和高劑量APS組大鼠肺組織中NLRP3、ASC 和Caspase-1 蛋白表達水平降低且血清IL-1β 和IL-18 水平降低。上述結(jié)果提示：APS 有助于改善PAH 大鼠肺動脈血管的炎癥。與PAH組比較，APS組大鼠肺組織中Caspase-3 和Bax 蛋白表達水平降低，Bcl-2 蛋白表達水平升高，提示APS 對NLRP3 炎癥小體誘導(dǎo)的細胞凋亡有一定的改善作用。

Calpain-1 是鈣離子（Ca2+）活化的半胱氨酸蛋白酶家族中的一員，位于細胞質(zhì)和線粒體中，參與多種細胞過程，包括細胞骨架/膜附著的重塑，不同的信號傳導(dǎo)途徑和細胞凋亡，以及心肌缺血和冠狀動脈粥樣硬化等各種心腦血管疾?。?9-21］。本研究結(jié)果顯示：由MCT 誘導(dǎo)的PAH 與NLRP3 炎癥小體和Calpain-1 的表達水平升高有關(guān)。本研究結(jié)果顯示：與PAH組比較，各劑量APS組大鼠肺組織中Calpain-1 蛋白表達水平降低和Calpain 活性降低，從而使肺動脈中的血管增厚程度和阻塞程度有所改善。有研究［22］已經(jīng)證實Calpain-1 蛋白表達與血清IL-18 和IL-1β 水平呈正相關(guān)關(guān)系。本研究結(jié)果顯示：抑制Calpain-1 表達的同時，NLRP3 炎癥小體的表達也減少，肺組織中相關(guān)炎癥因子表達水平降低，這說明Calpain-1/NLRP3 信號通路參與了MCT 誘導(dǎo)PAH 產(chǎn)生炎癥因子的調(diào)節(jié)。

綜上所述，APS 可減輕PAH 大鼠的肺動脈血管阻塞程度，其作用機制與抑制Calpain-1 介導(dǎo)的NLRP3 活化誘導(dǎo)的炎癥有關(guān)。Calpain-1 可能是APS 改善PAH 病情進展?jié)撛诘男碌淖饔冒悬c。