白血病患者T淋巴細(xì)胞及免疫球蛋白檢測價(jià)值評價(jià)

葉筱穎，朱瑜，王子峰

（1.江西省上饒市人民醫(yī)院血液科，江西 上饒 334000；2.江西省上饒市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 上饒 334000）

白血病患者機(jī)體內(nèi)部克隆性白血病細(xì)胞大量分化繁殖導(dǎo)致機(jī)體的造血組織出現(xiàn)大量表達(dá)而產(chǎn)生的血液系統(tǒng)疾病，可同時(shí)累及多種器官，貧血和出血是白血病患者主要臨床現(xiàn)象，據(jù)調(diào)查顯示，我國每10萬例中就有3～4例為白血病患者，兒童占比較高，目前在惡性腫瘤中排名靠前[1-2]。白血病包括急慢性白血病、淋巴性白血病等，但白血病的具體發(fā)病原因尚未明確[3]。有文獻(xiàn)表明，白血病疾病發(fā)展過程與機(jī)體免疫功能發(fā)生變化有關(guān)，人體免疫功能狀態(tài)與白血病發(fā)展過程互相影響，與病情發(fā)展具有此消彼長的趨勢[4]，T淋巴細(xì)胞是在人胸腺傳出的特殊標(biāo)志細(xì)胞，能夠分泌Th1和Th2細(xì)胞因子在自身及體液免疫疾病中發(fā)揮抵抗感染作用，并發(fā)現(xiàn)多種腫瘤實(shí)體的發(fā)生與T淋巴亞群及Th1和Th2細(xì)胞因子有關(guān)。淋巴細(xì)胞亞群中各類細(xì)胞發(fā)揮的作用有較大的區(qū)別，CD3+代表亞群數(shù)量，CD4+是主要細(xì)胞能增強(qiáng)細(xì)胞的免疫能力，CD8+細(xì)胞具有毒細(xì)胞作用，表達(dá)升高時(shí)具有抑制CD4+細(xì)胞表達(dá)的作用[5-6]。CD4+CD8+保持在一定范圍內(nèi)具有平衡免疫細(xì)胞功能的作用，但是在白血病這種非實(shí)體腫瘤疾病的患者的體內(nèi)水平表達(dá)如何，相關(guān)文獻(xiàn)較少，本研究對多例白血病患者和健康人Th1及Th2、CD4+CD25+及免疫球蛋白進(jìn)行檢測，探討期臨床意義價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2015年1月至2019年1月在本院收治的45例初診和12例化療后緩解的急性白血病患者作為白血病組，初診患者男28例，女17例；平均年齡（45.36±7.45）歲；病情緩解者男7例，女5例；平均年齡（46.16±7.65）歲。另選取同期健康體檢者60名，男34名，女26名；平均年齡（45.38±8.69）歲。本研究經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合2006年NCCN中關(guān)于急性白血病中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，患者及家屬均簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：治療后再次感染而入院治療者；臨床資料不完整者。

1.3 方法

1.3.1 血液標(biāo)本 入院第2天清晨，抽取兩組患者靜脈血5 mL，2 mL靜脈血離心20 min，保留上清液，剩余3 mL放在EDTA無菌抗凝中備用。

1.3.2 Th1和Th2細(xì)胞因子檢測 采取ELISE試劑盒（江蘇寶萊生物）檢測患者血清中白介素-2（IL-2）、干擾素（IFN-γ）及白介素-4（IL-4）、白介素-10（IL-10）表達(dá)，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 免疫球蛋白檢測 采用免疫散射比濁法試劑盒（德沃生物科技）檢測患者血清中的免疫球蛋白（IgA、IgG、IgM）的表達(dá)。

1.3.4 T淋巴細(xì)胞亞群檢測 抗凝的血樣2 h內(nèi)采用PBS稀釋1∶1，在DMEM培養(yǎng)基中將淋巴細(xì)胞濃度調(diào)整為2×106個(gè)，30 min加入CD3+、CD4+、CD8+抗體，靜止20 min，離心后PBS緩沖液2次，采用流式細(xì)胞儀（美國，貝克曼庫爾特Navios）分析。

1.3.5 CD4+CD25+T細(xì)胞檢測方法 選擇兩只無菌FACS試管，加入20μCD4-FIIC、MouseIGgI-PE試管中，另一只試管中加入20μCD4-FIIC、CD25-PE。加入少量FACS溶血素，離心棄去上清液，PBS搖勻，4℃保存1 h，采用流式細(xì)胞儀檢測，結(jié)果采用CD4+CD25+T細(xì)胞、CD4+CD25+highT細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例。

1.3.6 乳酸托氫酶（LDH）檢測 血清中LDH采用日歷—7150型全自動(dòng)生化分析儀（日本）測定。

1.4 觀察指標(biāo) 健康組和白血病組患者在初診時(shí)及完全緩解時(shí)的白血病患者Th1及Th2、CD4+CD25+及免疫球蛋白和LDH因子表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以“”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組Th1及Th2細(xì)胞因子水平比較 白血病組患者Th1細(xì)胞中IL-2、IFN-γ表達(dá)低于健康組，緩解時(shí)白血病患者Th1細(xì)胞中IL-2、IFN-γ表達(dá)高于初診時(shí)，白血病組Th2細(xì)胞中IL-4、IL-10水平高于健康組（P＜0.05），緩解時(shí)白血病患者Th2細(xì)胞中IL-4、IL-10表達(dá)低于初診時(shí)（P＜0.05），見表1。

表1 兩組Th1及Th2細(xì)胞因子水平比較Table 1 Comparison of Th1 and Th2 cytokine levels between two groups

2.2 兩組免疫球蛋白水平比較 初診時(shí)白血病患者的免疫球蛋白IgA、IgM高于健康組，IgG低于健康組（P＜0.05），緩解時(shí)白血病患者免疫球蛋白IgG、IgM水平與健康組水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，IgA高于健康組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組免疫球蛋白水平比較（±s，g/L）Table 2 Comparison of immunoglobulin level between two groups(±s,g/L)

表2 兩組免疫球蛋白水平比較（±s，g/L）Table 2 Comparison of immunoglobulin level between two groups(±s,g/L)

注：IgA，免疫球蛋白A；IgG，免疫球蛋白G；IgM，免疫球蛋白M。與健康組比較，a P＜0.05；與初診時(shí)比較，b P＜0.05

組別健康組白血病組初診時(shí)緩解時(shí)例數(shù)60 45 12 IgA 1.34±0.79 7.74±0.53a 2.59±0.69ab IgG 9.25±1.97 8.43±1.34a 9.45±1.76b IgM 1.54±0.37 1.79±0.23a 1.47±0.26b

2.3 兩組T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 白血病組患者在初診時(shí)T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，CD8+高于健康組（P＜0.05），與初診時(shí)比較，緩解時(shí)白血病患者T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+上升，CD8+下降（P＜0.05），見表3。初診時(shí)比較，bP＜0.05

表3 兩組T細(xì)胞亞群水平比較（±s，%）Table 3 Comparison of T cell subpopulation level between two groups(±s,%)

表3 兩組T細(xì)胞亞群水平比較（±s，%）Table 3 Comparison of T cell subpopulation level between two groups(±s,%)

注：CD3+，成熟T淋巴細(xì)胞；CD4+，誘導(dǎo)性T細(xì)胞/輔助性T細(xì)胞；CD8+，抑制性T細(xì)胞/細(xì)胞毒性T細(xì)胞。與健康組比較，a P＜0.05；與

組別健康組白血病組初診時(shí)緩解時(shí)例數(shù)60 45 12 CD3+75.69±6.54 60.89±5.26a 69.32±3.27ab CD4+48.31±7.74 31.47±4.98a 39.77±3.64ab CD8+27.76±5.09 45.17±4.29a 36.26±3.89ab CD4+/CD8+1.84±0.23 1.02±0.18a 1.51±0.26ab

2.4 兩組患者外周血CD4+CD25+表達(dá)比較 白血病組患者外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+high高于健康組（P＜0.05），緩解時(shí)，患者外周血CD4+CD25+、CD4+CD25+high低于初診時(shí)（P＜0.05），見表4。

表4 兩組CD4+CD25+表達(dá)水平比較（±s）Table 4 Comparison of CD4+CD25+expression level between two groups(±s)

表4 兩組CD4+CD25+表達(dá)水平比較（±s）Table 4 Comparison of CD4+CD25+expression level between two groups(±s)

注：與健康組比較，a P＜0.05；與初診時(shí)比較，b P＜0.05

組別健康組白血病組初診時(shí)緩解時(shí)例數(shù)60 45 12 CD4+CD25+11.46±4.34 16.69±5.15a 14.26±3.48ab CD4+CD25+high 1.86±0.84 4.09±0.98a 2.89±0.93ab

2.5 乳酸托氫酶（LDH）檢測 白血病患者初診時(shí)乳酸托氫酶（LDH）水平高于健康組（P＜0.05），緩解時(shí)LDH水平低于初診時(shí)（P＜0.05），見圖1。

圖1 LDH水平Figure 1 LDH level

3 討論

急性白血病屬于非實(shí)性惡性腫瘤疾病，與機(jī)體內(nèi)免疫活性細(xì)胞的產(chǎn)生、分化和增殖有關(guān)，免疫細(xì)胞異常會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避宿主的免疫監(jiān)視，使外周淋巴細(xì)胞發(fā)生質(zhì)與量的改變，從而形成腫瘤產(chǎn)生。機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)腫瘤細(xì)胞免與免疫細(xì)胞密丟失不可分[7-8]。CD4+能活化T細(xì)胞和B細(xì)胞，而當(dāng)T細(xì)胞和B細(xì)胞活化時(shí)會(huì)釋放大量的細(xì)胞因子能夠促進(jìn)CD8+T細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng)，B細(xì)胞抗體受到影響，多角度多方面增強(qiáng)抗腫瘤細(xì)胞的能力。CD8+常在免疫應(yīng)答后期發(fā)揮作用，在靶細(xì)胞過程產(chǎn)生細(xì)胞毒性外，還可以促進(jìn)免疫抑制因子增加，削弱免疫應(yīng)答能力，并在過程中能阻斷CD4+作用。CD4+/CD8+在一定范圍內(nèi)能幫助維持免疫環(huán)境穩(wěn)定的功能，反映出免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力，但免疫平衡遭到破壞時(shí)，可產(chǎn)生繼發(fā)性免疫缺陷。

本研究結(jié)果顯示，白血病組患者Th1細(xì)胞中IL-2、IFNγ表達(dá)低于健康組，Th2細(xì)胞中IL-4、IL-10水平高于健康組（P＜0.05）。細(xì)胞因子具有直接殺死腫瘤細(xì)胞及抵抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞并間接起到抗病毒作用，是人體常見的抵抗腫瘤細(xì)胞的組成之一[9]。機(jī)體的細(xì)胞免疫主要是由Th1細(xì)胞因子中的IL-2及IFN-γ參與作用的，機(jī)體的體液免疫主要通過Th2細(xì)胞因子IL-4、IL-10發(fā)揮作用[10]。楊志剛等[11-12]研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2細(xì)胞因子異常是導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞逃避的主要原因，并發(fā)現(xiàn)急性白血病患者免疫平衡向Th2漂移，使機(jī)體內(nèi)出現(xiàn)腫瘤，但抑制作用無效的主要原因。因此，治療時(shí)可糾正Th1/Th2失衡，增強(qiáng)Th1細(xì)胞因子的能力，能抑制腫瘤細(xì)胞免疫逃竄，與劉曉等[13-14]研究結(jié)果一致。

白血病組患者在初診時(shí)免疫球蛋白低于健康組（P＜0.05），白血病機(jī)體免疫防御系統(tǒng)的組成部分包含Ig，并在抵抗腫瘤逃逸方面發(fā)揮重要作用[15]。本研究發(fā)現(xiàn)白血病患者體內(nèi)的IgA、IgG和IgM表達(dá)低于健康人。伍香玲[16]發(fā)現(xiàn)在急性白血病患者體內(nèi)發(fā)現(xiàn)Ig水平異常減少而導(dǎo)致患者的免疫功能減退有關(guān)，現(xiàn)在國內(nèi)外對白血病患者Ig血癥尚無統(tǒng)一定論，但多數(shù)認(rèn)為于B細(xì)胞功能失調(diào)有關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，白血病組患者在初診時(shí)T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+低于健康組，CD8+高于健康組（P＜0.05），緩解時(shí)與初診時(shí)相比T淋巴細(xì)胞CD3+、CD4+、CD4+/CD8+上升，CD8+下降（P＜0.05）。這個(gè)現(xiàn)象說明急性白血病機(jī)體確實(shí)存在機(jī)體免疫功能紊亂現(xiàn)象，CD8+占比相對增加而導(dǎo)致機(jī)體免疫抑制狀態(tài)在急性白血病發(fā)病過程中存在重要意義。研究發(fā)現(xiàn)急性白血病患者CD4+細(xì)胞占比降低，表示患者機(jī)體細(xì)胞免疫功能下降，CD8+細(xì)胞分化增多會(huì)使機(jī)體收到免疫反應(yīng)抑制，減少了抵抗白血病細(xì)胞的能力，使白血病細(xì)胞生長更加長久。

本研究發(fā)現(xiàn)在白血病患者體內(nèi)CD4+CD25+表達(dá)顯著高于健康人，提示急性白血病患者體內(nèi)可能存在某種促進(jìn)、CD4+CD25+Treg生成的產(chǎn)物，能促進(jìn)機(jī)體免疫抑制[17]。Sixi[18]發(fā)現(xiàn)過表達(dá)CD4+CD25+Treg時(shí)，白血病患者機(jī)體內(nèi)的免疫功能收到抑制，抵抗白血病細(xì)胞的能力減退，白血病細(xì)胞出現(xiàn)免疫逃逸，從而延長病程。另外，本研究發(fā)現(xiàn)LDH水平在白血病患者初診時(shí)水平遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于緩解時(shí)和健康人的水平。在白血病初診時(shí)表達(dá)升高與機(jī)體周圍血幼稚細(xì)胞數(shù)量呈正比，LDH表達(dá)升高主要源于白血病細(xì)胞，可代表白血病細(xì)胞負(fù)荷的物質(zhì)之一，與張娜等[19]研究結(jié)果一致。梁永生等[20]研究表明，在白血病患者細(xì)胞中LDH會(huì)在瀕臨死亡的細(xì)胞中滲出，表達(dá)活躍，并在白血病發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。

綜上所述，急性白血病患者免疫球蛋白表達(dá)異常，T淋巴細(xì)胞變化在急性白血病患者的治療指導(dǎo)具有臨床意義。