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    奶牛乳腺炎細(xì)胞模型的建立及中藥治療作用機(jī)制研究進(jìn)展

    2021-12-02 23:34:56申紀(jì)饒武小虎張惠婷李新圃丁學(xué)智嚴(yán)作廷李宏勝
    黑龍江動物繁殖 2021年6期
    關(guān)鍵詞:乳腺炎奶牛乳腺

    申紀(jì)饒,武小虎,張惠婷,李新圃,丁學(xué)智,嚴(yán)作廷,李宏勝

    (中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 蘭州畜牧與獸藥研究所/農(nóng)業(yè)部 獸用藥物創(chuàng)制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,蘭州 730050)

    奶牛乳腺炎是一種由機(jī)體、病原微生物和環(huán)境衛(wèi)生共同作用引起的奶牛常見病,發(fā)生范圍廣、發(fā)病率高,嚴(yán)重影響奶業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[1]。全世界約有三分之一的奶?;加懈鞣N類型的乳腺炎,而我國臨床型乳腺炎發(fā)病率高達(dá)33.41%,隱性乳腺炎陽性率更高達(dá)46.4%~85.7%,均高于國外,給我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失[2]。

    目前,獸醫(yī)臨床上主要采用抗生素防治奶牛乳腺炎,但抗生素的使用導(dǎo)致乳汁中的抗生素殘留和病原菌耐藥問題加劇,不僅危害了奶牛的健康,同時也影響了人們對綠色食品的追求[3]。中藥以純天然、資源豐富、低毒、低殘留、藥效明確、不易產(chǎn)生耐藥性、綠色環(huán)保等優(yōu)勢,成為未來研究防治奶牛乳腺炎藥物的發(fā)展方向[4]。

    中藥方劑的篩選及作用機(jī)制的研究通常需要建立相關(guān)的疾病模型,使用奶?;铙w研究開發(fā)新藥具有成本大、風(fēng)險(xiǎn)高且無法保證試驗(yàn)樣本同一性的問題。而牛乳腺上皮細(xì)胞(bMEC)作為乳腺中唯一具有分泌功能的細(xì)胞,不僅是實(shí)現(xiàn)泌乳的基礎(chǔ),而且是通過乳導(dǎo)管與外界接觸較緊密且具有免疫功能的細(xì)胞,是乳腺先天免疫的重要組成部分,與奶牛乳腺炎的發(fā)生有著密切聯(lián)系。bMEC廣泛分布在高度分支的乳腺實(shí)質(zhì)組織表面,其數(shù)量遠(yuǎn)多于其他參與抵御侵入病原菌的免疫細(xì)胞,在乳腺免疫中扮演重要角色,可以成為乳腺免疫的哨兵,它的免疫功能也因此受到人們的極大關(guān)注[5]。研究表明,bMEC可以表達(dá)多種細(xì)菌傳感器,即病原菌模式識別受體,可以識別病原體相關(guān)分子模式,進(jìn)而產(chǎn)生免疫應(yīng)答,釋放IL-8、IL-1β、IL-6、TNFα、IL-17A等炎癥介質(zhì),進(jìn)行免疫防御[6-7]。由于bMEC的免疫特性,目前它已經(jīng)廣泛用于生理、病理、藥理等方面的研究,以及研究泌乳機(jī)制、乳腺炎發(fā)病機(jī)制和藥物篩選等,為奶牛乳腺炎的研究節(jié)約了成本、提高了效率。因此,文章就中藥防治奶牛乳腺炎的研究現(xiàn)狀、體外乳腺炎細(xì)胞模型的建立、中藥干預(yù)奶牛乳腺炎細(xì)胞模型研究進(jìn)展及其作用靶點(diǎn)進(jìn)行綜述,以期為奶牛乳腺炎的臨床防治找到一種有效的解決措施。

    1 乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)特性研究

    從尊重生命和動物福利考慮,在藥物研究初期應(yīng)盡量減少實(shí)驗(yàn)動物和靶動物的使用;同時也為了避免體內(nèi)試驗(yàn)周期長、成本高、條件復(fù)雜且存在個體差異等諸多問題,細(xì)胞試驗(yàn)成了研究者的首選。因此,建立乳腺上皮細(xì)胞體外分離培養(yǎng)體系是開展乳房炎致病機(jī)制研究及治療藥物篩選工作的基礎(chǔ)。

    1.1 小鼠乳腺上皮細(xì)胞

    劉玉輝等[8]通過采取妊娠后期的健康SPF昆明鼠的乳腺組織,經(jīng)膠原酶消化等一系列操作后成功分離到高濃度的小鼠乳腺上皮細(xì)胞,其形態(tài)呈鋪路石樣,細(xì)胞聯(lián)系緊密,間隙清晰。高云航等[9]采取孕中期的健康小鼠,選用混合酶經(jīng)差時消化法及傳代培養(yǎng)、分離、純化到鋪路石樣的乳腺上皮細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞密度高時呈島嶼狀生長,密度低時各細(xì)胞的凸起和細(xì)胞外基質(zhì)形成拉網(wǎng)狀結(jié)果。易瓊等[10]利用改良過的混合酶(采用Ⅰ型、Ⅱ型膠原酶和胰蛋白酶混合(1∶1∶1))及差速貼壁法純化培養(yǎng)乳腺上皮細(xì)胞,72 h后細(xì)胞完全鋪開,呈典型的鋪路石樣。免疫熒光鑒定結(jié)果顯示,角蛋白18呈陽性反應(yīng)。方彧聃等[11]利用慢病毒載體,建立了穩(wěn)定表達(dá)牛催乳素的小鼠乳腺上皮細(xì)胞系,為體外研究乳腺生物反應(yīng)器提供了良好的細(xì)胞模型。劉玉輝等[8]培養(yǎng)的傳代小鼠上皮細(xì)胞雖出現(xiàn)鋪路石樣外觀,但細(xì)胞間隙大,排列不規(guī)則。

    1.2 牛乳腺上皮細(xì)胞

    利用牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行奶牛乳房炎的體外研究試驗(yàn)更具可靠性。目前關(guān)于牛乳腺上皮細(xì)胞的獲取有分離原代細(xì)胞和建立細(xì)胞系兩種方式。

    盧金霞等[12]采用組織塊培養(yǎng)法和乳汁分離法分離培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞,利用差時胰酶消化法純化奶牛乳腺上皮細(xì)胞,通過測細(xì)胞核型及骨架蛋白-角蛋白,對分離的牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果在顯微鏡下觀察可見,純化的乳腺上皮細(xì)胞為典型上皮細(xì)胞形態(tài),呈多角形或乳滴形,細(xì)胞核型正常,細(xì)胞特異性蛋白-角蛋白表達(dá)呈陽性,成功建立了奶牛乳腺上皮細(xì)胞模型。馬鵬睿[13]應(yīng)用組織塊種植法和胰酶消化法分離培養(yǎng)牛乳腺上皮細(xì)胞,鑒定為牛乳腺上皮細(xì)胞,為后續(xù)黏附素ClfA、EfB及FnBPA的抗體對金黃色葡萄球菌黏附牛乳腺上皮細(xì)胞的抑制試驗(yàn)建立了基礎(chǔ)。董海龍等[14]通過組織貼塊法取部分奶牛乳腺組織進(jìn)行培養(yǎng),通過免疫熒光鑒定、形態(tài)學(xué)觀察、掃描電鏡和透射電鏡檢測原代乳腺上皮細(xì)胞特性,結(jié)果顯示,分離到的牛乳腺上皮細(xì)胞呈鵝卵石樣,呈單層聚集,細(xì)胞狀態(tài)良好,培養(yǎng)至15代以上細(xì)胞增殖仍旺盛,可以作為奶牛乳腺相關(guān)研究重要工具。李勝利等[15]建立了一種單層致密奶牛乳腺上皮細(xì)胞的培養(yǎng)方法,通過該方法,細(xì)胞能形成橋粒和緊密連接,為多種與奶牛乳腺相關(guān)的試驗(yàn)研究提供了體外細(xì)胞模型。

    隨著目前研究的深入,學(xué)者們不僅使用原代細(xì)胞進(jìn)行研究,還旨在建立永生化的牛乳腺上皮細(xì)胞系。最常用的永生化方法包括病毒法、人端粒酶催化亞基法、引入癌基因或通過放射因素干擾細(xì)胞的衰老進(jìn)程,損害其衰老機(jī)制,最終使細(xì)胞獲得永生能力[16]。B.Zavizion等[17]利用SV40LTA轉(zhuǎn)染至原代牛乳腺上皮細(xì)胞,從而建立了細(xì)胞系。這種細(xì)胞系表現(xiàn)出典型的上皮細(xì)胞特征,能穩(wěn)定表達(dá)角蛋白、微絨毛、特殊乳白蛋白等。胡菡[18]通過一種攜帶SV40大T抗原基因的病毒感染原代牛乳腺上皮細(xì)胞,使其永生化,這種細(xì)胞能夠穩(wěn)定傳代到50代并具有上皮細(xì)胞標(biāo)志特征。He X.Y.等[19]通過重組腺病毒介導(dǎo)的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因建立了一種自發(fā)永生化的牛乳腺上皮細(xì)胞系,該細(xì)胞與原代細(xì)胞有同樣的基本特征。這些細(xì)胞系的建立為奶牛乳腺炎的研究提供了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

    2 牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥模型的建立

    體外建立乳腺炎細(xì)胞模型不僅是研究細(xì)菌感染乳腺炎的基礎(chǔ),還可利用此模型進(jìn)行藥物篩選。病原微生物對細(xì)菌的感染主要分為革蘭陽性菌和革蘭陰性菌,脂多糖(LPS)是革蘭氏陰性菌的主要成分,可被Toll-4受體識別,而脂磷壁酸(LTA)是革蘭氏陽性菌致病的主要成分,可被Toll-2受體識別,二者均可誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞模擬細(xì)菌感染。因此,分別對細(xì)菌及LPS和LTA誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞建立炎癥模型進(jìn)行綜述。

    2.1 革蘭氏陰性菌誘導(dǎo)

    LPS是革蘭氏陰性菌的主要成分,可以模擬革蘭氏陰性菌感染。利用LPS誘導(dǎo)小鼠乳腺上皮細(xì)胞建立模型,具有方便易得、價格低廉的優(yōu)點(diǎn),有助于深入研究該病的發(fā)病機(jī)制。郝俊芳等[20]以1,5,10μg/mL LPS處理小鼠乳腺上皮細(xì)胞48 h,結(jié)果顯示,與空白對照相比,LPS刺激后小鼠乳腺上皮細(xì)胞與炎癥相關(guān)的mRNA表達(dá)均呈現(xiàn)增加趨勢,并表現(xiàn)出明顯的劑量依賴性。Xiao H.B.等[21]用LPS處理小鼠及離體乳腺上皮細(xì)胞后發(fā)現(xiàn),脂多糖在小鼠乳腺炎體內(nèi)外模型中誘導(dǎo)炎癥反應(yīng),并提示NF-κB通路和OPN參與其中。在利用山羊乳腺上皮細(xì)胞建立模型方面也有文獻(xiàn)報(bào)道。O.B.Javier等[22]用1μg/mL LPS侵染山羊乳腺上皮細(xì)胞,結(jié)果CCL2、CXCL6、IL6、CXCL8、PTGS2、IFIT3、MYD88、NFKB1和TLR4的表達(dá)增加,該研究結(jié)果使人們對LPS刺激損害山羊乳腺組織的潛在機(jī)制有了一個基本的認(rèn)識。

    由于利用奶牛乳腺上皮細(xì)胞具有同源性,更受到學(xué)者們的認(rèn)可。張文耀等[23]利用LPS對奶牛乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行侵染,選用TNF-α作為建立乳腺炎細(xì)胞模型的指標(biāo),設(shè)置LPS濃度梯度0,5,10,20 ng/μL以確定最適濃度,然后根據(jù)推薦處理時間設(shè)置0,3,6 h,篩選最適濃度下能夠明顯上調(diào)TNF-α的最短處理時間作為建立模型的處理時間。結(jié)果顯示,在0~10 ng/μL濃度范圍內(nèi),LPS作用乳腺上皮細(xì)胞3 h,TNF-α基因表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平隨LPS處理濃度的增高而增加。安東等[24]利用0,1,10,100μg/mL LPS分別處理細(xì)胞6,12,24 h后收集細(xì)胞,檢測TNF-α的表達(dá)量。結(jié)果顯示,LPS處理后TNF-α、IL-6、BNBD-5表達(dá)量增加,確定炎癥模型建立成功。

    由于大腸桿菌是目前引起奶牛乳腺炎的最主要革蘭氏陰性菌,因此,為了更加真實(shí)地建立乳腺炎細(xì)胞模型,目前大多數(shù)學(xué)者還以大腸桿菌為研究對象。盧勁曄等[25]利用大腸桿菌侵染小鼠乳腺上皮細(xì)胞,大腸桿菌刺激原代培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞后TLR-4和MyD88蛋白表達(dá)顯著升高,乳腺上皮細(xì)胞中促炎性細(xì)胞因子,如TNF-α、IL-1β的表達(dá)及活性氧(ROS)的釋放均顯著升高,成功建立了細(xì)胞炎癥模型。于亞娟等[26]用熱滅活的大腸桿菌作用于牛乳腺上皮細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)大腸桿菌能促進(jìn)TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表達(dá),其表達(dá)水平具有劑量和時間依賴性。Gu N.J.等[27]用熱滅活的大腸桿菌(E.coli)感染原代牛乳腺上皮細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)幾乎所有編碼炎癥趨化因子相關(guān)基因被顯著激活,其中包括白細(xì)胞介素、β-防御素、血清淀粉樣蛋白A和觸珠蛋白相關(guān)的基因。

    2.2 革蘭氏陽性菌誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞炎癥模型

    LTA是革蘭氏陽性菌細(xì)胞壁的重要成分,能激發(fā)機(jī)體的炎癥反應(yīng)[28]。利用LTA刺激乳腺上皮細(xì)胞建立炎癥模型,可以模擬革蘭氏陽性菌感染,有利于深入研究革蘭氏陽性菌在奶牛乳腺炎中的致病機(jī)制。

    張文耀等[23]以0,1,10,20,40 ng/μL濃度梯度、以0,3,6,12,24 h時間梯度處理細(xì)胞,結(jié)果表明,20 ng/μL的LTA處理上皮細(xì)胞12 h可誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生明顯的細(xì)胞免疫應(yīng)答,為體外建立LTA誘導(dǎo)奶牛乳腺炎細(xì)胞模型的最適條件。Y.Strandberg等[29]用LTA誘導(dǎo)牛乳腺上皮細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)IL-1β、IL-8、TNF-α、CXCL6和β-防御素mRNA表達(dá)顯著增加,TLR2通路被激活。Wu Y.等[30]和A.A.I.Arbab等[31]在其研究中也有類似觀點(diǎn)。

    在革蘭氏陽性菌方面,目前研究最多而且比較成功的主要是金黃色葡萄球菌,該菌是引發(fā)奶牛乳腺炎最常見的病原微生物之一,目前的大多數(shù)研究也以此為出發(fā)點(diǎn)進(jìn)行深入研究。H.Lahouassa等[32]將金黃色葡萄球菌與乳腺上皮細(xì)胞共培養(yǎng),在感染后3,10,24 h測定相關(guān)炎性因子的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn),與未感染的乳腺上皮細(xì)胞相比,感染3 h后的細(xì)胞表達(dá)了更多的IL-1β、TNF-α、IL-8和GRO-α等炎癥因子。崔新潔等[33]用金黃色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)能刺激細(xì)胞表達(dá)IL-1β及TNF-α。趙凌等[34]發(fā)現(xiàn),不同濃度純化的金黃色葡萄球菌液感染牛乳腺上皮細(xì)胞后,細(xì)胞因子表達(dá)呈上升趨勢,其受體表達(dá)呈下降趨勢,并誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象。該試驗(yàn)利用金黃色葡萄球菌進(jìn)行體外感染試驗(yàn),為因革蘭氏陽性菌感染而導(dǎo)致乳腺炎的致病機(jī)制提供了科學(xué)依據(jù)。

    3 中藥防治奶牛乳腺炎的研究現(xiàn)狀

    中藥的藥理作用眾多,兼具抗病毒[35]、抗菌感染[36]??鼓[瘤和提高免疫力[37]等多種藥理作用。中藥能夠減小炎癥對機(jī)體的損傷,阻礙炎癥的發(fā)生發(fā)展,對炎性介質(zhì)的分泌具有重要影響。在奶牛疾病臨床上,不同劑型的多種中藥配方用于治療奶牛乳腺炎取得了顯著的效果[38]。

    朱永平[39]利用金銀花、紫花地丁、蒲公英等制成中藥方劑對患乳腺炎的116頭奶牛進(jìn)行治療,其中治愈99例,好轉(zhuǎn)12例,有效率達(dá)95.7%,且產(chǎn)奶量提高了9.2%。白冬冬等[40]用地膚子、蒲公英等制備的地膚通乳散治療奶牛乳腺炎,通過臨床試驗(yàn)進(jìn)行療效觀察,結(jié)果顯示,地膚通乳散對奶牛乳腺炎的治愈率和有效率分別高達(dá)63.16%和89.47%。范才良等[41]制備的一種內(nèi)服中藥蒲金散對奶牛乳腺炎的治療具有良好效果,同時兼具提高產(chǎn)奶量的作用。據(jù)報(bào)道,利用中藥和西藥對患乳腺炎奶牛進(jìn)行對比治療研究發(fā)現(xiàn),中藥治療總有效率高于抗生素治療[1]。不同劑型的中藥對奶牛乳腺炎的防治也顯示出良好的治療效果,例如透皮劑[42]、軟膏劑[43]和灌注劑[44]等。

    4 中藥干預(yù)奶牛乳腺炎細(xì)胞模型及其作用靶點(diǎn)研究進(jìn)展

    中藥會破壞細(xì)菌的細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,還能使細(xì)菌的代謝活動紊亂,從而起到殺菌作用。中藥具有顯著的抗炎作用,對臨床型乳腺炎和隱形乳腺炎的防治提供了科學(xué)依據(jù)。目前的研究表明,中藥干預(yù)奶牛乳腺炎細(xì)胞模型,主要是通過抑制NF-κB信號通路活化,降低下游炎性因子的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。

    Liang D.J.等[45]研究百里香酚對LPS刺激小鼠乳腺上皮細(xì)胞的抗炎作用,結(jié)果表明,百里香酚能明顯抑制LPS刺激的小鼠乳腺上皮細(xì)胞中TNF-α和IL-6的生成,iNOS和COX-2的表達(dá)也隨百里香酚劑量的增多而下降;此外,百里香酚阻斷了LPS刺激的mMECs中IκBα、NF-κBp65、ERK、JNK和p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)的磷酸化。說明百里香酚通過干擾NF-κB和MAPK信號通路的激活,在LPS刺激的乳腺上皮細(xì)胞中發(fā)揮抗炎作用。Liu M.J.等[46]驗(yàn)證咖啡酸對LPS誘導(dǎo)的原代牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抗炎特性,并闡明可能的潛在機(jī)制,結(jié)果表明,咖啡酸對LPS誘導(dǎo)的bMEC炎癥損傷的保護(hù)作用是通過減少NF-κB途徑中NF-α降解和p65磷酸化介導(dǎo)的促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生而得以實(shí)現(xiàn)。Yang W.H.等[47]研究了黃芩苷對LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥損傷的保護(hù)機(jī)制,結(jié)果發(fā)現(xiàn),LPS誘導(dǎo)奶牛乳腺上皮細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng),細(xì)胞活力下降,p-p65/p65和p-IκBα/IκBα比值上升,TNF-α和IL-1β的表達(dá)增加,而用黃芩苷處理后能抑制NF-κB的激活和HSP7上調(diào),減輕LPS誘導(dǎo)的奶牛乳腺上皮細(xì)胞的炎癥和凋亡。Wang J.J.等[48]研究了桑色素對脂多糖刺激原代牛乳腺上皮細(xì)胞的抗炎作用,結(jié)果發(fā)現(xiàn),桑色素以劑量依賴性的方式抑制LPS刺激的牛乳腺上皮細(xì)胞中TNF-α、IL-6和IL-1β的基因表達(dá),得出桑色素對LPS誘導(dǎo)的牛乳腺上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的保護(hù)作用可能與其抑制NF-κB/MAPK信號通路有關(guān)。S.Kang等[49]為確定植物皂苷是否能減輕LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)程度,先用植物皂苷預(yù)處理細(xì)胞,然后再用LPS處理,結(jié)果發(fā)現(xiàn)減弱了LPS誘導(dǎo)的NF-κB活化和超氧物的產(chǎn)生,下調(diào)了環(huán)氧合酶2(COX-2)的表達(dá)。

    除此之外,Miao J.F.等[50]探討了?;撬釋χ嗵牵↙PS)誘導(dǎo)的小鼠乳腺上皮細(xì)胞功能損害的保護(hù)和抗炎作用,他們發(fā)現(xiàn)?;撬峥擅黠@抑制LPS誘導(dǎo)的NAGase活性、NO濃度升高及TNF-α、IL-1β、IL-6和LF水平的升高,45 mmol/L?;撬犸@著增加了LPS誘導(dǎo)的功能失調(diào)的β-酪蛋白分泌。結(jié)果表明,?;撬峥娠@著抑制LPS誘導(dǎo)的炎癥因子釋放,增加乳腺上皮細(xì)胞分泌β-酪蛋白,為?;撬釋PS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞功能障礙的保護(hù)作用提供了可能的解釋。

    目前國內(nèi)外對中藥作用LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞模型的研究較為廣泛,但是對于中藥作用LTA誘導(dǎo)的細(xì)胞模型相關(guān)報(bào)道還較為稀缺。孫靜等[51]用40μg/mL LTA處理乳腺上皮細(xì)胞24 h后建立了炎癥損傷模型,并從10味中藥中篩選到5種對奶牛乳腺炎致病菌具有較好抑制作用的中藥,組成配方作用于炎性細(xì)胞。結(jié)果發(fā)現(xiàn)該組方對炎性損傷具有一定保護(hù)作用,對促炎性因子基因的表達(dá)產(chǎn)生抑制作用。此外,還有一些研究直接針對由金黃色葡萄球菌刺激牛乳腺上皮細(xì)胞引起的細(xì)胞炎癥。Wang K.等[52]的研究表明,中國蜂膠可以防止由金黃色葡萄球菌引起的牛乳腺上皮細(xì)胞活力受損,下調(diào)細(xì)胞炎癥因子(IL-1β、TNF-α)的表達(dá)。Zhang J.L.等[53]發(fā)現(xiàn),連翹苷A可以干擾由金黃色葡萄球菌引起的NF-κB和MAPKs信號通路的激活,在金黃色葡萄球菌刺激的牛乳腺上皮細(xì)胞中具有抗炎作用。

    5 前景及展望

    由于奶牛乳腺的特殊生理結(jié)構(gòu),易受病原微生物的入侵而發(fā)生炎癥,細(xì)菌侵入乳腺上皮細(xì)胞是建立乳腺內(nèi)感染的重要一步[22]。隨著抗生素耐藥性逐年增加,以及抗生素難以進(jìn)入細(xì)胞體內(nèi),導(dǎo)致其對病原菌導(dǎo)致的奶牛乳房炎治療效果降低,使得乳腺炎反復(fù)發(fā)作,難以根治[54]。中草藥含有多種生物有效成分,對奶牛疾病預(yù)防和治療效果良好,不良反應(yīng)小,幾乎無殘留、無抗藥性、對乳制品無副作用,作為奶牛乳腺炎的治療藥物克服了抗生素的某些不足,在防治奶牛乳腺炎方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢。目前,通過中藥治療主要通過TLR2/4與NF-κB信號通路降低炎性因子的表達(dá)。NF-κB是真核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Rel家族成員之一,是信號傳導(dǎo)通路的聚集點(diǎn),在調(diào)節(jié)炎癥和對外來刺激免疫應(yīng)答方面起著重要作用,NF-κB被激活后進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)與靶基因上的特定位點(diǎn)結(jié)合,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用,從而導(dǎo)致大量具有致熱活性炎性因子的合成和釋放,主要有TNF-α、IL-1β、IL-6等。中藥對乳腺上皮細(xì)胞作用抑制TLR2/4與NF-κB通路的激活,從而抑制炎癥因子的表達(dá),由此增加細(xì)胞活力,抵御病原微生物對奶牛乳腺的侵襲,達(dá)到防治奶牛乳腺炎的目的。目前的研究主要集中于單種中藥成分對乳腺上皮細(xì)胞的作用,對中藥組方的研究還比較罕見,對未來利用中藥組方防治奶牛乳腺炎、相互配伍取得更好療效值得期待。

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