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    伴平滑肌分化的胃腸間質(zhì)瘤臨床病理特征研究

    2021-12-02 00:29:46伍金鳳秦亞萍陳靈鳳陳姿含陶海群
    中國(guó)臨床新醫(yī)學(xué) 2021年10期

    伍金鳳, 秦亞萍, 陳靈鳳, 陳姿含, 陶海群, 唐 娟

    胃腸間質(zhì)瘤(gastrointestinal stromal tumors,GISTs)是起源于Cajal間隙細(xì)胞(interstitial cell of Cajal,ICC)的非上皮源性腫瘤,是消化道最常見的間葉性腫瘤,約占消化道腫瘤的3%。GISTs可以發(fā)生在胃腸道的任何部位,但大部分發(fā)生于胃和小腸[1-2]。GISTs患者年齡分布廣泛,其中以40~80歲為高發(fā)年齡階段,且男性發(fā)病率略高于女性。GISTs的生物學(xué)行為極其復(fù)雜,是一種良惡性較難界定的腫瘤。已有研究發(fā)現(xiàn),間葉源性腫瘤包括GISTs、平滑肌肉瘤等都表現(xiàn)出肌分化的特點(diǎn)[3],且高分子量鈣調(diào)結(jié)合蛋白(H-caldesmon)、結(jié)蛋白(desmin)或平滑肌肌球蛋白重鏈(smooth muscle myosin heavy chain,SMMHC)[4]呈不同程度的陽性表達(dá)。本研究將通過分析平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin及SMMHC在GISTs中的表達(dá)情況來評(píng)估GISTs伴平滑肌方向分化的情況,總結(jié)伴有平滑肌方向分化GISTs的臨床病理特征,為GISTs的診治提供新的思路。

    1 資料與方法

    1.1一般資料 通過醫(yī)院病歷系統(tǒng)收集2016年4月至2019年11月桂林醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院收治的65例GISTs患者的病歷資料。年齡35~85(55.83±6.52)歲;男34例,女31例;病史(1.21±0.26)年?;颊呔ㄟ^手術(shù)方法切除病灶,65例GISTs發(fā)生在胃部27例(41.54%),小腸部18例(27.69%),結(jié)腸部5例(7.69%),十二指腸部6例(9.23%),直腸部9例(13.85%)。根據(jù)美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生署(National Institutes of Health,NIH)2008改良版的原發(fā)GISTs切除術(shù)后危險(xiǎn)度評(píng)估分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[5]:極低-低危44例(67.69%),中危15例(23.08%),高危6例(9.23%)。

    1.2納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):(1)病歷資料完整;(2)符合GISTs的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6],組織學(xué)形態(tài)符合典型的GISTs:CD117和Dog1免疫組化表達(dá)陽性。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)病理診斷不明確;(2)已行化療、放療等治療手段。

    1.3免疫組化檢測(cè)方法 采用鏈霉親和素-生物素復(fù)合物(streptavidin-biotin complex,SABC)法對(duì)組織芯片進(jìn)行處理,60 ℃烤片1 h,將芯片脫蠟,蒸餾水清洗3次,再使用磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline,PBS)浸泡5 min,后將芯片浸入檸檬酸緩沖液并置于高壓鍋內(nèi)加熱修復(fù)抗原(其中SMMHC使用胰酶+檸檬酸修復(fù),H-caldesmon及desmin使用乙二胺四乙酸二鈉緩沖液修復(fù)),冷卻以PBS進(jìn)行沖洗。3%雙氧水室溫孵育10 min,PBS重復(fù)沖洗3次,滴加一抗,4 ℃孵育過夜后使用PBS沖洗,再滴加生物素標(biāo)記后的二抗,室溫孵育30 min以PBS進(jìn)行沖洗,滴加二氨基聯(lián)苯胺(diaminobenzidine,DAB)顯色液孵育15 min后以自來水沖洗,最后使用蘇木精復(fù)染,酒精脫水后使用二甲苯進(jìn)行透明,封片并進(jìn)行觀察。以上所用試劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

    1.4觀察指標(biāo)及評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)

    1.4.1 免疫組化陽性評(píng)判標(biāo)準(zhǔn) H-caldesmon、desmin和SMMHC陽性信號(hào)均著色于細(xì)胞質(zhì)內(nèi),呈明顯的棕褐色或棕黃色。每例芯片均選擇10個(gè)以上高倍鏡視野(high power field,HPF)進(jìn)行分析后取平均值。以陽性細(xì)胞數(shù)大于總觀察細(xì)胞數(shù)的25%判定為陽性,否則為陰性[7]。以3個(gè)標(biāo)志物中任一指標(biāo)呈陽性判定為伴有平滑肌方向分化。

    1.4.2 核分裂象計(jì)數(shù)[8-9]評(píng)估系統(tǒng)均采用50 HPF[根據(jù)美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)(College of American Pathologists,CAP)和世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)的定義,50 HPF相當(dāng)于5 mm2],使用萊卡DM1000顯微鏡在熱點(diǎn)區(qū)域連續(xù)計(jì)數(shù)50個(gè)視野,最終統(tǒng)計(jì)核分裂總數(shù),核碎裂或凋亡不計(jì)入核分裂象。

    1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)(百分率)[n(%)]表示,采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行比較。等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.165例GISTs平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin、SMMHC的表達(dá)情況 在65例GISTs中,有43例(66.15%)伴有平滑肌方向分化,其中H-caldesmon陽性30例(46.15%),desmin陽性7例(10.77%),SMMHC陽性6例(9.23%)。免疫組化結(jié)果見圖1。

    圖1 GISTs免疫組化結(jié)果圖

    2.2平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin、SMMHC與患者臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果 H-caldesmon與腫瘤直徑、危險(xiǎn)分級(jí)情況存在顯著關(guān)聯(lián)性(P<0.05)。而desmin和SMMHC與性別、年齡、腫瘤直徑、核分裂數(shù)、危險(xiǎn)分級(jí)等情況均無顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。見表1。

    表1 平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin、SMMHC與患者臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果(n)

    2.3GISTs伴平滑肌分化方向情況與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果 GISTs伴平滑肌方向分化情況與腫瘤直徑、核分裂數(shù)和危險(xiǎn)分級(jí)情況存在顯著關(guān)聯(lián)性(P<0.05),而與年齡、性別無顯著關(guān)聯(lián)(P>0.05)。見表2。

    表2 GISTs伴平滑肌分化方向情況與臨床病理特征的關(guān)聯(lián)性分析結(jié)果(n)

    3 討論

    3.1GISTs是消化道常見的間葉組織源性腫瘤[10-11],其主要分型有以下4類:(1)平滑肌分化型;(2)神經(jīng)分化型;(3)平滑肌和神經(jīng)雙向分化型;(4)未分化型。有研究[12-13]發(fā)現(xiàn),間葉源性腫瘤包括GISTs、平滑肌肉瘤等都表現(xiàn)出肌分化的特點(diǎn)。對(duì)于ICC起源的研究[14]表明,平滑肌細(xì)胞和C-kit表達(dá)陽性的ICC起源于共同的祖細(xì)胞。上述研究結(jié)果提示伴有平滑肌方向分化的GISTs具有分化成熟的特點(diǎn),其腫瘤惡性程度較低。

    3.2大部分的GISTs都具有無法確定的惡性潛能,因此,疾病復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估顯得尤為重要。常用的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估方法是基于原發(fā)腫瘤的部位、腫瘤大小和核分裂指數(shù)來進(jìn)行評(píng)估[15],其在臨床應(yīng)用中的可行性在一些大型的回顧性研究[15-16]中也得到了驗(yàn)證。根據(jù)預(yù)后分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),本研究中65例GISTs患者中,極低-低危44例(67.69%),中危15例(23.08%),高危6例(9.23%)。

    3.3GISTs可以向平滑肌方向分化。據(jù)文獻(xiàn)[17]報(bào)道,在電鏡下觀察到ICC具有向平滑肌分化的超微結(jié)構(gòu),如豐富的線粒體、高爾基復(fù)合體、光面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和中間絲。約18%~40%的GISTs可不同程度地表達(dá)H-caldesmon和α-SMA等平滑肌源性標(biāo)志物,提示GISTs具有向平滑肌分化的潛能[18-20]。本研究選取了3個(gè)特異性較高的平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin及SMMHC。結(jié)果顯示,在65例GIST中,有43例(66.15%)伴有平滑肌方向分化,其中H-caldesmon陽性30例(46.15%),desmin陽性7例(10.77%),SMMHC陽性6例(9.23%)。有研究[21]指出,H-caldesmon與血管內(nèi)膜平滑肌的成熟有關(guān),并與急性冠脈綜合征的疾病進(jìn)展具有關(guān)聯(lián)性。另外,也有研究報(bào)道[22]顯示,H-caldesmon可作為乳腺癌細(xì)胞遷移和上皮細(xì)胞間質(zhì)化轉(zhuǎn)型的標(biāo)志物,并與患者的預(yù)后具有關(guān)聯(lián)性。本研究結(jié)果顯示,H-caldesmon與GISTs腫瘤直徑和危險(xiǎn)分級(jí)具有關(guān)聯(lián)性,腫瘤直徑越大,危險(xiǎn)分級(jí)越高,H-caldesmon的陽性表達(dá)率越低,提示H-caldesmon對(duì)GISTs患者預(yù)后的預(yù)測(cè)具有指導(dǎo)意義。另外,本研究結(jié)果顯示,desmin和SMMHC與性別、年齡、腫瘤直徑、核分裂數(shù)、危險(xiǎn)分級(jí)等情況均無顯著關(guān)聯(lián),分析原因可能與本研究例數(shù)較少有關(guān)。聯(lián)合H-caldesmon、desmin和SMMHC這3個(gè)標(biāo)志物時(shí)可提高GISTs平滑肌方向分化的檢出率,并顯示出與腫瘤直徑、核分裂數(shù)和危險(xiǎn)分級(jí)情況的關(guān)聯(lián)性。

    綜上所述,部分GISTs伴有平滑肌方向分化,平滑肌源性標(biāo)志物H-caldesmon、desmin、SMMHC與腫瘤直徑、核分裂數(shù)和危險(xiǎn)分級(jí)情況具有關(guān)聯(lián)性,對(duì)患者的預(yù)后判斷具有指導(dǎo)意義。

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