QuEChERS 結(jié)合UPLC-MS/MS 檢測(cè)血液中3 種色胺類新精神活性物質(zhì)

侯偉 ，王燕燕，張瑛，張蕾萍，辛國(guó)斌，覃仕揚(yáng)，王繼芬

1.法庭毒物分析公安部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京市公安局，北京 100192；2.中國(guó)人民公安大學(xué)偵查學(xué)院，北京 100038；3.公安部物證鑒定中心，北京 100038

色胺類新精神活性物質(zhì)是一類具有色胺結(jié)構(gòu)框架并且存在致幻作用的化合物。色胺類物質(zhì)具有吲哚環(huán)結(jié)構(gòu)，是由苯環(huán)和吡咯環(huán)組成的融合雙環(huán)，通過側(cè)鏈上的乙基與氨基相連[1]，區(qū)別在于不同物質(zhì)在苯環(huán)、側(cè)鏈以及氮上連接有不同的取代基（圖1）。

圖1 色胺類物質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)Fig.1 Basic structure of tryptamines

色胺是一類一元胺生物堿，即吲哚烷胺類物質(zhì)，可以由色氨酸脫羧形成。色胺類新精神活性物質(zhì)屬于致幻劑，能夠影響中樞系統(tǒng)，改變感知能力。人攝入后會(huì)產(chǎn)生身心上的欣快感，出現(xiàn)錯(cuò)覺和幻覺，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致感知覺紊亂，甚至精神錯(cuò)亂。目前已有服用色胺類物質(zhì)中毒或致死的案例報(bào)道[2-5]。由于色胺類物質(zhì)具有毒性延遲性的特點(diǎn)，不同色胺類衍生物的致幻作用和濫用風(fēng)險(xiǎn)因攝入方式、劑量以及重復(fù)攝入量的不同而有所差別。對(duì)于該類物質(zhì)，國(guó)際上尚未有公約實(shí)施管制，其中一部分物質(zhì)在中國(guó)、英國(guó)和芬蘭等國(guó)被列管，而在很多其他國(guó)家仍未被管制。近幾年，該類物質(zhì)在我國(guó)非法制造、販賣及濫用形勢(shì)日益嚴(yán)峻，嚴(yán)重威脅到我國(guó)的國(guó)家安全。目前報(bào)道的色胺類新精神活性物質(zhì)有40 余種，我國(guó)列入管制的該類物質(zhì)共11 種，其中濫用較為嚴(yán)重的主要有N，N-二烯丙基-5-甲氧基色胺（5-MeO-DALT）、N-甲基-N-異丙基-5-甲氧基色胺（5-MeO-MiPT）、N，N-二異丙基-5-甲氧基色胺（5-MeO-DiPT）等[6]。因此，本研究選擇上述3種色胺類物質(zhì)作為研究對(duì)象。

目前，國(guó)外對(duì)色胺類物質(zhì)的檢驗(yàn)已有一定研究[7-9]，涉及的分析方法主要是氣相色譜-質(zhì)譜法和液相色譜-質(zhì)譜法。國(guó)內(nèi)對(duì)于色胺類新精神活性物質(zhì)的研究相對(duì)較少，施妍等[10]使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（ultra-high performance liquid chromatographytandem mass spectrometry，UPLC-MS/MS）對(duì)人體頭發(fā)中5-MeO-DiPT 等12 種新型色胺類致幻劑進(jìn)行了檢驗(yàn)，該方法具有回收率高、選擇性好等特點(diǎn)；王柔嘉等[1]綜述了色胺類新精神活性物質(zhì)的體內(nèi)代謝過程和檢測(cè)方法等；黑海等[6]對(duì)色胺類新精神活性物質(zhì)的藥理毒理學(xué)及代謝過程展開了介紹。

UPLC-MS/MS 因其準(zhǔn)確、快速、檢測(cè)范圍廣等優(yōu)勢(shì)而逐漸成為法庭科學(xué)領(lǐng)域的一類重要檢測(cè)方法。該方法具有良好的混合物分離效果，同時(shí)由于其較高的靈敏度，能夠滿足生物檢材內(nèi)痕量待測(cè)目標(biāo)物的檢測(cè)要求[11-13]。目前司法鑒定領(lǐng)域?qū)τ谘汉湍蛞旱壬餀z材的常見前處理方法主要有液液萃取法、固相萃取法和沉淀蛋白法等[1]，如MEYER 等[14]采用液液萃取法對(duì)血漿中的37 種色胺類物質(zhì)進(jìn)行了定性定量分析，各物質(zhì)的檢出限（limit of detection，LOD）在1～100 ng/mL。但該方法所需時(shí)間較長(zhǎng)，操作較為繁瑣（需對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行濃縮富集），且有機(jī)試劑使用量較大，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的健康有一定損害。TANG 等[15]采用固相萃取結(jié)合UPLC-MS/MS 法檢測(cè)了血漿中的色胺類物質(zhì)，該方法具有較高的回收率，但不足之處在于操作過程較為復(fù)雜，實(shí)驗(yàn)所需成本較高。TURCANT等[16]報(bào)道了采用沉淀蛋白法對(duì)血漿和尿液中的α-甲基色胺（α-methyltryptamine，AMT）和N，N-二甲基-5-甲氧基色胺（5-MeO-DMT）進(jìn)行檢測(cè)的相關(guān)研究，與前兩種方法相比，沉淀蛋白法的回收率相對(duì)偏低，基質(zhì)效應(yīng)較高。

為了追求更加簡(jiǎn)單、快速且高效的樣品前處理方法，近年來研究人員逐步將QuEChERS 方法應(yīng)用于生物檢材的檢驗(yàn)研究。作為一種快速前處理技術(shù)，QuEChERS具有成本低、操作簡(jiǎn)單和安全性高等特點(diǎn)，同時(shí)由于使用了鹽析劑和凈化劑，復(fù)雜基質(zhì)的影響被進(jìn)一步降低，待測(cè)目標(biāo)物的提取效率得到了有效提高，其適用范圍也已由最初的農(nóng)藥殘留檢測(cè)逐步擴(kuò)展到各類復(fù)雜基質(zhì)中目標(biāo)物質(zhì)的檢測(cè)，具有良好的提取和凈化效果。如劉洋等[17]使用QuEChERS結(jié)合UPLCMS/MS 法檢測(cè)了血液中苯丙胺類及其相關(guān)的9 種物質(zhì)，優(yōu)化了前處理?xiàng)l件，能夠?qū)崿F(xiàn)各種物質(zhì)色譜峰的良好分離；呂昱帆等[18]使用QuEChERS 結(jié)合UPLCMS/MS 法檢驗(yàn)了腐敗血中4-甲基甲卡西酮和甲卡西酮，回收率較高。這些研究證明了QuEChERS 對(duì)于生物檢材的適用性。

基于此，本研究采用QuEChERS 結(jié)合UPLC-MS/MS 法建立人體血液中3 種色胺類新精神活性物質(zhì)的快速檢測(cè)方法，以期為該類物質(zhì)的檢驗(yàn)提供借鑒，為公安機(jī)關(guān)處理相關(guān)案件提供一定的參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

儀器：Nexera UHPLC LC-30A 超高效液相色譜儀（日本島津公司），QTRAP? 4000 LC-MS/MS 系統(tǒng)（美國(guó)AB Sciex 公司），3-30K 高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)Sigma 公司），PL203 電子天平（瑞士Mettler Toledo 公司），東京理化CM-1000 高速振蕩器（日本東京理化器械株式會(huì)社），Talboys 旋渦混合器（美國(guó)Troemner公司）。

試劑：甲醇、乙腈、甲酸（色譜純，美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司），無水氯化鈉、無水硫酸鈉（分析純，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)有限公司），C18吸附劑（美國(guó)Agi?lent公司）。

標(biāo)準(zhǔn)品：5-MeO-DALT（純度≥98%）購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司，5-MeO-MiPT（純度≥98%）、5-MeO-DiPT（純度≥98%）購(gòu)自美國(guó)Cayman公司，3種標(biāo)準(zhǔn)品均為粉末狀。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：分別準(zhǔn)確稱取適量5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并配制成1 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-18 ℃下低溫保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)溶液：借助移液槍分別吸取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇稀釋并配制成1 μg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于-18 ℃下低溫保存。

1.3 樣品前處理

取0.5 mL 血液樣品置于15 mL 離心管中，加入1 mL 乙腈渦旋振蕩提取10 min，加入20 mg 氯化鈉和30 mg 硫酸鈉渦旋混勻30 s，使用高速冷凍離心機(jī)以18 000×g離心10 min，取上清液1 mL 置于離心管中，加入10 mg C18吸附劑進(jìn)行凈化，振蕩15 min 后以18 000×g離心10 min，取上清液過0.22 μm 有機(jī)膜后進(jìn)樣檢測(cè)。

1.4 色譜條件

色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm；美國(guó)Waters 公司）。流動(dòng)相A 為含0.1%甲酸的10 mmol/L 甲酸銨水溶液，流動(dòng)相B 為甲醇，梯度洗脫共7 min。洗脫程序按以下方式進(jìn)行：0～1.0 min，5% B；1.0～1.1 min，5%～20% B；1.1～3.0 min，20%～70% B；3.0～4.0 min，70%～95% B；4.0～6.0 min，95% B；6.0～6.1 min，95%～5% B；6.1～7.0 min，5% B。流速0.3 mL/min，柱溫35 ℃，進(jìn)樣量5 μL。

1.5 質(zhì)譜條件

采用電噴霧離子源（electrospray ionization，ESI）正離子模式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）；離子源溫度550 ℃，噴霧電壓5 000 V，氣簾氣壓力（CUR）20 psi，霧化氣壓力（GS1）40 psi，輔助加熱氣壓力（GS2）50 psi。

1.6 方法學(xué)驗(yàn)證

對(duì)于所建方法的特異性、線性范圍、LOD、定量限（limit of quantitation，LOQ）、回收率、基質(zhì)效應(yīng)及精密度進(jìn)行考察驗(yàn)證。

特異性：取3 份來自不同個(gè)體的空白血液按照1.3 節(jié)方法進(jìn)行前處理，在1.4 節(jié)色譜條件和1.5 節(jié)質(zhì)譜條件下進(jìn)行分析，另取空白血液添加3 種色胺類物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，按上述方法處理后進(jìn)樣分析，以考察空白血液基質(zhì)中內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

線性范圍、LOD、LOQ：取適量的5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用甲醇逐級(jí)稀釋至500、100、50、10 和5 ng/mL，分別向0.5 mL 空白血液中加入適量上述不同質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，制備成含3 種色胺類物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為100、50、20、10、5、2、1、0.5、0.2 和0.1 ng/mL 的血液樣品。采用上述優(yōu)化的條件進(jìn)行前處理，按照質(zhì)量濃度從低到高的順序排列進(jìn)樣，每個(gè)質(zhì)量濃度平行進(jìn)樣3 次，取平均值作為最終結(jié)果。以3 種色胺類物質(zhì)的色譜峰面積（y）對(duì)其標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，并考察血液中3 種色胺類物質(zhì)質(zhì)量濃度為0.1、0.2 和0.5 ng/mL 時(shí)的信噪比（S/N），以S/N≥3 為L(zhǎng)OD、S/N≥10為L(zhǎng)OQ[19]。

回收率、基質(zhì)效應(yīng)和精密度：分別配制0.5、5、50和500 ng/mL 4個(gè)質(zhì)量濃度的5-MeO-DALT、5-MeOMiPT 和5-MeO-DiPT 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。首先在不同離心管中分別加入5、50 和500 ng/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備3 組并用氮?dú)獯蹈?，再分別加入0.5 mL 空白血液，制備成含3 種色胺類物質(zhì)質(zhì)量濃度分別為1、10 和100 ng/mL 的血液樣品，按照1.3 節(jié)方法進(jìn)行前處理。取9 個(gè)離心管分別加入0.5 mL 空白血液，再加入0.9 mL 乙腈并按照1.3 節(jié)方法進(jìn)行前處理，然后向凈化后的上清液中分別加入5、50 和500 ng/mL 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液100 μL，每個(gè)質(zhì)量濃度平行制備3 組樣品，取上清液過0.22 μm 有機(jī)膜后置于進(jìn)樣瓶中待檢。將以上兩批樣品連同0.5、5 和50 ng/mL 標(biāo)準(zhǔn)溶液樣品分別進(jìn)樣檢測(cè)，所得結(jié)果按照以下公式進(jìn)行回收率和基質(zhì)效應(yīng)的計(jì)算。

其中A表示空白血液中加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后按照1.3 節(jié)方法處理檢測(cè)后得到的峰面積，B表示空白血液進(jìn)行前處理后加入混合標(biāo)準(zhǔn)溶液提取進(jìn)樣檢測(cè)得到的峰面積，C表示3 種色胺類物質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液檢測(cè)得到的峰面積。

按照上述方法制備相同質(zhì)量濃度梯度的樣品并進(jìn)行前處理，在1 d 內(nèi)早、中、晚3 個(gè)不同的時(shí)間，使用上述1.4節(jié)色譜條件和1.5節(jié)質(zhì)譜條件進(jìn)行檢測(cè)，通過計(jì)算5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 的峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）得到日內(nèi)精密度；按上述同樣的方法，連續(xù)3 d測(cè)得5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 的峰面積，并計(jì)算其RSD得到日間精密度。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 在化學(xué)結(jié)構(gòu)上具有高度的相似性（圖2），并且含有相同的部分基團(tuán)，因此在裂解過程中3 種色胺類物質(zhì)可產(chǎn)生相同的特征離子。由圖2 可知，3 種物質(zhì)均在紅線標(biāo)記的碳氮單鍵處發(fā)生斷裂，斷裂處左邊部分含有吲哚環(huán)結(jié)構(gòu)的基團(tuán)即為3 種物質(zhì)共有的特征離子，其質(zhì)荷比（m/z）為174。另外，3 種物質(zhì)在裂解過程中還會(huì)產(chǎn)生各自的特征離子作為定量離子（圖中藍(lán)色虛線右邊部分即為各自的定量離子）。

圖2 3種色胺類物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.2 Chemical structures of 3 types of tryptamines

本實(shí)驗(yàn)對(duì)該儀器條件下3 種色胺類物質(zhì)特征碎片離子的準(zhǔn)確值進(jìn)行了測(cè)定和考察，同時(shí)優(yōu)化了各離子對(duì)的去簇電壓和碰撞能量。以3 種物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（20 ng/mL）為樣本，采用針泵進(jìn)樣法進(jìn)行質(zhì)譜條件的優(yōu)化，得到了5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT的質(zhì)譜分析參數(shù)（表1）。

表1 5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT和5-MeO-DiPT的質(zhì)譜分析參數(shù)Tab.1 Mass spectrographic analysis parameters of 5-MeO-DALT，5-MeO-MiPT and 5-MeO-DiPT

2.2 色譜條件的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)比較了不同流動(dòng)相對(duì)3 種色胺類物質(zhì)的分離效果。流動(dòng)相A 有0.1%甲酸水溶液、含0.1%甲酸和5%乙腈的20 mmol/L 乙酸銨水溶液以及含0.1%甲酸的10 mmol/L甲酸銨水溶液3種，流動(dòng)相B有乙腈和甲醇2種。結(jié)果顯示：流動(dòng)相A使用0.1%甲酸水溶液時(shí)，流動(dòng)相B無論選擇哪種，3種色胺類物質(zhì)的峰形均較差，雙峰現(xiàn)象較為明顯；流動(dòng)相A 使用含0.1%甲酸和5%乙腈的20 mmol/L 乙酸銨水溶液，B 相為甲醇或乙腈時(shí)，5-MeO-MiPT的峰形較差，且3種色胺類物質(zhì)的分離效果不好；流動(dòng)相A 使用含0.1%甲酸的10 mmol/L 甲酸銨水溶液，流動(dòng)相B 為甲醇時(shí)，3 種色胺類物質(zhì)的峰形最好。最終，本實(shí)驗(yàn)選擇含0.1%甲酸的10 mmol/L 甲酸銨水溶液作為流動(dòng)相A，甲醇作為流動(dòng)相B。5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeODiPT在質(zhì)量濃度為2 ng/mL時(shí)的色譜圖見圖3。

圖3 5-MeO-DALT、5-MeO-DiPT和5-MeO-MⅠPT的色譜圖（質(zhì)量濃度2 ng/mL）Fig.3 Chromatogram of 5-MeO-DALT，5-MeO-DiPT and 5-MeO-MⅠPT（mass concentration of 2 ng/mL）

2.3 前處理方法的優(yōu)化

2.3.1 萃取劑種類的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察了甲醇、乙腈、V甲醇∶V乙腈=1∶1、V甲醇∶V乙腈=1∶2、V甲醇∶V乙腈=1∶3、V甲醇∶V乙腈∶V水=1∶1∶1 6 種萃取劑對(duì)血液中3 種色胺類物質(zhì)的提取效果，結(jié)果見圖4。由圖4可知，當(dāng)乙腈作為萃取劑時(shí)，3種色胺類物質(zhì)的提取效果最好，其次為V甲醇∶V乙腈∶V水=1∶1∶1，而當(dāng)甲醇以及甲醇與乙腈的混合溶液作為萃取劑時(shí)，3 種色胺類物質(zhì)的提取效果較差，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇乙腈作為最優(yōu)萃取劑。

圖4 不同萃取劑對(duì)3種色胺類物質(zhì)的提取效果Fig.4 Extracting effects of 3 types of tryptamines based on different extractants

2.3.2 鹽析劑的優(yōu)化

本實(shí)驗(yàn)考察了氯化鈉、硫酸鈉和硫酸鎂3 種鹽析劑對(duì)血液中3 種色胺類物質(zhì)的提取效果，采用控制變量法分別對(duì)鹽析劑的種類及用量進(jìn)行了考察和優(yōu)化。稱取氯化鈉、硫酸鈉和硫酸鎂各20 mg 分別加入盛有0.5 mL血液樣品的離心管中，每個(gè)樣品平行制備3份，按1.3節(jié)方法進(jìn)行前處理并進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果見圖5。

圖5 不同鹽析劑對(duì)3種色胺類物質(zhì)的提取效果Fig.5 Extracting effects of 3 types of tryptamines based on different salting-out agents

由圖5 可知，鹽析劑的種類對(duì)3 種色胺類物質(zhì)的提取效果具有一定的影響，其中氯化鈉的效果最好，硫酸鈉次之，硫酸鎂相對(duì)稍差。因此，本實(shí)驗(yàn)擬選用氯化鈉和硫酸鈉兩種物質(zhì)作為前處理過程中的鹽析劑，同時(shí)考察了氯化鈉和硫酸鈉這兩種鹽析劑的用量對(duì)3 種色胺類物質(zhì)提取效果的影響。用電子天平分別稱取10、20、30、40、50 mg 的兩種鹽加入血液中進(jìn)行后續(xù)處理并進(jìn)樣檢測(cè)，結(jié)果表明，當(dāng)氯化鈉和硫酸鈉的用量分別在20 mg 和30 mg 時(shí)3 種色胺類物質(zhì)的提取效果最好，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇20 mg 氯化鈉和30 mg硫酸鈉作為前處理過程中的最優(yōu)鹽析劑。

2.3.3 吸附劑的優(yōu)化

血液作為一種基質(zhì)復(fù)雜的檢材，其所含雜質(zhì)會(huì)對(duì)目標(biāo)物的提取和檢測(cè)帶來一定的影響，因此在前處理過程中需加入一定量的吸附劑對(duì)血液檢材中的雜質(zhì)進(jìn)行吸附凈化，以排除相關(guān)干擾，提高目標(biāo)物質(zhì)的回收率。C18作為一種常見的吸附劑，疏水作用較強(qiáng)，對(duì)非極性的組分有吸附作用，能夠有效吸附血液中的脂肪類雜質(zhì)[20]。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇C18吸附劑，同時(shí)對(duì)C18吸附劑的用量進(jìn)行了考察和優(yōu)化，相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖6。

由圖6 可知，C18吸附劑的用量對(duì)于5-MeO-DiPT提取效果影響較大，對(duì)5-MeO-MiPT 和5-MeO-DALT提取效果影響相對(duì)較小。隨著C18吸附劑用量的增加，3 種色胺類物質(zhì)的提取率基本呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，并在10 mg 處達(dá)到最高。這可能是由于過量的吸附劑在去除雜質(zhì)的同時(shí)也對(duì)目標(biāo)物質(zhì)產(chǎn)生了一定量的吸附，造成了提取率的下降，因此，本實(shí)驗(yàn)選擇10 mg作為最優(yōu)吸附劑用量。

圖6 不同用量吸附劑對(duì)3種色胺類物質(zhì)的提取效果Fig.6 Extracting effects of 3 types of tryptamines based on different content of adsorbent

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果

2.4.1 特異性

空白血液和空白血液加標(biāo)樣品按照1.3節(jié)方法處理進(jìn)樣分析后得到各物質(zhì)的色譜圖見圖7。結(jié)果顯示，血液中內(nèi)源性物質(zhì)不會(huì)對(duì)3 種色胺類物質(zhì)產(chǎn)生干擾，該方法對(duì)3種色胺類物質(zhì)的檢驗(yàn)具有較高的特異性。

圖7 3種色胺類物質(zhì)的MRM色譜圖Fig.7 MRM chromatograms of 3 types of tryptamines

2.4.2 線性范圍、LOD、LOQ

3 種色胺類物質(zhì)的線性方程、相關(guān)系數(shù)、LOD 和LOQ 如表2 所示。結(jié)果表明，3 種色胺類物質(zhì)在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)（r）>0.999 0，該方法的靈敏度和線性范圍能夠滿足法庭科學(xué)毒物檢驗(yàn)的需要。

表2 3種色胺類物質(zhì)的線性方程、相關(guān)系數(shù)、LOD及LOQTab.2 The linear equation，correlation coefficient，LOD and LOQ of 3 types of tryptamines

2.4.3 回收率、基質(zhì)效應(yīng)和精密度

該方法下3 種色胺類物質(zhì)的回收率和基質(zhì)效應(yīng)見表3。由表3可知，3種色胺類物質(zhì)在上述前處理方法下的回收率在84.86%～94.57%，基質(zhì)效應(yīng)在87.50%～99.60%，證明在該實(shí)驗(yàn)條件下回收率較高且基質(zhì)對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響不大，同時(shí)日內(nèi)精密度和日間精密度較好，儀器基本處于較為穩(wěn)定的狀態(tài)，能夠滿足檢驗(yàn)要求。

表3 5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT和5-MeO-DiPT的回收率、基質(zhì)效應(yīng)和精密度Tab.3 The recovery rate，matrix effect and precision of 5-MeO-DALT，5-MeO-MiPT and 5-MeO-DiPT

由以上方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果可知，QuEChERS 前處理方法在血液中色胺類物質(zhì)的檢驗(yàn)方面具有良好的效果。3 種物質(zhì)的LOD 為0.1～0.2 ng/mL，基質(zhì)對(duì)于目標(biāo)物檢測(cè)的影響較小，回收率均在80%以上。與液液萃取、固相萃取和沉淀蛋白法相比，QuEChERS 更加方便快捷，同時(shí)小劑量溶劑的使用在節(jié)約成本的同時(shí)也最大程度地降低了對(duì)人體的危害。另外，QuECh?ERS方法在前處理過程中引入了鹽析劑和吸附劑，其中鹽析劑的作用是去除有機(jī)相中的部分水相，促使目標(biāo)物更多地轉(zhuǎn)移至萃取劑中，而吸附劑的作用是吸附基質(zhì)中的脂質(zhì)和糖類等干擾物質(zhì)，提高目標(biāo)物的檢測(cè)靈敏度[21]，這兩者的存在使得QuEChERS 與其他前處理方法相比更加具有回收率和基質(zhì)效應(yīng)等方面的優(yōu)勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)了這一結(jié)論。

2.5 案例應(yīng)用

某日，警方在執(zhí)行任務(wù)過程中抓獲一名疑似吸毒男子，經(jīng)詢問得知該男子所使用的是一款名為“犀牛液”的違禁品，其主要成分為5-MeO-DiPT。警方后續(xù)采集了這名男子的血液樣品送至本單位進(jìn)行分析檢驗(yàn)，該血液樣品經(jīng)上述方法處理后得到的結(jié)果如圖8所示。經(jīng)檢驗(yàn)，該涉案男子血液樣品中確實(shí)存在5-MeO-DiPT，質(zhì)量濃度約為1.4 ng/mL，由此可以證明上述建立的人體血液中色胺類新精神活性物質(zhì)的檢驗(yàn)方法能夠應(yīng)用于實(shí)際案件。

圖8 涉案血液樣品經(jīng)本研究方法檢驗(yàn)后的色譜圖Fig.8 Chromatogram of the blood sample involved in the case tested by the method of this study

目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于3 種色胺類物質(zhì)的陽(yáng)性案例報(bào)道相對(duì)較少，GRAFINGER 等[22]對(duì)1 名疑似吸毒男子的血液和尿液進(jìn)行了檢驗(yàn)，共篩查出5 種濫用藥物，其中包括5-MeO-MiPT，其在血液和尿液中的質(zhì)量濃度分別為0.16 和3.38 μg/mL。WILSON 等[4]報(bào)道了1 名23 歲白人男子服用含有5-MeO-DiPT 的膠囊后接受治療和檢測(cè)的案例，在其服藥4 h 內(nèi)取血液和尿液進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)，結(jié)果顯示，5-MeO-DiPT 的質(zhì)量濃度分別為0.14 和1.6 μg/mL。本案例經(jīng)后續(xù)調(diào)查了解到，該吸毒男子從使用藥物到被公安機(jī)關(guān)抓獲時(shí)間間隔較長(zhǎng)，大部分藥物已經(jīng)代謝，因此血液中5-MeO-DiPT的質(zhì)量濃度相對(duì)較低。

2.6 結(jié)論

本研究建立了QuEChERS前處理結(jié)合UPLC-MS/MS檢測(cè)血液中5-MeO-DALT、5-MeO-MiPT 和5-MeO-DiPT 的方法，具有操作簡(jiǎn)單、LOD 低、回收率高等特點(diǎn)。該方法可以實(shí)現(xiàn)血液中3 種色胺類新精神活性物質(zhì)的快速定性定量分析，能夠?yàn)槠渌奉愇镔|(zhì)的檢驗(yàn)以及公安機(jī)關(guān)處理相關(guān)案件提供一定的借鑒與參考。