院外感染性肺炎分子檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用進(jìn)展

丁洪鋒

（天等縣疾病預(yù)防控制中心，廣西 崇左，532800）

院外感染性肺炎（ZCP）已成為公共衛(wèi)生問(wèn)題，其是指除院內(nèi)感染以外的感染性肺炎，主要由多類病原體所導(dǎo)致[1]。目前，臨床將ZCP可歸納為兩大類：一類為自然疫源性疾病原誘發(fā)肺炎，另一類為社區(qū)獲得性肺炎（CAP）[2]。CAP發(fā)病率逐年呈上升趨勢(shì)，已成為全球范圍內(nèi)高經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)疾病，以小兒、老年患者最為多見，且伴有不同程度的地區(qū)分布差異。而自然疫源性病源誘發(fā)的ZCP則以青壯年最為多見，且男性占比例較多[3]。而我國(guó)CAP患者只能培養(yǎng)常規(guī)病原體，且培養(yǎng)陽(yáng)性率相對(duì)免疫學(xué)檢測(cè)較低，一般為50%左右。同時(shí)部分對(duì)培養(yǎng)較高的細(xì)菌、病毒，無(wú)法通過(guò)常規(guī)分離培養(yǎng)進(jìn)行判斷[4]?，F(xiàn)階段，臨床多以病原常規(guī)分離培養(yǎng)、血清學(xué)檢測(cè)實(shí)施診斷，分子檢測(cè)應(yīng)用地區(qū)較為少見。但臨床醫(yī)師判斷ZCP患者病原學(xué)相關(guān)信息相對(duì)較為困難，治療時(shí)存在一定局限性，使其通常在等待結(jié)果期間，實(shí)施光譜抗生素及抗病毒治療，進(jìn)而直接增加抗生素濫用現(xiàn)象[5]。因此本文對(duì)ZCP實(shí)施分子檢測(cè)技術(shù)進(jìn)行分析，現(xiàn)綜述如下：

1 細(xì)菌性、支原體、衣原體感染ZCP分子檢測(cè)現(xiàn)狀

細(xì)菌感染屬于諸多地區(qū)，誘發(fā)CAP的關(guān)鍵因素?，F(xiàn)階段，以呼吸道致病菌的實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）的方案已產(chǎn)生，能夠在較短時(shí)間內(nèi)，檢測(cè)多類常見致病菌，具有較佳的特異性及敏感度，特別是肺炎克雷伯菌、肺炎鏈球菌等[6]。而對(duì)呼吸道標(biāo)本分別實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)和細(xì)菌培訓(xùn)，將兩者實(shí)施聯(lián)合試驗(yàn)，則可有效提高金黃色葡萄球菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌等檢出率[7]。

1.1 嗜肺軍團(tuán)菌感染的ZCP分子檢測(cè)嗜肺軍團(tuán)菌的分子檢測(cè)技術(shù)具有多種，其暴露核酸分型鑒別技術(shù)、PCR相關(guān)技術(shù)、分子雜交的探針技術(shù)，其中以熒光定量PCR最為多見[8]。相關(guān)學(xué)者，將熒光定量PCR應(yīng)用于肺炎患者呼吸道、血清標(biāo)本的檢測(cè)，也有學(xué)者，通過(guò)多重?zé)晒舛縋CR技術(shù)檢測(cè)不同團(tuán)菌屬[9]。而我國(guó)也具有嗜肺軍團(tuán)菌檢測(cè)方法的報(bào)道，通過(guò)嗜肺軍團(tuán)菌mip基因，制定相關(guān)引物，該技術(shù)具有安全性高、靈敏度高等優(yōu)勢(shì)[10]。

1.2 肺炎支原體感染ZCP分子檢測(cè)PCR檢測(cè)技術(shù)已在肺炎支原體疾病中得到廣泛應(yīng)用，其安全性、準(zhǔn)確度以及靈敏度明顯優(yōu)于血清抗體檢測(cè)[11]。相關(guān)學(xué)者，選擇220例肺炎患兒肺泡灌洗液實(shí)施PCR檢測(cè)，結(jié)果顯示，肺炎支原體陽(yáng)性率可達(dá)到50%。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR與傳統(tǒng)PCR相比較，更加簡(jiǎn)便[12]。

1.3 肺炎衣原體感染ZCP分子檢測(cè)PCR技術(shù)能夠準(zhǔn)確、快速檢測(cè)肺炎支原體。有關(guān)學(xué)者選擇PCR技術(shù)篩選93例感染肺炎患者，其中肺炎衣原體感染率可達(dá)到32.6%[13]。而實(shí)時(shí)熒光定量PCR法與熒光抗體法，具有更高的檢出率，能夠用于臨床診斷[14]。

2 病毒感染ZCP分子檢測(cè)現(xiàn)狀

而由病毒所誘發(fā)的ZCP，其流行特點(diǎn)、感染癥狀與細(xì)菌較為相似，故單一依據(jù)臨床癥狀、分離培養(yǎng)進(jìn)行檢測(cè)病毒，存在明顯局限性[15]。國(guó)內(nèi)外諸多學(xué)者顯示，通過(guò)分子診斷技術(shù)，對(duì)不同病毒實(shí)施檢測(cè)方法，PCR技術(shù)已在應(yīng)用于病毒性肺炎檢測(cè)，以逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT—PCR)使用較多，可適用于多類病毒，但檢測(cè)非典（SARS）病毒時(shí)，疾病早期RT—PCR敏感性較低[16]。

3 寄生蟲造成的ZCP分子檢測(cè)

寄生蟲誘發(fā)ZCP于臨床較為少將，該癥狀、影響以及生化檢查表現(xiàn)，與細(xì)菌或病毒造成的肺炎差異較低，故極易增加誤診風(fēng)險(xiǎn)。而造成肺炎的寄生蟲包括多類，如溶組織阿米巴、瘧原蟲、利什曼原蟲、弓形蟲、蛔蟲等[17]。在檢測(cè)蛔蟲時(shí)，一般選擇Western blot技術(shù)，而隨著分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的完善，諸多寄生蟲檢測(cè)已逐步實(shí)施PCR技術(shù)[18]。

4 真菌造成的CAP分子檢測(cè)

近年來(lái)，全國(guó)真菌感染發(fā)病率逐年呈上升趨勢(shì)，一般以假絲酵母菌、毛霉、新生隱球菌、曲霉等，被公認(rèn)為主要的機(jī)會(huì)致病菌，但目前在淺白隱球菌等不常見的真菌感染，明顯呈上升趨勢(shì)，故受到諸多醫(yī)學(xué)者的廣泛關(guān)注。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，基于核酸的探究，能夠補(bǔ)充常規(guī)真菌檢測(cè)方案。目前，用于診斷真菌性疾病分子手段以PCR最為常見，其特異性、靈敏度均需有待上升。通常PCR局限性，無(wú)法合理分辨定植真菌和致病真菌，而實(shí)時(shí)熒光定量PCR則可進(jìn)行[19]。大量文獻(xiàn)證實(shí)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR能夠替代免疫熒光法。但現(xiàn)階段，分子方案于檢測(cè)真菌感染方面，伴有不同程度的缺陷性，如真菌細(xì)胞壁無(wú)法穿透，獲得完整真菌難度系數(shù)較大，諸多商業(yè)生成的試劑和血管，伴有真菌DNA污染，造成實(shí)驗(yàn)誘發(fā)假陽(yáng)性結(jié)果，同時(shí)真菌分子檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)階段，尚未統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)[20]。

5 小結(jié)

綜上所述，于我國(guó)醫(yī)療系統(tǒng)中，臨床專注于治療，雖診斷屬于最佳有效的前提，但受到多類因素的干擾，部分更先進(jìn)、更準(zhǔn)確、更快速的診斷措施，無(wú)法在臨床得到廣泛應(yīng)用。同時(shí)疾控部分致力于疾病的檢測(cè)，雖研究部分更先進(jìn)的方案，但缺乏與臨床的充分銜接。故疾控部門需與臨床緊密結(jié)合互動(dòng)，進(jìn)而為診斷及治療ZCP奠定一定基礎(chǔ)。