肉雞馬立克氏病的診斷

孫泉云 朱九超

上海市動物疫病預(yù)防控制中心，上海 201103

馬立克氏?。∕D）是由馬立克氏病病毒（MDV）引起的一種雞傳染性腫瘤病，以淋巴組織的增生和腫瘤形成為特征，外周神經(jīng)、性腺、虹膜、各種臟器、肌肉和皮膚發(fā)生單核細(xì)胞浸潤[1]。本病常見于50～70日齡的雞群，可引起較高的發(fā)病率和死亡率，是嚴(yán)重威脅養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病之一，且一旦發(fā)生無有效防控藥物。2021年1-4月，上海某區(qū)12家肉雞養(yǎng)殖場和專業(yè)戶飼養(yǎng)的肉雞群發(fā)生以消瘦、精神萎靡、陸續(xù)死亡、病程較長為特征的病例，經(jīng)臨床檢查和實驗室檢測診斷為馬立克氏病，現(xiàn)將有關(guān)診斷情況予以簡要報告。

1 臨床癥狀和剖檢變化

通過對12 家發(fā)病雞場（專業(yè)戶）的詢問了解、查看檔案資料以及對雞群的臨床檢查，發(fā)現(xiàn)雞群于50～60日齡出現(xiàn)臨床病癥，表現(xiàn)為打堆、廢食、消瘦、皮膚蒼白、羽毛粗亂、眼睛半閉、精神不振、共濟失調(diào)、肢體麻痹和癱瘓或顯現(xiàn)劈叉式體征，最終衰竭死亡，死亡率15%～90%，平均為35%，飼養(yǎng)的肉雞品種為嶺南黃，感染肉雞總數(shù)達(dá)13.7 萬羽。發(fā)病后，經(jīng)使用氨基糖苷類、磺胺類等抗菌素藥物治療無效。雞場（戶）按常規(guī)免疫程序開展了禽流感、新城疫、傳染性支氣管炎等疫苗的免疫，雞苗均來源于上海志忠禽業(yè)專業(yè)合作社，且雙方已有15年的供銷合作歷史，雛雞在孵化廳均已經(jīng)接種馬立克氏病疫苗，且所用疫苗和接種程序經(jīng)查規(guī)范。

剖檢可見明顯雞MD 病變，以內(nèi)臟型腫瘤、皮膚型腫瘤為主，偶見眼型腫瘤。在卵巢、肝臟、心臟、腎臟、脾臟、肺臟、腺胃、肌胃以及胰臟等內(nèi)臟器官均可發(fā)現(xiàn)腫瘤，腫瘤為圓形或近圓形結(jié)節(jié)，突出于臟器表面，質(zhì)地堅硬，呈灰白色。

2 實驗室檢測

2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

無菌采取病雞的肝臟、肺臟、脾臟、心臟等器官，接種于血瓊脂培養(yǎng)皿上，置于37 ℃溫箱培養(yǎng)3 d，觀察細(xì)菌生長及菌落形成。

2.2 瓊脂免疫擴散（AGID）試驗

取病雞含有羽髓的羽毛數(shù)根，將羽髓擠出與PBS混合均勻后備用。在制備好的瓊脂平板上打梅花形孔，然后將雞馬克立氏病病毒標(biāo)準(zhǔn)陽性血清加入到瓊脂平板中間孔內(nèi)，周邊孔則依次加入標(biāo)準(zhǔn)陽性抗原和待檢羽髓液，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中反應(yīng)，分別在24、48 h觀察結(jié)果。

2.3 PCR和ELISA試驗

取病雞的肝臟、肺臟、脾臟、心臟等器官剪碎、研磨，PBS 勻漿，離心，取上清提取核酸，采用PCR方法進行馬立克氏病病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、禽肺病毒和禽腺病毒的病原學(xué)檢測；取組織上清，采用ELISA 方法進行禽白血病病毒P27 抗原的檢測。

3 結(jié) 果

3.1 細(xì)菌培養(yǎng)

經(jīng)觀察，未見細(xì)菌生長和菌落形成。

3.2 瓊脂免疫擴散（AGID）試驗檢測抗原

待檢羽髓液與標(biāo)準(zhǔn)陽性血清孔間產(chǎn)生明顯可見沉淀線，且此沉淀線與標(biāo)準(zhǔn)血清與標(biāo)準(zhǔn)抗原孔間的沉淀線末端相融合，判定為陽性。

3.3 病毒檢測

經(jīng)PCR 檢測，僅馬立克氏病病毒為陽性，禽流感病毒、新城疫病毒、禽肺病毒和禽腺病毒均為陰性；經(jīng)ELISA檢測，禽白血病病毒P27抗原為陰性。

3.4 追溯調(diào)查

經(jīng)現(xiàn)場流行病學(xué)調(diào)查，初步認(rèn)為上海志忠禽業(yè)專業(yè)合作社由外省引入種蛋時未做好徹底消毒是引發(fā)此次疫情的主要風(fēng)險因素（該省不少雞場先于上海發(fā)生了馬立克氏病超強毒株感染），加之涉疫雞場（戶）棚舍簡陋、陰濕，雞群整體健康度差，促發(fā)MD疫情發(fā)生。

4 討 論

1）根據(jù)本次發(fā)病雞群的臨床癥狀和實驗室檢測結(jié)果，綜合判定為馬立克氏病。但此次疫情涉及上海市某區(qū)12家養(yǎng)雞場（專業(yè)戶），范圍廣、時間長、損失大，表明馬立克氏病仍然是危害養(yǎng)雞業(yè)的重要疫病，必須予以高度重視和持續(xù)嚴(yán)密防控。

2）隸屬于皰疹病毒科的MDV 對外界環(huán)境抵抗力強，感染雞場難以凈化和根除病毒，且自20 世紀(jì)80年代Richard 等[2]從HVT 免疫雞群中分離到超強MDV 毒株以來，野外毒株的毒力不斷變異趨強，已經(jīng)突破現(xiàn)有疫苗的免疫保護，給養(yǎng)雞業(yè)帶來嚴(yán)重的損失[3]。因此，養(yǎng)雞場（戶）一方面要落實嚴(yán)格的生物安全措施，防止因引種、引蛋而發(fā)生輸入性疫情，另一方面要了解和掌握本地區(qū)和毗鄰地區(qū)的雞群疫病動態(tài)，強化疫情監(jiān)測，從而有效預(yù)防疫病的發(fā)生。