家兔尿生成實(shí)驗(yàn)若干體會

羅布占堆 潘永越

西藏大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心，西藏拉薩市 850000

機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)是一門重要的醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)課，主要內(nèi)容包括生理學(xué)、藥理學(xué)、病理學(xué)三門課程的內(nèi)容。當(dāng)前機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)面臨的問題是效果不理想，實(shí)驗(yàn)成功率不高?？偨Y(jié)失敗的原因，主要有：實(shí)驗(yàn)流程中，觀察項(xiàng)目多、時間較長、操作步驟較復(fù)雜、家兔少尿甚至無尿等情況。為了更好地提高實(shí)驗(yàn)的成功率，筆者在以往大量的實(shí)驗(yàn)中歸納出一定的經(jīng)驗(yàn)，以供參考。

1 實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)中的準(zhǔn)備

動物實(shí)驗(yàn)的效果受到多方面因素的影響，如動物因素、環(huán)境因素等，以下將從這兩個方面來探討在實(shí)驗(yàn)過程中如何更好提高實(shí)驗(yàn)的成功率。

1.1 實(shí)驗(yàn)動物的合理選擇 從具有正規(guī)飼養(yǎng)資格的廠家采購健康成年(體重為2.5～3kg)，品種為新西蘭大耳的白兔。在正式實(shí)驗(yàn)前，保證動物的身體健康情況，如給予動物高水分的食物，讓動物可以自由飲水[1]。

1.2 實(shí)驗(yàn)溫濕度的控制 首先，在正式開設(shè)實(shí)驗(yàn)前，先確定實(shí)驗(yàn)的季節(jié)和時間。建議在兩個時間段選擇，每年的4月份和10月份中室溫恒溫在20℃左右的時間。開始實(shí)驗(yàn)前，保持實(shí)驗(yàn)室整潔干凈和通風(fēng)性，濕度控制在45%～70%。其次，試驗(yàn)中，先用恒溫浴槽保溫滴注的生理鹽水，并時刻注意觀察動物體溫，減小實(shí)驗(yàn)中動物創(chuàng)口，防止因家兔的抵抗力減弱而造成家兔尿液生成的減少。最后，手術(shù)結(jié)束后，在創(chuàng)口處用溫?zé)岬臐窦啿几采w，從而達(dá)到減少體液蒸發(fā)的作用[2]。

2 藥物注射問題

多種藥物的多次靜脈注射也是影響家兔尿生成的重要因素之一。從過往教學(xué)經(jīng)驗(yàn)看，雖然參加實(shí)驗(yàn)的學(xué)生在實(shí)驗(yàn)前已進(jìn)行過家兔耳緣靜注射的操作，但操作熟練度還需要改善。由于熟練度不高，大多數(shù)學(xué)生在完成一兩種藥品的多次注射后，動物的兩只靜脈已被破壞或者兩耳水腫，無法進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。為了改善這一情況，可以采取如下措施：

2.1 改變輸液給藥方式，合理改造輸液裝置 在過往實(shí)驗(yàn)中，傳統(tǒng)的耳緣靜脈麻醉可能是操作失敗的一個原因。在實(shí)驗(yàn)中，由于需要用多種藥物多次地對實(shí)驗(yàn)中的家兔從耳緣靜脈給藥，家兔的耳朵很容易在實(shí)驗(yàn)中水腫或者靜脈受到破壞，實(shí)驗(yàn)很容易就此失敗。為此，在參照其他院校采用靜脈輸液給藥方法基礎(chǔ)上，筆者在多次的實(shí)驗(yàn)中，找到一種可以解決輸液和給藥沖突的輸液方式——耳緣靜脈輸液給藥。這種方式的輸液主要采用生理鹽水進(jìn)行，大部分院校解決輸液和給藥沖突的方法主要有兩種：(1)在連接輸液針的地方連接一個三通管；(2)直接通過拔插輸液針，首先將輸液針和注射器相連，其次在給藥的間隙將輸液針和輸液裝置相連。但這兩種方式的弊端在于，空氣很容易進(jìn)入其中，引發(fā)氣體栓塞。針對這種情況，在大量實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，筆者對輸液裝置進(jìn)行了改進(jìn)：用一小段橡皮軟膠管在輸液管和輸液針頭之間連接，以便用注射器直接扎膠管，防止實(shí)驗(yàn)過程中氣體進(jìn)入[3]。有研究者提出，該過程中也許有從膠管的針眼往外漏液的情況，但由于靜脈壓力不是很高，故將這一個設(shè)想排除。整體而言，這種方式可以極大提高實(shí)驗(yàn)的成功率。

2.2 麻醉時選擇一次性輸液器針頭 在一次性輸液器針頭的選擇上，筆者取用輸液器前面的細(xì)交管及針頭，將原來實(shí)驗(yàn)采用的6～6.5號針頭換成較細(xì)的5～6號輸液器的針頭，這樣做的原因在于，初學(xué)者用較細(xì)的針頭穿刺略粗的靜脈血管，成功率相對較高(學(xué)生穿刺的成功率高達(dá)98%)。

2.3 保留靜脈輸液器針頭 為了達(dá)到較好的實(shí)驗(yàn)效果，減少失敗的次數(shù)和節(jié)約時間，在給家兔做實(shí)驗(yàn)時，仿照人輸液時固定針頭的方法，在第一次注射麻醉藥品后，固定好兔耳緣靜脈處的針頭。同時，為了防止空氣進(jìn)入，用脫脂棉及白膠布堵好輸液器前端與針管連接的接口每次換藥時，將抽好的藥管直接插入針頭，這個過程一直持續(xù)到所需注射的藥品注射完畢。

3 選擇合適的手術(shù)方式

選擇最適宜的手術(shù)操作有助于鍛煉學(xué)生在復(fù)雜耗時的實(shí)驗(yàn)(如靜脈麻醉、動脈插管、膀胱插管等)的動手能力。

3.1 采用股動脈穿刺的方法測量血壓 頸總動脈插管是現(xiàn)在尿生成實(shí)驗(yàn)中常用的一種測量血壓方法。動脈插管對于實(shí)驗(yàn)來講非常重要，但操作過程相對較難，任何操作失誤都有可能會導(dǎo)致動物大出血或循環(huán)血量降低，并最終導(dǎo)致尿量生成的減少。因而，為了更好地提高實(shí)驗(yàn)的成功率，可以考慮采用一種創(chuàng)傷小，操作快，對動物的生理功能影響小，可多次操作且實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性高的方法——股動脈穿刺。具體的步驟為：首先，在一側(cè)腹股溝區(qū)處剪毛備皮，隨后準(zhǔn)確找到相應(yīng)的股動脈位置，在準(zhǔn)備穿刺前，將頭皮針接肝素帽端，將動脈留置針內(nèi)的空氣排盡；其次，將動脈留置針針體(約 1/2的位置) 插進(jìn)股動脈管內(nèi)，當(dāng)看見回血后立即拔出針芯。此時需繃緊皮膚，將剩余針體推入血管內(nèi)，直至針體 3/4的位置，最后接上壓力換能器(充滿肝素)測量動脈血壓。

3.2 選擇膀胱插管進(jìn)行尿液的收集 當(dāng)前收集尿液的方法主要與三種：輸尿管插管、尿道插管和膀胱插管。其中，因?yàn)檩斈蚬懿骞艿谋锥?常導(dǎo)致創(chuàng)傷性無尿)，這種方法已經(jīng)被絕大部分實(shí)驗(yàn)室棄用。雖然后期有人提出第二種創(chuàng)傷小且效果較好的微創(chuàng)尿道插管，但這一方法很大程度上取決于實(shí)驗(yàn)者的熟練程度，且實(shí)際試驗(yàn)成功率不高。如果讓手法不熟練的學(xué)生練習(xí)，很容易因?yàn)榉磸?fù)嘗試性的試驗(yàn)導(dǎo)致尿道水腫，并最終影響尿液的排放。此外，如果實(shí)驗(yàn)者導(dǎo)尿管穿透尿道的插入方向不對，很難再次找準(zhǔn)方向而進(jìn)入膀胱。除了實(shí)驗(yàn)者的熟練度和檢驗(yàn)的影響外，動物的次雄性也會影響尿道插管成功率。如果采用尿道比較特殊的雌性家兔，則試驗(yàn)更不容易成功。為了解決當(dāng)前的難題，本實(shí)驗(yàn)室在多次的實(shí)驗(yàn)和教學(xué)中總結(jié)出第三種方法，即膀胱插管實(shí)驗(yàn)，不受操作者熟練度的影響，成功率相對更高。另外，這種手術(shù)帶來的創(chuàng)傷在家兔的承受范圍之內(nèi)，創(chuàng)傷性無尿的發(fā)生情況較少。

3.3 選擇尿道口結(jié)扎 在以往的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材中提出，為了防止尿液從尿道口流出，在進(jìn)行膀胱插管前，需要將膀胱頸部結(jié)扎。筆者認(rèn)為，這一措施是不必要的。一般而言，只有當(dāng)膀胱內(nèi)尿量達(dá)一定充盈度時(400～500ml)，尿液才會從尿道流出。當(dāng)壁上的牽張感受器收到興奮刺激時，動物的逼尿肌才會收縮，此時內(nèi)括約肌開始松弛，并最終促使尿液經(jīng)尿道排出。但采用膀胱插管時，家兔在膀胱排空后，膀胱插管會將產(chǎn)生的尿液即時引流出體外，也就不會出現(xiàn)教材上提到的膀胱儲尿充盈，因而也就不會出現(xiàn)尿液從尿道口流出的情況。這個在筆者的教學(xué)過程中也得到驗(yàn)證，筆者發(fā)現(xiàn)，手術(shù)完進(jìn)行記滴的過程中，很少會出現(xiàn)尿液從尿道口流出的情況。因此為了減少操作時間和學(xué)生在分離膀胱頸時損傷輸尿管和膀胱可能造成的實(shí)驗(yàn)失誤，筆者建議在采用膀胱插管法時不結(jié)扎膀胱頸部。

4 實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目(尿生成的各個影響因素)順序的調(diào)整

在尿生成實(shí)驗(yàn)中給藥的順序要在“促使尿生成增多與減少的藥物交替給予”這一基本原則下進(jìn)行。建議實(shí)驗(yàn)注射順序?yàn)椋菏紫仁巧睇}水，其次是去甲腎上腺素，再次是20%葡萄糖，從次是垂體后葉素，最后是速尿。將生理鹽水這一步驟放在開始的原因在于，筆者采用的是靜脈輸液的方式給藥，為了調(diào)快輸液的速度，筆者采用生理鹽水來觀察對尿生成的影響。當(dāng)家兔的尿液增加后，要把輸液的速度控制在2滴 /9～10s，從而減少生理鹽水對尿生成的影響[4]。在實(shí)驗(yàn)中，若因意外因素導(dǎo)致長時間無尿的情況，可以再次調(diào)快輸液速度直至出現(xiàn)尿液。隨后再進(jìn)行后面的實(shí)驗(yàn)步驟，此時下一個實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目注射的藥物必須是能夠使尿液減少的藥物。

總之，為了提高實(shí)驗(yàn)成功率和達(dá)到較好的教學(xué)目的，筆者對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行探索性的改進(jìn)和創(chuàng)新，可以使得經(jīng)驗(yàn)較少和熟練度較低的學(xué)生更好上手，在實(shí)驗(yàn)程序上進(jìn)行簡化，避免手術(shù)過程中可能出現(xiàn)的各種因家兔無尿或者手術(shù)失敗而無法繼續(xù)實(shí)驗(yàn)的現(xiàn)象(如大失血、損傷性閉尿以及體液丟失)，從而提高實(shí)驗(yàn)的成功率。