復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓對豬生長性能、抗氧化功能的效果影響

劉依山，呂 蘭，郭藝偉，包永占★，王玉田，潘興亮，鄭瑞峰，田 莉

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 071000；2. 北京市畜牧總站 100107；3. 懷柔區(qū)農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 101400）

蚯蚓產(chǎn)量大，易獲取，藥理作用多，應(yīng)用前景廣，所含氨基酸有十八種之多，含70%左右，其中谷氨酸的含量最高，可達(dá)10%左右[1]，除蛋白質(zhì)含量高外，蚯蚓含有具有抗病和促進(jìn)動物生長多肽和可溶性的小分子蛋白，多種礦物質(zhì)元素和維生素[2]，現(xiàn)減少或替代豆類等投資高的蛋白飼料的研究越來越多并取得了不錯的效果[3]，乳酸菌發(fā)酵，更可以使飼料色澤、香味得到改善；不易吸收的大分子蛋白可變成小分子多肽和氨基酸，使氨基酸含量升高，粗蛋白和粗脂肪含量升高，短鏈脂肪酸含量升高，提高飼料的利用率[4]。

發(fā)酵飼料產(chǎn)品中的代謝產(chǎn)物等非活菌成分，不易受到抗生素、消毒劑、酸化劑等具有殺菌活性物質(zhì)的影響。蚯蚓中的有效物質(zhì)能增強(qiáng)動物機(jī)體免疫功能和抗氧化功能等，乳酸菌能夠有效地分解蚯蚓中大分子物質(zhì)，使抗?fàn)I養(yǎng)因子含量減少，聯(lián)合乳酸菌抗菌性、增強(qiáng)免疫力和提高抗氧化的作用[5]，可以同時發(fā)揮乳酸菌和蚯蚓的應(yīng)用價值。本試驗探索植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌3株乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物添加到豬基礎(chǔ)飼料中對豬生長性能、抗氧化功能的效果影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

日本大平二號蚯蚓，北京艾克賽德生物工程有限公司；組織勻漿機(jī)，上海凈信實業(yè)發(fā)展有限公司；發(fā)酵罐，東莞市臻釀貿(mào)易有限公司；全自動血液分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療股份有限公司；無水葡萄糖，上海麥克林生化科技有限公司；丙二醛 （MDA）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性、總抗氧化力（T-AOC）檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所。

1.2 復(fù)合發(fā)酵蚯蚓液制備

將在北京市畜牧總站分離保存在-80℃的植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌菌種進(jìn)行復(fù)蘇，將植物乳桿菌、乳酸片球菌、腸膜明串珠菌菌液按5%∶3%∶2%比例加入含有3g無水葡萄糖100mL蒸餾水中，將洗腸后的日本大平二號蚯蚓肉體勻漿，進(jìn)行60℃10min巴氏消毒，加入5g到發(fā)酵培養(yǎng)基?；靹蛑螅?8℃密閉發(fā)酵48h，等比放大加入豬飼料中。

1.3 試驗動物

試驗于2021年8月9日～9月16日期間在北京市延慶區(qū)經(jīng)濟(jì)示范園進(jìn)行，將日齡、體重相近（約為40kg）的 20頭大長白育肥豬隨機(jī)分成4組，分別進(jìn)行編號，每組1個處理，共4個處理，每個處理設(shè)5個重復(fù)。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，3個試驗組分別在基礎(chǔ)日糧中加入1%、3%、5%的復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓液。試驗期內(nèi)每天于 17: 00進(jìn)行飼喂，預(yù)試期7d，正試期32d。

1.4 飼養(yǎng)管理

按組別進(jìn)行分欄，按照豬場正常的飼養(yǎng)程序進(jìn)行飼養(yǎng)。試驗前豬舍進(jìn)行全面消毒，試驗豬進(jìn)行常規(guī)免疫。根據(jù)日齡逐漸增加，飼料也逐漸增加。試驗豬自由飲水，每周清洗欄舍3次，保持欄舍和飼槽清潔，每日觀察記錄試驗豬的健康狀況。

1.5 檢測指標(biāo)

1.5.1 生長指標(biāo)

分別于試驗開始和結(jié)束日早晨 7: 00 開始空腹稱重，逐頭計算平均日增重，試驗期以欄為單位記錄每天的投料量和剩料量，以組為單位統(tǒng)計飼料消耗量及平均料肉比。

1.5.2 血常規(guī)指標(biāo)

在試驗結(jié)束第33d時對豬進(jìn)行前腔靜脈采血，利用全自動血液分析儀對豬全血進(jìn)行指標(biāo)檢測，并記錄數(shù)據(jù)。

1.5.3 抗氧化指標(biāo)

在試驗結(jié)束第33d時進(jìn)行采血，3000 r/min離心10min處理收集血清，按照以下各個試劑盒說明書進(jìn)行測定血清中丙二醛 （MDA）含量，谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化力（T-AOC）。

1.6 統(tǒng)計

利用SPSS 19.0 軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，對比顯著性差異（P＜0.05），數(shù)據(jù)表示方式為平均值±平方差（?x±s），通過GraphPad Prism 5.0軟件對抗氧化指標(biāo)結(jié)果進(jìn)行制圖。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對豬日增重料肉比的效果

在試驗的32d飼養(yǎng)期里，各組豬均未有發(fā)病記錄，健康情況良好。經(jīng)單因素分析（結(jié)果見表1），添加3%、5%的試驗組平均日增重與對照組比呈極顯著差異 （ P＜0.01），其中添加5%試驗組效果最為明顯，對照組和1%、3%、5%試驗組平均日增重呈依次遞增的趨勢，只有添加5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓液的試驗組平均料重與對照組比呈顯著性差異（ P＜0.05），但對照組與1%、3%、5%試驗組的平均料重比依次為遞減趨勢。

表1 日增重料重比基本情況

2.2 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對豬血常規(guī)指標(biāo)的效果

結(jié)果見表2，對于大長白二元育肥豬血常規(guī)指標(biāo)，隨著飼料中乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物水平的增加，中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值呈線性下降（P＜0.05），淋巴細(xì)胞比率呈線性增加（P＜0.01），其他血常規(guī)指標(biāo)對乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物不同水平無響應(yīng)。

表2 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對豬血常規(guī)指標(biāo)的效果

2.3 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對豬抗氧化能力的效果

結(jié)果見表3，可知在試驗第33d時，添加1%、3%、5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物的試驗組肉豬血清丙二醛MDA含量較對照組分別降低0.5 nmol/mL、0.55 nmol/mL和1.06 nmol/mL，均顯著低于對照組（P＜0.05）。試驗組豬血清中GSH-Px活力分別較對照組有明顯的提升趨勢，其中添加5%的試驗組與對照組比極顯著差異（P＜0.01）；肉豬血清SOD活性較對照組有略微升高的趨勢，但無顯著差異性（P＞0.05）；3個試驗組豬血清T-AOC總抗氧化能力較對照組均有提高，但添加5%的復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物試驗組與對照組相比有顯著性差異（P＜0.05）。

表3 復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物對豬抗氧化能力的效果

3 討論

生豬的生長性能反映生豬的生長速度、飼料利用率等重要指標(biāo)，對豬場的養(yǎng)殖水平有著評價意義，生長性能的高低更決定著生豬產(chǎn)肉能力，以及養(yǎng)殖場的經(jīng)濟(jì)效益[6]。在本試驗中，與對照組比，添加1%、3%、5%復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物的試驗組大白豬日增重和料重比均有提升，且添加5%的發(fā)酵液效果差異極顯著（P＜0.01），平均日增重約達(dá)到0.918kg。徐麒麟[7]在飼料中添加蚯蚓提取物可以降低成華豬的料重比，并可以提高抗氧化能力，本試驗乳酸菌發(fā)酵蚯蚓產(chǎn)物與蚯蚓提取物相比，降低丙二醛 （MDA）含量幅度較大。李園園[8]等在安義瓦灰雞飼糧中添加蚯蚓發(fā)酵液的試驗中，蚯蚓發(fā)酵液可明顯改善雞的生長性能、肌肉品質(zhì)，以添加量為5μL/g蚯蚓發(fā)酵液的效果最佳。王燕麗[9]在復(fù)合發(fā)酵蚯蚓蛋白飼料對肉豬生長性能的效果試驗中，表明發(fā)酵蚯蚓蛋白飼料確實能促進(jìn)肉豬增重，并能降低飼料成本，蚯蚓蛋白替代70%的豆粕效果相對較好，其應(yīng)用效果與本實驗一致。Rudabeh R[10]在飼糧中添加蚯蚓提取物對里海羅貝魚種血清免疫參數(shù)和生長性能的影響試驗中，蚯蚓提取物顯著提高了增重和比生長率、食物適口性指數(shù)和飼料轉(zhuǎn)化率（P＜0.05）。

中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞均是與機(jī)體免疫能力有關(guān)的[11]，根據(jù)添加1%、3%、5%試驗組的血常規(guī)指標(biāo)檢測得出復(fù)合乳酸菌發(fā)酵蚯蚓物可以改善機(jī)體免疫能力，促進(jìn)生長的功能。吳貴富[12]在飼料中添加富硒乳酸菌中藥制劑，提高育肥豬生長性能并改善了血液指標(biāo)，乳酸菌可以促進(jìn)動物機(jī)體生長性能和抗氧化功能。

正常動物體內(nèi)會含有活性氧，過量的活性氧能通過氧化反應(yīng)的形式，會造成各種功能障礙，嚴(yán)重會導(dǎo)致癌癥等疾病[13]，對于育肥豬來說，會影響其肉品質(zhì)，降低機(jī)體中的氧自由基，利于機(jī)體減少發(fā)生疾病的可能，提高抗氧化能力為之重要。本試驗研究表明，添加1%、3%、5%試驗組豬血清中的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性和總抗氧化能力（T-AOC）呈直線提升，其中5%丙二醛 （MDA）含量呈直線下降。相比試驗中對照組，添加5%試驗組豬血清中谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）有極顯著性差異（P＜0.01），總抗氧化能力（T-AOC）有顯著性差異（P＜0.05）。周億金[14]等在動物試驗中，得出結(jié)果是不同濃度的蚯蚓抗氧化提取物對成年小鼠血液的超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽過氧化物酶GSH-Px、過氧化氫酶CAT活性的升高和丙二醛MDA含量的減少均有不同程度的影響，結(jié)果與本試驗一致。徐麒麟[15]等在飼喂蚯蚓提取液原液對家蠶中腸氧化損傷、總抗氧化能力及抗氧化酶含量影響的試驗中，得出結(jié)論蚯蚓提取液可降低家蠶中腸 LDH 含量、提高抗氧化酶基因的表達(dá)水平等抗氧化能力，也表明本試驗結(jié)論得出的蚯蚓有提高動物機(jī)體抗氧化能力的作用。蚯蚓的藥用價值廣泛，是成本較低的蛋白質(zhì)資源，加上乳酸菌抗菌和增強(qiáng)免疫力等功能作用以及示范應(yīng)用普遍，聯(lián)合作用下在未來還會有新的發(fā)現(xiàn)，會為養(yǎng)殖畜牧行業(yè)創(chuàng)造更多的可能性。

4 結(jié)論

在本試驗的研究下，飼糧中添加乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓物能夠促進(jìn)育肥肉豬增重，同時能降低料重比，改善血液指標(biāo)，提高育肥豬的抗氧化能力，從而增加飼養(yǎng)肉豬過程中的經(jīng)濟(jì)效益，其添加5%的乳酸菌復(fù)合發(fā)酵蚯蚓對大長白育肥豬生長性能和抗氧化功能效果較好。