血清lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性研究

周志衡， 黃志杰， 陳寶欣， 張雪姣， 陳文如

目前，我國居民原發(fā)性高血壓病的發(fā)病率有逐年增高的趨勢。流行病調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，我國18歲及以上居民原發(fā)性高血壓病患病率從1980年的7.7%上升至2018年的25.2%，現(xiàn)存患者數(shù)超過2.7億[1-2]。高血壓病已經(jīng)成為主要公共衛(wèi)生問題之一[3]，國內(nèi)外學者對高血壓的發(fā)生、發(fā)展機制進行了廣泛而深入的研究。長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是近年來在慢性病領(lǐng)域研究的熱點，其與許多疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后具有關(guān)聯(lián)。有研究顯示，lncRNA TUG1、lncRNA H19、lncRNA AK098656和lncRNA MALAT1等在血管重構(gòu)、誘發(fā)血管外周壓力增大、調(diào)節(jié)血管生成和血管疾病神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方面具有重要的調(diào)節(jié)作用[4-7]。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA-ENST00000414355具有調(diào)控細胞的DNA損傷與修復(fù)的功能[8]，但其在高血壓中的作用還未有報道。鑒此，本研究旨在探討人血清lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1研究對象 選擇2019年7月至2019年11月深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院收治的原發(fā)性高血壓患者360例(觀察組)。根據(jù)觀察組性別、年齡、籍貫、經(jīng)濟收入情況，按照1∶1配對原則選取同期于深圳市福田區(qū)第二人民醫(yī)院接受體檢的健康者360名(對照組)。兩組一般情況比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。所有研究對象的血液標本及信息收集均獲得患者的知情同意。

表1 兩組一般情況比較

1.2納入與排除標準

1.2.1 觀察組納入與排除標準 納入標準：(1)符合《中國高血壓防治指南(2018年修訂版)》[9]中關(guān)于原發(fā)性高血壓病的診斷標準；(2)新發(fā)高血壓患者，未服用過降壓藥；(3)年齡≥18歲。排除標準：(1)繼發(fā)性高血壓患者；(2)未能完成問卷調(diào)查和本次體檢相關(guān)項目者。

1.2.2 對照組納入與排除標準 納入標準：(1)年齡≥18歲；(2)既往無高血壓病史，且經(jīng)雙臂3次測量血壓值均符合收縮壓<140 mmHg和舒張壓<90 mmHg。排除標準：(1)合并惡性腫瘤、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病或自身免疫性疾病者；(2)合并精神病史或有精神病家族史者；(3)合并嚴重的心、肝、腎臟疾病者；(4)近期有感染或其他重大疾病史者。

1.3資料收集及相關(guān)判斷標準 通過問卷方式收集研究對象的年齡、性別、職業(yè)、既往病史、服藥史、吸煙、飲酒等情況。測量研究對象的血壓值、體質(zhì)量指數(shù)(Body Mass Index,BMI)等一般指標。以截止至受調(diào)查當天，在調(diào)查前30 d內(nèi)吸過煙，而且連續(xù)或累積吸煙6個月或以上者，則定義為有吸煙行為。以每周至少飲酒1次定義為有飲酒行為。以每周運動3次及以上，平均每次運動超過30 min定義為定期鍛煉。

1.4生化指標檢測 于清晨采集受試者空腹肘部靜脈血約3 ml。采用全自動生化分析儀(型號：7600-020，ISE)，血脂生化檢測試劑盒(博奧生物)檢測總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)、血糖。

1.5lncRNA-ENST00000414355水平檢測 采用含抗凝劑的紫色采血管采集5 ml靜脈血，4 ℃靜置30 min，室溫下3 000 r/min離心15 min，取上層血清，-80 ℃保存?zhèn)溆?。檢測時，解凍樣本，以Trizol法提取樣本總RNA，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(Fermentas K1622,Thermo Scientific公司)將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。應(yīng)用實時定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction，RT-qPCR)法檢測lncRNA-ENST00000414355水平，操作方法嚴格按照RT-qPCR試劑盒(Promega，美國)說明書進行。所用引物由上海生工公司合成，序列見表2。以β-actin為內(nèi)參，采用2-△△Ct法計算其相對表達水平。

表2 引物序列

2 結(jié)果

2.1兩組生活行為及臨床生化指標比較 兩組飲酒、定期鍛煉、糖尿病史情況，以及空腹血糖、TG、HDL水平比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。觀察組吸煙人數(shù)比例，以及BMI、TC、LDL水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。

表3 兩組生活行為及臨床生化指標比較

2.2兩組血清lncRNA-ENST00000414355的表達水平比較 RT-qPCR檢測結(jié)果顯示，觀察組血清lncRNA-ENST00000414355的相對表達量高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義[(7.15±0.87) vs (1.15±0.45)；t=116.518，P=0.000]。

2.3影響原發(fā)性高血壓發(fā)生的多因素logistic回歸分析結(jié)果 以是否患有原發(fā)性高血壓病為因變量(1=是，0=否)，將上述有統(tǒng)計學意義的指標[吸煙(1=有，0=無)、BMI、TC、LDL、lncRNA-ENST00000414355]作為自變量進行l(wèi)ogistic回歸分析，結(jié)果顯示，有吸煙行為、較高水平的BMI、TC和lncRNA-ENST00000414355是促進原發(fā)性高血壓發(fā)生的危險因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響原發(fā)性高血壓發(fā)生的多因素logistic回歸分析結(jié)果

2.4血清lncRNA-ENST00000414355與相關(guān)指標的相關(guān)性分析結(jié)果 Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，血清lncRNA-ENST00000414355水平與收縮壓、舒張壓、BMI、TC及LDL呈正相關(guān)(P<0.05)。見表5。

表5 血清lncRNA-ENST00000414355與相關(guān)指標的相關(guān)性分析結(jié)果

3 討論

3.1目前，高血壓病已經(jīng)成為我國最常見的慢性病之一，引起了各地醫(yī)療機構(gòu)和學者的重點關(guān)注?！敖】抵袊毙难芗膊》乐涡袆用鞔_提出，到2030年，我國30歲及以上居民的高血壓知曉率應(yīng)不低于65%，高血壓患者的規(guī)范管理率不低于70%，高血壓治療率和控制率應(yīng)持續(xù)提高[10]。并希望通過全社會的努力，做到人人知曉個人血壓、控制高血壓危險因素、自我血壓管理、注重合理膳食和酌情量力運動等。而“健康中國”行動計劃中，有11項行動與高血壓的防治相關(guān)[11]。

3.2近年來，國內(nèi)外學者對與高血壓發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后相關(guān)的生物標志物進行了廣泛的研究。其中，lncRNA與高血壓的關(guān)聯(lián)性研究越來越受到重視[12]。lncRNA是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200 nt的RNA分子，可調(diào)控多種生物學過程，并與一些疾病的發(fā)生、發(fā)展具有關(guān)聯(lián)，可作為疾病診斷、治療和預(yù)測預(yù)后的標志物[13-14]。Bayoglu等[15]的研究利用微陣列方法對自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)和健康大鼠心臟組織的基因表達情況進行了比較，發(fā)現(xiàn)在991個lncRNA中有145個的表達具有顯著差異，其中93個表達上調(diào)，52個表達下調(diào)；而基因富集分析顯示lncRNA CD-KN2B-AS1多態(tài)性可能導致高血壓患者的收縮壓增高。lncRNA可能參與了高血壓病的發(fā)生、發(fā)展，但其具體機制還有待闡明[4，16]。

3.3lncRNA-ENST00000414355是在第9號染色體上的非編碼RNA，位于第44021071位點到第44021414位點，全長343 nt。本課題組既往研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA-ENST00000414355在鎘毒性中具有多種調(diào)控功能，參與了細胞的DNA損傷、增殖和凋亡等生物學過程，并具有調(diào)控DNA損傷基因(ATM、ATR、ATRIP)和修復(fù)基因(DDB1、DDB2、OGG1、ERCC1、MSH2、RAD50、XRCC1和BARD1)表達水平的功能，這在大鼠動物模型和職業(yè)人群中得到了進一步驗證[8]。但其在高血壓疾病中的作用仍未明確，鑒此，本研究對lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的關(guān)聯(lián)性進行了探討。結(jié)果顯示，較高水平的lncRNA-ENST00000414355是促進原發(fā)性高血壓發(fā)生的危險因素，且血清lncRNA-ENST00000414355與收縮壓、舒張壓呈正相關(guān)。提示lncRNA-ENST00000414355參與了原發(fā)性高血壓病的發(fā)生、發(fā)展過程。有研究顯示，lncLSTR、lncRNA-DYNLRB2-2、lncRNA Lexis、lncRNA HULC和lnc-HC與血脂代謝相關(guān)[17-20]。本研究結(jié)果也顯示，血清lncRNA-ENST00000414355與BMI、TC及LDL呈正相關(guān)。

綜上所述，lncRNA-ENST00000414355與原發(fā)性高血壓病的發(fā)生具有關(guān)聯(lián)性。但其與原發(fā)性高血壓病的發(fā)展、預(yù)后的關(guān)系，以及對高血壓調(diào)控功能的具體機制有待進一步研究。