新型冠狀病毒疫苗接種者血清抗體水平變化及與外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性

劉陽，侯彬，胡浩宏，馮雨，楊平，王芳，張玉蓉，方堃

1四川省科學(xué)城醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川綿陽621900；2西南醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系

截至2021年5月底，我國新型冠狀病毒疫苗(簡稱新冠疫苗)接種工作持續(xù)提速，已完成60 299.1萬劑次。疫苗應(yīng)具有良好的安全性和免疫原性。免疫原性指標(biāo)指與疫苗保護(hù)效力有相關(guān)的、較易測(cè)定的免疫指標(biāo)，如外周血中和抗體、IgG和T細(xì)胞反應(yīng)水平[1-4]。這些指標(biāo)水平越高，感染風(fēng)險(xiǎn)越低，也就意味著疫苗的保護(hù)效力越強(qiáng)[5]。既往多項(xiàng)研究證實(shí)，感染新冠病毒的康復(fù)者體內(nèi)能夠產(chǎn)生具有保護(hù)性中和抗體[6-9]。中和抗體可阻斷病毒受體與配體的相互作用，從而使病毒從宿主中清除[10]，是流感疫苗接種中廣泛應(yīng)用的免疫相關(guān)指標(biāo)[11-12]。通過檢測(cè)上述免疫原性指標(biāo)有助于預(yù)測(cè)疫苗的保護(hù)效力。本研究觀察了新冠疫苗接種者血清中和抗體、IgM、IgG、總抗體水平變化，分析中和抗體水平與外周血淋巴細(xì)胞亞群的相關(guān)性，為評(píng)估疫苗性能提供臨床依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2021年3～5月某單位接受新冠滅活疫苗(Vero細(xì)胞、科興)接種的志愿者56例作為研究對(duì)象(疫苗組)，男12例、女44例，年齡19～59(35.09±10.41)歲，經(jīng)健康體檢(血常規(guī)、小便常規(guī)、血尿酸、肝腎功能等)無異常表現(xiàn)。同時(shí)選擇未接種疫苗的健康人20例為對(duì)照組，男6例、女14例，年齡21～53(31.88±11.60)歲。兩組核酸檢測(cè)均為陰性，其性別、年齡等一般資料無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理審查委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 血清抗體檢測(cè) 疫苗組于接種第2劑疫苗后3 d、6～8 d、13～15 d、28～35 d，對(duì)照組入組后于清晨空腹(禁食8 h以上)抽取肘靜脈血2.5 mL、2.0 mL分別置于黃色促凝管、紫色抗凝管中。黃色促凝管標(biāo)本上下顛倒混勻后室溫靜置15 min，以3 500 r/min離心5 min后取血清在2 h內(nèi)完成檢測(cè)。用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測(cè)血清新型冠狀病毒抗體IgM、IgG、中和抗體、總抗體；接種疫苗后13～15 d通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群比例及絕對(duì)計(jì)數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清IgM、IgG、中和抗體水平比較 疫苗組IgM、IgG、中和抗體水平高于對(duì)照組(P均<0.01)。見表1。疫苗組接種后3 d、6～8 d、13～15 d、28～35 d中和抗體陽性率分別為20.0%、100%、100%、85.7%。隨接種時(shí)間延長，血清IgG、中和抗體、總抗體水平都出現(xiàn)上升趨勢(shì)，在接種第2劑兩周左右時(shí)IgM出現(xiàn)峰值。其中，疫苗組接種后6～8 d、13～15 d血清IgM水平高于接種后3 d，接種后6～8 d、13～15 d、28～35 d血清IgG、中和抗體、總抗體水平均高于接種后3 d(P均<0.05)。詳見表2。

表2 疫苗組接種疫苗后不同時(shí)點(diǎn)血清IgM、IgG、中和抗體、總抗體水平變化[M(P25，P75)]

2.2 兩組外周血淋巴細(xì)胞亞群比例及絕對(duì)計(jì)數(shù)比較 疫苗組CD3+T細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD3-CD19+B細(xì)胞比例高于對(duì)照組(P均<0.05)。疫苗組與對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表3、表4。

表3 疫苗組與對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞比例比較

表4 疫苗組與對(duì)照組外周血淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)比較

2.3 中和抗體水平與外周血T淋巴細(xì)胞亞群比例的相關(guān)性 疫苗組中和抗體水平與CD3-CD19+B細(xì)胞、CD3-CD16/56+NK細(xì)胞比例及淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)計(jì)數(shù)無相關(guān)性(P均>0.05)。疫苗組中和抗體水平與CD3+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞比例呈正相關(guān)(r分別為0.307、0.333，P均<0.05)，與CD3+CD4+T細(xì)胞比例、CD4/CD8比值呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.224、-0.331，P均<0.05)。

3 討論

新冠疫苗研發(fā)及接種十分迅速。兩項(xiàng)最新研究證實(shí)，新冠疫苗可以使人們?cè)谝荒晟踔粮L的時(shí)間內(nèi)獲得保護(hù)，這些發(fā)現(xiàn)可能有助于消除人們對(duì)疫苗僅能提供短期保護(hù)的擔(dān)憂[13-14]。近期研究發(fā)現(xiàn)，保留具有病毒記憶性的B細(xì)胞可長期存留在人骨髓中，并能在必要時(shí)產(chǎn)生對(duì)抗新型冠狀病毒的抗體[15-16]。盡管這項(xiàng)研究針對(duì)的是自然感染所產(chǎn)生的抗體，但疫苗的作用方式與通過自然感染產(chǎn)生的免疫類似，提示疫苗的保護(hù)也將是長期的。

本研究發(fā)現(xiàn)，新冠疫苗接種后6～8 d、13～15 d中和抗體陽性率可達(dá)100%，但28～35 d陽性率為85.7%，出現(xiàn)了下降，這可能與疫苗組納入者年齡偏大(平均35.09歲)有關(guān)。我們觀察到部分志愿者在接種疫苗后1～3 d，能夠產(chǎn)生中和抗體，但是水平很低，通常都小于6 AU/mL，與對(duì)照組基線基本相當(dāng)，到1周左右，中和抗體水平顯著增高，第2周至第4周小幅度升高，并維持在較高水平，這表明該滅活疫苗可以廣泛誘導(dǎo)高水平的保護(hù)性中和抗體，且能夠保持穩(wěn)定。IgM抗體從1～3 d到13～15 d水平明顯上升，與IgG增加趨勢(shì)一致，在接種2周后回落。但是IgG增加更為顯著，這與以往的臨床研究結(jié)果相一致[17-19]。中和抗體和IgG水平的升高，表明疫苗能夠誘導(dǎo)機(jī)體免疫應(yīng)答，有效觸發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫，產(chǎn)生抗體，提示接種疫苗后體內(nèi)產(chǎn)生了對(duì)新型冠狀病毒的免疫力。

評(píng)價(jià)疫苗保護(hù)性免疫的指標(biāo)有很多種，而不能僅僅關(guān)注中和抗體，因?yàn)橹泻涂贵w并不等同于保護(hù)性免疫的全部，除中和抗體水平外，還包括T細(xì)胞、免疫記憶等方面[2-4]。有研究證實(shí)，人體內(nèi)新冠病毒感染后具有記憶性的T細(xì)胞應(yīng)答可在較長時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定存在，具有保護(hù)作用的中和抗體水平與特異性T細(xì)胞有很強(qiáng)的相關(guān)性[7,20]。本研究觀察到，疫苗組人群外周血CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD3-CD19+B細(xì)胞比例增加，其中CD3+CD4+T比例升高最明顯。接下來進(jìn)一步分析了中和抗體水平與外周血淋巴細(xì)胞亞群比例和絕對(duì)計(jì)數(shù)的關(guān)系，結(jié)果顯示，中和抗體水平與CD3+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞比例呈正相關(guān)，與CD3+CD4+T細(xì)胞比例、CD4/CD8比值呈負(fù)相關(guān)，但是中和抗體水平與淋巴細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)沒有關(guān)聯(lián)，這可能與檢測(cè)的時(shí)間節(jié)點(diǎn)有關(guān)，也可能是兩次免疫的間隔時(shí)間影響了機(jī)體的免疫應(yīng)答，接下來的研究將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量進(jìn)行驗(yàn)證。

本研究中，疫苗組志愿者接種第2劑后，尤其是13～15 d以后，機(jī)體產(chǎn)生了較高水平的IgG、中和抗體、總抗體，激發(fā)了人體體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，產(chǎn)生免疫力，這對(duì)評(píng)估疫苗療效提供了非常有價(jià)值的臨床依據(jù)。但是評(píng)估疫苗性能歸根結(jié)底還是要看能否保護(hù)接種者免受病毒感染及保護(hù)持久性，這將是下一步探索的重點(diǎn)。