腎移植患者尿小圓上皮細(xì)胞陽(yáng)性指標(biāo)與BK 病毒尿癥的臨床相關(guān)性

許瀚仁 王繼納 楊 橙 張 潮 戎瑞明 朱同玉 許 明△

（1復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院泌尿外科 上海 200032；2上海市器官移植重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200032）

腎移植術(shù)后BK 病毒（BK virus，BKV）感染導(dǎo)致的BKV 相關(guān)腎?。˙KV nephropathy，BKVAN）已成為移植腎功能丟失的重要原因之一[1］。BKV在人群中普遍易感，可潛伏在泌尿系統(tǒng)（尤其是腎小管）上皮細(xì)胞中。在免疫抑制狀態(tài)，腎移植患者體內(nèi)潛伏的BKV 被激活并進(jìn)入腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)進(jìn)行復(fù)制，大量病毒釋放到尿液中，引起B(yǎng)K 病毒尿癥[2］。BKV 在血液中持續(xù)高載量表達(dá)可進(jìn)一步損傷移植腎組織，導(dǎo)致腎小管萎縮和間質(zhì)纖維化，最終形成BKVAN，而目前臨床上對(duì)于BKVAN 尚無(wú)確切有效的治療手段。

從BK 病毒尿癥到BKVAN 是一個(gè)BKV 感染逐步進(jìn)展的病程，目前臨床上對(duì)BKV 感染進(jìn)行免疫抑制劑減量干預(yù)的時(shí)機(jī)是BKV 血癥或尿液中BKV-DNA 載量持續(xù)升高[3］。研究顯示，BK 病毒尿癥對(duì)BKVAN 的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為27.3%，而B(niǎo)KV 血癥則為54.5%[4］。雖然BK 病毒尿癥對(duì)BKVN 的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較BKV 血癥低，然而卻是BKV 在腎移植患者體內(nèi)開(kāi)始復(fù)制的初始階段，如果能夠在BK 病毒尿癥的階段即予以密切監(jiān)測(cè)甚至及早干預(yù)治療，將有助于控制BKV 感染進(jìn)展到BKVAN。

目前臨床上診斷BK 病毒尿癥主要通過(guò)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）來(lái)檢測(cè)尿液中BKV-DNA 的載量，當(dāng)尿液中BKV-DNA 載量＞107copies/mL 時(shí)診斷為BK 病毒尿癥[5］。然而，目前國(guó)內(nèi)絕大多數(shù)醫(yī)院（包括作者所在的醫(yī)院）在臨床上并未常規(guī)開(kāi)展BKV-DNA PCR 檢測(cè)的項(xiàng)目，通常是器官移植科室的實(shí)驗(yàn)室或委托院外的檢測(cè)公司開(kāi)展此項(xiàng)檢測(cè)業(yè)務(wù)，因而限制了這項(xiàng)檢測(cè)的便利性。因此，如果能夠利用臨床上已經(jīng)普遍開(kāi)展的檢測(cè)方法及指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥，將有助于BK病毒尿癥的早期診斷及病程監(jiān)測(cè)。

腎小管上皮細(xì)胞在BKV 感染時(shí)的壞死和凋亡會(huì)引起炎癥反應(yīng)，損傷周圍的正常腎小管上皮細(xì)胞并導(dǎo)致其脫落，形成臨床尿常規(guī)檢測(cè)報(bào)告中的尿小圓上皮細(xì)胞（small round epithelial cells，SREC）。SREC 細(xì)胞核小呈圓形，核膜厚，胞質(zhì)內(nèi)常見(jiàn)顆粒，與Decoy 細(xì)胞在形態(tài)上有明顯差異[6］。 尿液中SREC 的檢測(cè)方便易行，可以通過(guò)全自動(dòng)尿沉渣分析儀檢測(cè)，目前國(guó)內(nèi)大多數(shù)醫(yī)院已經(jīng)在臨床普遍開(kāi)展，尿常規(guī)的項(xiàng)目中已包含SREC 的指標(biāo)項(xiàng)。臨床使用的尿沉渣分析儀有高度準(zhǔn)確性、便利性，可大量篩查疑似患者的尿液標(biāo)本。正常人的尿液罕見(jiàn)SREC，大量的SREC 常見(jiàn)于急性腎小管壞死和腎小管間質(zhì)炎癥的患者[7］。此外，腎病綜合征、大量蛋白尿、腎移植術(shù)后1 周內(nèi)或移植腎發(fā)生排斥反應(yīng)，均可在患者的尿液標(biāo)本中檢測(cè)到SREC。腎移植術(shù)后1 周內(nèi)，尿中可出現(xiàn)較多的SREC，隨后可逐漸減少而消失。SREC 還常見(jiàn)于女性月經(jīng)或是女性正常脫落細(xì)胞、尿路感染和腎炎腎損傷情況，主要以排除尿路感染的常見(jiàn)因素為主[8］。

本研究擬通過(guò)診斷評(píng)價(jià)方法探索采用尿常規(guī)中的SREC（即脫落的腎小管上皮細(xì)胞）指標(biāo)來(lái)預(yù)測(cè)和輔助診斷腎移植術(shù)后BK 病毒尿癥的可行性和準(zhǔn)確性，為探索采用臨床上已存在的、簡(jiǎn)便易行的方法來(lái)診斷、監(jiān)測(cè)腎移植術(shù)后BK 病毒尿癥提供新的思路。

資料和方法

臨床資料回顧性分析2017年1月—2019年10月在復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院接受腎移植及隨訪的152例患者，隨訪截至2020年10月，患者隨訪時(shí)間最長(zhǎng)為40 個(gè)月，最短為12 個(gè)月，平均隨訪時(shí)間為（18±6）個(gè)月。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）行1 次及以上的尿液樣本BKV-DNA 載量PCR 檢測(cè)；（2）術(shù)后穩(wěn)定長(zhǎng)期門診隨訪、行尿常規(guī)檢測(cè)。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡超過(guò)75歲或小于18歲；（2）移植腎功能喪失或伴有嚴(yán)重并發(fā)癥。本回顧性臨床研究方案經(jīng)復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（編號(hào)：B2019-320），所有受檢者均簽署了知情同意書(shū)。臨床數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)中包含腎移植患者的年齡、受者性別、免疫抑制方案、隨訪時(shí)間、HLA 匹配、血清肌酐、尿白細(xì)胞（urine white blood cells，UWBC）、尿 紅 細(xì) 胞（urine red blood cells，URBC）、SREC 陽(yáng)性指標(biāo)、SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段。本研究中所有腎移植患者術(shù)后均接受鈣調(diào)磷酸酶抑制劑+麥考酚鈉/嗎替麥考酚酯+糖皮質(zhì)激素的三聯(lián)免疫抑制方案。

儀器與試劑UF-1000i 全自動(dòng)尿沉渣分析儀及其配套的試劑和質(zhì)控品均購(gòu)自日本希森美康株式 會(huì) 社；7500 型 定 量PCR 儀（ 美 國(guó)Applied Biosystems 公司）；BKV 核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)?，北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司）；OLYMPUS CKX31 倒置顯微鏡、OLYMPUS FLUOVIEW FV3000 激光共聚焦顯微鏡（日本奧林巴斯株式會(huì)社）；anti-BKV VP1（MAB3204-M02，一抗，亞諾法生技股份有限公司）；重組人細(xì)胞角蛋白18（Cytokeratin 18 antibody，CK18，ab668，一 抗），DyLight 488 Goat Anti-Mouse IgG（H+L）（二抗），山羊抗小鼠IgG H&L（Cy3 ）（二抗，艾博抗上海貿(mào)易有限公司）；DAPI 染色液（上海睿寶和生物科技有限公司）；尿沉渣染色液（S-M 方法，珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。

尿液標(biāo)本收集和實(shí)驗(yàn)室檢查尿液標(biāo)本留取收集依患者隨診時(shí)進(jìn)行?；颊咭浦残g(shù)后1 周、2 周，1、2、3、6、12、18、24 個(gè)月常規(guī)進(jìn)行尿常規(guī)檢測(cè)，以首次BKV-DNA 定量檢測(cè)為觀察期間的開(kāi)始時(shí)間，觀察兩組患者在腎移植術(shù)后常規(guī)隨訪的尿常規(guī)化驗(yàn)單中SREC 陽(yáng)性指標(biāo)，出現(xiàn)SREC 指標(biāo)陽(yáng)性的起始時(shí)間點(diǎn)和結(jié)束時(shí)間點(diǎn)，并計(jì)算出時(shí)間段，將持續(xù)3 周及以上的持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間視為SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段。其中有36 名患者在隨訪期間內(nèi)BKV-DNA 載量＞1.0×107拷貝/mL，即納入BK 病毒尿癥組，101名患者在隨訪期間內(nèi)BKV-DNA 載量＜1.0×107拷貝/mL，則納入非BK 病毒尿癥組。

尿沉渣涂片及S‐M染色留取腎移植術(shù)后BKV 感染患者的晨尿10 mL，1006.3×g離心5 min，取0.1 mL 的尿沉淀成分并均勻涂在防滑玻片，放置到倒置顯微鏡下加入尿沉淀染色液（S-M 染色）后觀察。

尿沉渣免疫熒光染色收集腎移植術(shù)后BKVDNA 載量＞1.0×107拷貝/mL 患者的晨尿100 mL，1006.3×g離心10 min，倒出上清液，將底部沉淀物以同樣條件再離心10 min，取0.1 mL 的尿沉淀成分加入4% 多聚甲醛后石蠟包埋切片，使用一抗anti-BKV VP1（1∶300）和一抗CK18（1：300）染色過(guò)夜，PBS 洗滌3 次，與適當(dāng)?shù)亩笽gG H&L（488）（1∶1000）和二抗IgG H&L（Cy3）（1∶1000）在室溫下孵育1 h。PBS 洗滌3 次，將載玻片用抗褪色試劑和DAPI（藍(lán)色）固定。

BKV‐DNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)檢測(cè)腎移植患者尿液或者血液中BKV-DNA 載量是目前主要診斷BKV 感染的方法[9］。臨床尿液和血漿標(biāo)本送至荻碩貝肯臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室（上海）檢測(cè)并出具檢測(cè)報(bào)告，使用BKV 核酸定量檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針?lè)?，北京鑫諾美迪基因檢測(cè)技術(shù)有限公司）檢測(cè)尿液中的BKV-DNA載量。 當(dāng)尿液BKV-DNA 測(cè)定值≥1.0×107拷貝/mL 時(shí)定義為BK 病毒尿癥，測(cè)定值的范圍為2.0×103～5.0×108拷貝/mL，測(cè)定值＞5.0×108拷貝/mL 時(shí)，等同為5.0×108拷貝/mL。

尿流式細(xì)胞結(jié)果檢測(cè)分析尿液標(biāo)本留取收集依患者隨診時(shí)進(jìn)行。患者移植術(shù)后1 天，1、2、6、9、12、18 周進(jìn)行常規(guī)的尿常規(guī)檢測(cè)，同時(shí)收集患者中段晨尿10 mL 分裝2 管標(biāo)本，送至中山醫(yī)院檢驗(yàn)科的UF-1000i 全自動(dòng)尿液有形成分分析儀進(jìn)行全尿液流式細(xì)胞學(xué)SREC 細(xì)胞定量指標(biāo)的檢測(cè)。觀察兩組患者在腎移植術(shù)后常規(guī)隨訪的尿常規(guī)化驗(yàn)單中SREC 陽(yáng)性指標(biāo)，出現(xiàn)SREC 指標(biāo)陽(yáng)性的起始時(shí)間點(diǎn)和結(jié)束時(shí)間點(diǎn)，計(jì)算出時(shí)間段，將持續(xù)3 周及以上的持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間視為SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段。

統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件。計(jì)量資料以±s表示，符合正態(tài)分布的資料采用t檢驗(yàn)，偏態(tài)分布的資料采用Mann-Whitney U 檢驗(yàn)，配對(duì)四格表數(shù)據(jù)比較兩者相關(guān)性采用Kappa 檢驗(yàn)。將影響因素和P＜0.05 因素納入Logistic 回歸模型計(jì)算預(yù)測(cè)腎移植術(shù)后出現(xiàn)BK 病毒尿癥感染的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素，用ROC 曲線評(píng)估獨(dú)立預(yù)測(cè)因素對(duì)于BK病毒尿癥的診斷效能。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

患者的一般臨床資料本研究中BK 病毒尿癥患者與非BK 病毒尿癥患者在年齡、性別、免疫抑制方案、隨訪時(shí)間、血清肌酐、尿白細(xì)胞和尿紅細(xì)胞的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，尿小圓上皮細(xì)胞陽(yáng)性及其持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1 腎移植患者病例資料Tab 1 The clinical data of kidney transplant recipients[±s or n（%）］

表1 腎移植患者病例資料Tab 1 The clinical data of kidney transplant recipients[±s or n（%）］

CsA：Cyclosporine A；Tac：Tacrolimus；MMF：Mycophenolate mofetil；Pred：Prednisolone；HLA：Human leukocyte antigen；SREC：Small round epithelial cell；DSRECP：Duration of SREC positivity.

Item Sex（males/females）Age（years）Follow-up duration（years）Scr（μmol/L）Postoperative immune suppressive regimen CsA+MMF+Pred Tac+MMF+Pred HLA match number URBC（+/-）UWBC（+/-）SREC（+/-）DSRECP（+/-）BK Viruria（n=36）25/1143.33±12.402.83±1.20176.63±12.8612（33.3）24（66.6）4（4，4）14/227/2934/234/2 non-BK Viruria（n=166）81/3540.78±11.393.03±1.37170.06±10.6236（31.1）80（68.9）4（4，4）66/5021/9544/7217/99 P 0.9650.4390.8350.3750.7950.2930.4700.230＜0.001＜0.001

SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥從臨床數(shù)據(jù)分析，SREC 陽(yáng)性指標(biāo)與BK 病毒尿癥有明顯相關(guān)性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為68.97%，陰性預(yù)測(cè)值為72.68%；而多次檢測(cè)出的SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段與BK 病毒尿癥也有相關(guān)性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.44%，陰性預(yù)測(cè)值為85.34%（表2）；單次和多次檢測(cè)的SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段與BKV 血癥無(wú)明顯特異性，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為11.60%，陰性預(yù)測(cè)值為98.10%。根據(jù)SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段的出現(xiàn)與BK 病毒尿癥確診的時(shí)間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行比較，SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段能提前（1.5±0.5）個(gè)月預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥的發(fā)生。

表2 BK 病毒尿癥和多種檢測(cè)指標(biāo)的預(yù)測(cè)效果Tab 2 The correlation between BK viruria and multiple clinical indicators （%）

尿SREC 中BKV 顆粒的鑒定本實(shí)驗(yàn)在BK 病毒尿癥患者尿沉淀涂片直接觀察可見(jiàn)SREC 與Decoy 細(xì)胞同時(shí)存在，S-M 法染色后細(xì)胞形態(tài)有明顯的差異（圖1、2）。尿沉淀制成的石蠟切片免疫熒光結(jié)果顯示，VP1 僅在SREC 的細(xì)胞質(zhì)和Decoy 細(xì)胞的細(xì)胞核上表達(dá)，證明SREC 有BKV 感染，與Decoy 細(xì)胞同為BK 病毒尿癥的診斷依據(jù)（圖3）。本研究同時(shí)將不同BKV-DNA 載量、SREC 定量值的尿沉淀切片進(jìn)行免疫熒光染色處理，再用Image J軟件分析圖片，從該結(jié)果可推測(cè)SREC 的數(shù)量是與尿液BKV-DNA 載量呈正比，而當(dāng)尿液BKV-DNA載量越大，SREC 內(nèi)存在BKV 顆粒的細(xì)胞比例越高（圖4）。

圖1 BK 病毒尿癥患者的尿沉渣細(xì)胞涂片（鏡下，40×）Fig 1 Urine sediment cell smear of patients with BK viruria disease（light microscope，40×）

圖3 BK 病毒尿癥患者免疫熒光染色的尿沉渣切片（40×）Fig 3 Immunofluorescence staining for the BK viruria patient’s urine sediments sections（40×）

圖4 不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)BKV‐DNA 載量的BK 病毒尿癥患者免疫熒光染色的尿沉渣切片（5×）Fig 4 Different BKV‐DNA loads of the BK viruria patient’s urine sediments tissue sections at various time points（5×）

尿SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥的Logistic 回歸模型分析考慮到SREC 與尿液中存在的影響因素的相關(guān)性，使用URBC、UWBC、SREC 陽(yáng)性指標(biāo)和SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段與BK 病毒尿癥作Logistic 回歸分析。結(jié)果顯示，BK 病毒尿癥與SREC陽(yáng)性指標(biāo)和SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段有明顯相關(guān)性，而與URBC 和UWBC 無(wú)明顯相關(guān)性，這兩項(xiàng)指標(biāo)對(duì)于SREC 和SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段的預(yù)測(cè)效能沒(méi)有影響（表3）。此結(jié)果證明SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段與BK病毒尿癥的相關(guān)性最佳。SREC 陽(yáng)性指標(biāo)同樣與BK病毒尿癥顯著相關(guān)。

表3 BK 病毒尿癥相關(guān)Logistic 回歸分析Tab 3 Logistic regression analysis of BK viruria

圖2 BK 病毒尿癥患者的尿沉渣涂片（S‐M 法染色，40×）Fig 2 Urine sediment smear of a patient with BK viruria（S‐M method staining，40×）

尿SREC 定量指標(biāo)與尿液BKV‐DNA 定量指標(biāo)成正比線性關(guān)系將BK 病毒尿癥患者術(shù)后1 天，6周、9 周、12 周定期檢測(cè)的SREC 定量指標(biāo)和BKVDNA PCR 定量指標(biāo)進(jìn)行長(zhǎng)期多次對(duì)比觀察，發(fā)現(xiàn)在不同患者的相同隨訪周期內(nèi)，SREC 與BKV 載量存在相似的變化趨勢(shì)且成正比關(guān)系，SREC 每增加1個(gè)/μL，BKV-DNA PCR 定量指標(biāo)約增加1.1×108拷貝/mL，反之亦然。將SREC 定量指標(biāo)與當(dāng)日患者的尿液BKV-DNA 載量做Logistic 線性回歸模型分 析。 117 份SREC 定量 指標(biāo)中，與BKV-DNA 的載 量 的 線 性 系 數(shù) 為1.1×108（95%CI：7.81×107～2.5×108，P=0.0004），由此可知SREC 的定量指標(biāo)與高BKV-DNA 載量呈正相關(guān)。BK 病毒尿癥患者尿液樣本的SREC 定量指標(biāo)和BKV-DNA 定量PCR 指標(biāo)能擬合出一趨勢(shì)線，此結(jié)果證明SREC 的定量指標(biāo)與BK 病毒尿癥的高BKV-DNA 載量有線性正相關(guān)（圖5）。

圖5 小圓上皮細(xì)胞定量值與BK 病毒尿癥患者BKV‐DNA載量的Logistic 線性回歸分析Fig 5 Logistic linear regression analysis of SRECs and BKV‐DNA load in patients with BK viruria

尿SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段與BK 病毒尿癥的ROC 曲線本研究的腎移植患者術(shù)后發(fā)現(xiàn)BK 病毒尿癥的中位數(shù)時(shí)間在2.5 個(gè)月，而B(niǎo)K 病毒尿癥患者在術(shù)后（1.0±0.5）個(gè)月檢測(cè)到SREC 陽(yáng)性指標(biāo)，根據(jù)SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段的出現(xiàn)與BK 病毒尿癥確診的時(shí)間節(jié)點(diǎn)進(jìn)行比較，SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段可能提前（1.0±0.5）個(gè)月預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥的發(fā)生。

根據(jù)Logistic 回歸分析的結(jié)果，以SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段來(lái)預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥，AUC 為0.872，95%CI：0.77～0.974，cut-off 值為85.5 天，對(duì)BK 病毒尿癥有臨床預(yù)測(cè)價(jià)值（圖6）。此結(jié)果證明尿SREC持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥發(fā)生的效能較佳，可很好降低術(shù)后BK 相關(guān)腎病的發(fā)生。

圖6 尿小圓上皮細(xì)胞持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段預(yù)測(cè)BK 病 毒尿 癥的ROC 曲 線Fig 6 ROC curve analysis of urine DSRECP for predicting BK viruria infection

討論

BKV 的感染在健康人群中普遍存在，成年人中BKV 血清抗體陽(yáng)性可達(dá)到90%[5］，平時(shí)在泌尿系統(tǒng)的腎小管上皮細(xì)胞和尿路上皮細(xì)胞里休眠潛伏。由于正常人群免疫功能正常，絕大多數(shù)被感染者終生不會(huì)出現(xiàn)BKV 感染的臨床癥狀。腎移植患者處于免疫抑制狀態(tài)，休眠狀態(tài)的BKV 可發(fā)生復(fù)制、增殖，導(dǎo)致BKV 感染。國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道腎移植術(shù)后BK病毒尿癥、BKV 血癥和BKVAN 的發(fā)生率分別是45.6%、22.2% 和5.6%[10］。如果可以早期預(yù)測(cè)及診斷BKV 感染，則可以密切監(jiān)測(cè)并及時(shí)進(jìn)行干預(yù)，從而降低BKVAN 的發(fā)生率，提高移植腎的長(zhǎng)期存活率。

據(jù)國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道，腎移植術(shù)后BK 病毒尿癥主要發(fā)生在術(shù)后1～3月，從BK 病毒尿癥進(jìn)展至BKV血癥及移植腎損傷有4～12 周的窗口期[11］。國(guó)內(nèi)的報(bào)道顯示，腎移植術(shù)后BK 病毒尿癥多發(fā)生在術(shù)后2個(gè)月左右[4］。本研究也發(fā)現(xiàn)，腎移植患者BK 病毒尿癥主要發(fā)生在術(shù)后（2.5±0.5）個(gè)月，而SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段能提前（1.5±0.5）個(gè)月預(yù)測(cè)病毒的發(fā)生。根據(jù)2019年版美國(guó)移植學(xué)會(huì)的臨床建議，尿液細(xì)胞學(xué)檢測(cè)只有Decoy 細(xì)胞陽(yáng)性才能診斷為腎移植術(shù)后多瘤病毒感染，在腎移植術(shù)后每2 周進(jìn)行一次尿液細(xì)胞學(xué)檢查Decoy 細(xì)胞直到術(shù)后3 個(gè)月。而對(duì)尿BKV-DNA 載量檢測(cè)是術(shù)后每個(gè)月1 次，直到術(shù)后9 個(gè)月，再每3 個(gè)月檢測(cè)一次直到術(shù)后2年[3］。

通過(guò)尿液細(xì)胞學(xué)檢查尋找Decoy 細(xì)胞，需要經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員，而且主觀性較強(qiáng)，臨床上應(yīng)用有較大局限性?；赑CR 方法的尿液BKV-DNA載量檢測(cè)是目前臨床常用方法，但是檢測(cè)過(guò)程相對(duì)比較繁瑣，而且大多數(shù)醫(yī)院未常規(guī)開(kāi)展，對(duì)患者而言頻繁檢測(cè)也增加了醫(yī)療支出。如果能夠利用目前臨床上尿常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目中的某些指標(biāo)，來(lái)早期預(yù)測(cè)甚至診斷BK 病毒尿癥，將有助于密切隨訪BKV的感染病程，從而有針對(duì)性地指導(dǎo)BKV 血癥和BKVAN 的檢測(cè)及監(jiān)測(cè)。SREC 指標(biāo)在臨床上多出現(xiàn)于腎臟的急性腎小管壞死、腎小管間質(zhì)炎癥、尿路細(xì)菌感染、腎病綜合征和移植腎排斥等，在BKV感染方面未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。已有研究證實(shí)，潛伏在尿路上皮中的BKV 增殖性感染可導(dǎo)致腎小管上皮細(xì)胞核損傷、細(xì)胞破碎溶解，細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫酶釋放過(guò)氧化氫氧化各類細(xì)胞器碎片[12］，釋放大量炎癥因子導(dǎo)致周圍正常腎小管上皮細(xì)胞脫落，進(jìn)而從尿液中排除。然而，尚未有研究對(duì)SREC 與BKV 感染的相關(guān)性進(jìn)行研究和報(bào)道。

本研究以醫(yī)院檢驗(yàn)科的尿常規(guī)結(jié)果為數(shù)據(jù)，研究全自動(dòng)尿沉渣檢測(cè)儀檢測(cè)SREC 指標(biāo)用于臨床預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥。由于全自動(dòng)尿沉渣檢測(cè)儀可以大量、準(zhǔn)確地測(cè)出尿液中的細(xì)胞指標(biāo)，而且尿常規(guī)項(xiàng)目是腎移植患者術(shù)后常規(guī)的檢查項(xiàng)目，應(yīng)用此臨床指標(biāo)診斷BK 病毒尿癥能提供更加便捷、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的無(wú)創(chuàng)臨床診斷方案。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，SREC 陽(yáng)性指標(biāo)、定量指標(biāo)、持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段均與BK 病毒尿癥有明顯的相關(guān)性。雙重免疫熒光標(biāo)記法和S-M 尿沉淀染色法同時(shí)證明SREC 細(xì)胞質(zhì)內(nèi)存在BKV 顆粒，且在該細(xì)胞核內(nèi)未發(fā)現(xiàn)BKV 顆粒，由此可知SREC 與Decoy 細(xì)胞并非相同細(xì)胞類型，而且與BK 病毒尿癥有直接相關(guān)性。由此可得出：（1）SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段的指標(biāo)能提前1 個(gè)月預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥的發(fā)生；（2）如果SREC 陽(yáng)性指標(biāo)持續(xù)的時(shí)間在85 天左右，預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥的效能最佳，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為100%；（3）SREC 在BK 病 毒 尿 癥 中 同 樣 感 染BKV，與Decoy 細(xì)胞來(lái)源自相同的脫落腎小管上皮細(xì)胞，可能為潛在的早期Decoy 細(xì)胞的形態(tài)；（4）即使混雜了與SREC 相關(guān)性較高的尿液干擾因素，也不影響SREC 持續(xù)陽(yáng)性時(shí)間段對(duì)BK 病毒尿癥的診斷效能；（5）SREC 的定量指標(biāo)與BK 病毒尿癥的BKV 載量有正比關(guān)系，此研究結(jié)果可進(jìn)一步探究SREC 指標(biāo)診斷BK 病毒尿癥的優(yōu)化方案。

綜上所述，腎移植患者SREC 陽(yáng)性指標(biāo)可預(yù)測(cè)早期BKV 感染的發(fā)生，SREC 陽(yáng)性時(shí)間段在預(yù)測(cè)BK 病毒尿癥方面的準(zhǔn)確性更高，可能為本研究中最優(yōu)化的輔助診斷早期BKV 感染的臨床指標(biāo)。

本研究結(jié)果尚有不足之處，如病例數(shù)不足、缺乏前瞻性研究設(shè)計(jì)、指標(biāo)的特異性尚未在其他研究中驗(yàn)證過(guò)，仍需進(jìn)一步深入研究。

作者貢獻(xiàn)聲明許瀚仁 探索研究方向，數(shù)據(jù)采集，論文撰寫和修訂。 王繼納 論文構(gòu)思和指導(dǎo)，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，數(shù)據(jù)分析。楊橙 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)證與驗(yàn)證數(shù)據(jù)分析在臨床上的可行性。張潮 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和分析，模型運(yùn)算，修訂論文。戎瑞明 論文審閱和指導(dǎo)。 朱同玉 論文框架設(shè)計(jì)，調(diào)整研究計(jì)劃。許明 論文修訂和終審。

利益沖突聲明所有作者均聲明不存在利益沖突。