大承氣湯對(duì)不完全性腸梗阻模型大鼠回盲部組織病理改變的影響及作用機(jī)制研究

程華初，徐琦，楊茜蕓，尹抗抗，譚達(dá)全

〔摘要〕 目的 研究大承氣湯對(duì)不完全性腸梗阻模型動(dòng)物回盲部組織病理改變及炎性物質(zhì)釋放的影響，探討其作用機(jī)制。方法 選用健康SD大鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為假手術(shù)組、空白組、模型組和大承氣湯高、中、低劑量組，每組20只。采用絲線結(jié)扎法制備不完全性腸梗阻模型，大承氣湯高、中、低劑量組分別給予11.6、5.8、2.9 g/（kg·d）劑量大承氣湯灌胃給藥，給藥體積均為10 mL/（kg·d），空白組、假手術(shù)組、模型組灌胃相同體積的0.9%氯化鈉注射液，均連續(xù)灌胃3 d。采用結(jié)腸損傷評(píng)分評(píng)價(jià)回盲部黏膜損傷指數(shù);采用HE染色觀察回盲部黏膜形態(tài)學(xué)改變;采用ELISA法檢測(cè)血清白細(xì)胞介素-1α（IL-1α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-18（IL-18）、一氧化氮合成酶（eNOS）水平;采用qPCR法檢測(cè)回盲部組織中IL-1ra、IL-1β、IL-1R、eNOS、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）、胱冬肽酶-1（Caspase-1） mRNA含量。結(jié)果 模型組大鼠腸組織病理呈現(xiàn)黏膜損傷、隱窩破壞、黏膜水腫、間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等一系列炎性損傷。與空白組和假手術(shù)組比較，模型組黏膜損傷指數(shù)均增高（P<0.01或P<0.05），表明造模成功;與模型組比較，大承氣湯各劑量組黏膜損傷指數(shù)降低（P<0.01或P<0.05）。與空白組和假手術(shù)組比較，模型組血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS水平及腸組織中IL-1ra、IL-1β、IL-1R、eNOS、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平明顯升高（P<0.05或P<0.01）。與模型組比較，大承氣湯各劑量組大鼠血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS分泌水平均能不同程度下調(diào)（P<0.01），大鼠腸組織NLRP3、eNOS、Caspase-1 mRNA表達(dá)水平下調(diào)（P<0.05或P<0.01）;大承氣湯中、高劑量組大鼠腸組織中IL-1rα、IL-1β、IL-1R、ASC、Caspase-1 mRNA表達(dá)降低（P<0.05或P<0.01）;大承氣湯低劑量組大鼠腸組織中IL-1rα、IL-1R、Caspase-1 mRNA表達(dá)降低（P<0.05或P<0.01）。結(jié)論 大承氣湯可有效改善不完全性腸梗阻模型大鼠腸組織病理?yè)p傷，減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)NLRP3、ASC、Caspase-1的失衡。

〔關(guān)鍵詞〕 不完全性腸梗阻;大承氣湯;回盲部黏膜損傷;炎性因子

〔中圖分類號(hào)〕R285.5? ? ? ?〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ? 〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.11.005

Effect and Mechanism Research of Ileocecal Histopathological Changes of Incomplete

Intestinal Obstruction Model Rats by Dachengqi Decoction

CHENG Huachu1， XU Qi2， YANG Qianyun1， YIN Kangkang1， TAN Daquan1*

（1. Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China;

2. Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410006， China）

〔Abstract〕 Objective To study the effect of Dachengqi Decoction on the ileocecal histopathological changes and the release of inflammatory substances in animal models of incomplete intestinal obstruction， and to explore its mechanism of action. Methods A total of 120 healthy SD rats were selected， half male and half female， and randomly divided into sham operation group， blank group， model group and Dachengqi Decoction high， medium and low dose groups， with 20 rats in each group. The incomplete intestinal obstruction model was prepared by silk ligation， and the high， medium， and low dose of Dachengqi Decoction group were administered by intragastric administration. The doses were 11.6， 5.8， 2.9 g/（kg·d）， respectively， the administration volume was 10 mL/（kg·d）， the blank group， sham operation group， and model group were given the same volume of 0.9% sodium chloride injection for 3 consecutive days. The ileocecal mucosal injury index was evaluated by the colon injury score， the morphological changes of the ileocecal mucosa were observed by HE staining， and the serum interleukin-1α （IL-1α） and interleukin-1β （IL-1β）， interleukin-6 （IL-6）， interleukin-18 （IL-18）， nitric oxide synthase （eNOS） levels were detected by ELISA， and qPCR method was used to detect IL-1ra， IL-1β， IL-1R， eNOS， nucleotide binding oligomerization domain like receptor protein 3 （NLRP3）， apoptosis-related spot-like protein （ASC）， Caspase-1 mRNA content. Results The pathology of the intestinal tissue of rats in the model group showed a series of inflammatory injuries such as mucosal injury， crypt destruction， mucosal edema， interstitial edema， and inflammatory cell infiltration. Compared with the blank group and the sham operation group， the mucosal injury index score of the model group increased （P<0.01 or P<0.05）， indicating that the model was successful. Compared with model group， the mucosal injury index score of Dachengqi Decoction groups was decreased （P<0.01 or P<0.05）. Compared with the blank group and the sham operation group， the serum levels of IL-1α， IL-1β， IL-6， IL-18， and eNOS in the model group and intestinal tissues IL-1ra， IL-1β， IL-1R， eNOS， NLRP3， ASC and Caspase-1 mRNA were significantly increased （P<0.01 or P<0.05）. Compared with model group， serum levels of IL-1α， IL-1β， IL-6， IL-18， and eNOS in Dachengqi Decoction groups were down-regulated to varying degree levels （P<0.01）， the mRNA expression levels of NLRP3， eNOS and Caspase-1 in rat intestine were down-regulated （P<0.05 or P<0.01）; the mRNA expression levels of IL-1ra， IL-1β， IL-1R， ASC and Caspase-1 were decreased in Dachengqi Decoction medium dose and high dose groups （P<0.05 or P<0.01）; the mRNA expression levels of IL-1ra， IL-1R and Caspase-1 in intestinal tissue of rats in Dachengqi Decoction low dose group decreased （P<0.05 or P<0.01）. Conclusion Dachengqi Decoction can effectively improve the pathological damage of intestinal tissue in rats with incomplete intestinal obstruction， reduce inflammation， and regulate the imbalance of NLRP3， ASC， and Caspase-1.

〔Keywords〕 incomplete intestinal obstruction; Dachengqi Decoction; ileocecal mucosal injury; inflammatory factors

腸梗阻（intestinal obstruction）是指仼何原因引起的腸內(nèi)容物不能正常運(yùn)行或通過發(fā)生障礙，其顯著的臨床癥狀為腹痛、腹脹、嘔吐、肛門停止排便排氣[1]。臨床根據(jù)梗阻的程度可分為完全性腸梗阻和不完全性腸梗阻。不完全性腸梗阻是外科常見疾病，也是內(nèi)科各種疾病伴隨的常見并發(fā)癥，異物、結(jié)石、寄生蟲等導(dǎo)致的腸腔堵塞及腸扭轉(zhuǎn)、腹腔腫瘤、腹外疝等引起的腸管受壓和腸壁病變等均可導(dǎo)致，不僅可以引起腸管本身病變，還可致全身生理功能紊亂及腸道功能障礙、衰竭，最終發(fā)展為多器官功能障礙綜合征[2]。

本病屬于中醫(yī)學(xué)“腸結(jié)”“關(guān)格”“腹痛”“積聚”等范疇，以痞（心下悶塞堅(jiān)硬）、滿（胸脅脘腹脹滿）、燥（腸有燥糞，干結(jié)不下）、實(shí)（腹中硬滿，痛而拒按，大便不通）四大主證為主要表現(xiàn)，為陽(yáng)明腑實(shí)證，主要病機(jī)為氣機(jī)紊亂、實(shí)熱與積滯互結(jié)、濁氣填塞、腑氣不通，治療當(dāng)急開其閉，佐以散結(jié)氣、活血脈[3-4]。大承氣湯由大黃、厚樸、枳實(shí)、芒硝組成，主治陽(yáng)明腑實(shí)證、陽(yáng)熱實(shí)證、急下證?！秱摗返?15條載：“陽(yáng)明病，譫語(yǔ)、有潮熱、反不能食者，胃中必有燥屎五六枚也;若能食者，但硬耳，宜大承氣湯下之。”臨床研究[5-7]表明，使用大承氣湯或以其為基礎(chǔ)的加減方治療可收到較好的療效。本研究采用絲線結(jié)扎法制備不完全性腸梗阻大鼠模型，從現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)角度探討大承氣湯對(duì)模型動(dòng)物炎性物質(zhì)釋放以及腸道形態(tài)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

選用健康SD大鼠120只，雌雄各半[由湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（湘）2016-0002]，體質(zhì)量200～240 g。飼養(yǎng)條件：SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)室，單籠喂養(yǎng)，室溫26 ℃，相對(duì)濕度50%～60%。定時(shí)通風(fēng)換氣，自然明暗周期。實(shí)驗(yàn)前檢疫和適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，各項(xiàng)操作均符合動(dòng)物倫理相關(guān)規(guī)定。

1.2? 藥物

大承氣湯藥物組成：大黃12 g，厚樸24 g，枳實(shí)12 g，芒硝9 g。超微飲片，購(gòu)買于湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中藥房。先煎枳實(shí)、厚樸約25 min，納入大黃煎煮15 min，加入溶化芒硝約2～3 s。分別濃縮至3種不同濃度，每毫升含生藥1.16、0.58、0.29 g，4 ℃冷藏備用。

1.3? 主要試劑

10%水合氯醛（長(zhǎng)沙夏威生物科技公司，批號(hào)20181213）;4%多聚甲醛（長(zhǎng)沙夏威生物科技公司，批號(hào)20181114）;0.9%氯化鈉注射液（山東芥都藥業(yè)有限公司，批號(hào)2018071510）;蘇木素-伊紅染色液（湖南艾佳生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)P032IH）;中性樹膠（湖南艾佳生物科技股份有限公司，貨號(hào)P033IH）;二甲苯（上海國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：10023418）;無(wú)水乙醇（上海國(guó)藥集團(tuán)藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：10009218）;HE染色試劑盒（麗欣生物科技有限公司）;TRIZOL試劑（廣東東盛生物科技有限公司，貨號(hào)：R1022）;DS2000 marker（廣東東盛生物科技有限公司，貨號(hào)：M1102）;SYBR Green qRCR Mix（廣東東盛生物科技有限公司，貨號(hào)：P2092）;DEPC（美國(guó)Sigma公司，貨號(hào)V900882）;Reverse Transcription System[普洛麥格（北京）生物技術(shù)有限公司，A5001];RT-PCR引物（上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司）。

1.4? 主要儀器

DNM-9602型酶標(biāo)儀（北京普朗公司）;A0.820H型切片機(jī)（美國(guó)永生公司）;AE260型電子天平（梅特勒一托利多公司）;FA1004型電子分析天平（上海天平儀器）;FA1004型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（上海天平儀器廠）;TD24-WS型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)（湖南賽特湘儀離心機(jī)儀器有限公司）;FS-CJ-2F型超凈工作臺(tái)（蘇州市馮氏實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)備有限公司）;DMBS-2231型攝影生物顯微鏡（廈門麥克奧迪公司）;YT-6C型生物組織攤烤片機(jī)（亞光醫(yī)用電子技術(shù)有限公司）;P031IH型防脫載玻片（湖南艾佳生物技術(shù)有限公司）;AE41型光學(xué)顯微鏡（麥克奧迪）;DYY-6C型電泳儀（北京六一儀器廠）;7300型熒光定量PCR儀賽[默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司]。

2 方法

2.1? 動(dòng)物分組與造模

實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性常規(guī)飼養(yǎng)7 d，期間自由獲取食物與水。遵從隨機(jī)、均衡原則，隨機(jī)選取20只為假手術(shù)組、20只為空白組，均雌雄各半，余80只按照絲線結(jié)扎法制備不完全性腸梗阻模型[8]。造模方法：大鼠禁食24 h，用10%水合氯醛（300 mg/kg）麻醉，備皮后碘伏消毒，乙醇脫碘后于腹中線下1/3處開腹，暴露回盲部，用直徑為3.2 mm的中心靜脈管與回腸腸管并排放置，在距回盲部1 cm處用絲線繞過腸管和中心靜脈導(dǎo)管一并結(jié)扎，最后抽出中心靜脈導(dǎo)管，造成不完全性腸梗阻，將腹壁逐層縫合。造模后大鼠統(tǒng)一右側(cè)臥位置于鼠籠中，待大鼠蘇醒。術(shù)后注意大鼠的保暖和傷口護(hù)理，保持籠內(nèi)墊料的干爽舒適，避免傷口感染，術(shù)后繼續(xù)禁食6 h后予以常規(guī)飼養(yǎng)。根據(jù)回盲部黏膜損傷指數(shù)評(píng)價(jià)造模是否成功[9]。假手術(shù)組麻醉、開腹等方法同前，只用針線穿透腸系膜而不結(jié)扎，空白組不做任何處理。將造模成功的80只大鼠隨機(jī)分為模型組和大承氣湯高、中、低劑量組（以下簡(jiǎn)稱高、中、低劑量組），每組20只，雌雄各半。

2.2? 給藥方法

連續(xù)3 d每天早晨9點(diǎn)進(jìn)行灌胃給藥。大承氣湯高、中、低劑量組予等體積高、中、低劑量大承氣湯灌胃，灌胃劑量根據(jù)人與大鼠的體表面積進(jìn)行換算，3種劑量呈等比數(shù)列4∶2∶1，分別為11.6、5.8、2.9 g/（kg·d），給藥體積均為10 mL/（kg·d）[10]?？瞻捉M、假手術(shù)組、模型組灌胃相同體積的0.9%氯化鈉注射液。

2.3? 標(biāo)本采集

各組取10只大鼠，麻醉后股動(dòng)脈采血，離心得血清后處死，血清-80 ℃凍存，即刻剪取回盲部組織，冰0.9%氯化鈉注射液沖洗腸腔內(nèi)容物后，無(wú)菌濾紙吸干水分，肉眼觀察回盲部后立即浸泡于10%甲醛中，固定。各組剩余10只大鼠麻醉后處死，即刻剪取回盲部組織，冰0.9%氯化鈉注射液沖洗腸腔內(nèi)容物后，無(wú)菌濾紙吸干水分，置于液氮中，備用。

2.4? 指標(biāo)檢測(cè)

2.4.1? 回盲部黏膜形態(tài)學(xué)改變? 各組大鼠予10%水合氯醛麻醉，處死大鼠，沿術(shù)口開腹，剪取回盲部組織，浸泡于4%多聚甲醛中固定。采用HE染色法，經(jīng)脫蠟、水化、染色、分化、透明、封片，進(jìn)行鏡檢。

2.4.2? 回盲部黏膜損傷指數(shù)? 參照Araki Y[11]及Yulpinar MA[12]結(jié)腸損傷評(píng)分進(jìn)行，對(duì)黏膜損傷、隱窩破壞、黏膜水腫、間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)5種組織學(xué)表現(xiàn)分別計(jì)分，根據(jù)各組織的無(wú)、輕、中、重的損傷程度分別計(jì)0、1、2、3分。

2.4.3? 血清促炎細(xì)胞因子表達(dá)? 采用ELISA法檢測(cè)各組大鼠血清白細(xì)胞介素-1α（IL-1α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）、白細(xì)胞介素-18（IL-18）、一氧化氮合成酶（eNOS）水平。

2.4.4? 盲部組織中炎性因子表達(dá)? 采用qPCR法檢測(cè)各組大鼠回盲部組織中IL-1ra、IL-1β、IL-1R、eNOS、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（NLRP3）、凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）、胱冬肽酶-1（Caspase-1） mRNA含量。引物設(shè)計(jì)見表1。

2.5? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以“x±s”表示，對(duì)樣本先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊時(shí)，用One-Way ANOVA檢驗(yàn)，并用LSD法進(jìn)行組間的多重比較;方差不齊時(shí)，用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，先用Kruskal-Wallis H比較總的差異，再用Mann-Whitney U進(jìn)行兩組之間比較。計(jì)數(shù)資料采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)多樣本比較的秩和檢驗(yàn)。同時(shí)采用Pearson相關(guān)系數(shù)分析藥物劑量與不同指標(biāo)的相關(guān)密切程度。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1? 各組大鼠回盲部組織病理改變

從切片中可見，造模后，上皮層被破壞黏膜層中出現(xiàn)大量淋巴細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，而上皮細(xì)胞可見細(xì)胞間質(zhì)水腫，界限不清，細(xì)胞腫脹、壞死、脫落。治療各組的損傷情況各異，對(duì)于腸黏膜損傷均有修復(fù)作用，但修復(fù)作用并不完全隨著劑量的增加而增強(qiáng)。見圖1。

3.2? 各組大鼠回盲部黏膜損傷指數(shù)比較

模型組大鼠腸組織呈現(xiàn)黏膜損傷、隱窩破壞、黏膜水腫、間質(zhì)水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等一系列炎性損傷。肉眼觀察，相較于空白組和假手術(shù)組，模型組及各治療組均出現(xiàn)腸管擴(kuò)張、膨脹，造模組更有腸管黏連、水腫增厚、梗阻以下腸管萎縮等現(xiàn)象。

與空白組和假手術(shù)組比較，模型組黏膜損傷指數(shù)均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05），表明造模成功。與模型組比較，大承氣湯各劑量組黏膜損傷指數(shù)均降低（P<0.01或P<0.05）。見表2。

3.3? 各組大鼠血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS水平比較

與空白組和假手術(shù)組比較，模型組血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;與模型組比較，大承氣湯各劑量組均能不同程度下調(diào)IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS分泌水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。見表3。

3.4? 各組大鼠腸組織IL-1rα、IL-1β、IL-1R mRNA表達(dá)水平比較

與空白組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠腸組織中IL-1rα、IL-1β、IL-1R mRNA表達(dá)明顯升高（P<0.01或P<0.05）;與模型組比較，大承氣湯低劑量組大鼠腸組織中IL-1rα、IL-1R mRNA表達(dá)降低（P<0.01），大承氣湯中、高劑量組均不同程度下調(diào)IL-1rα、IL-1β和IL-1R mRNA表達(dá)（P<0.01或P<0.05）。見表4。

3.5? 各組大鼠腸組織NLRP3、eNOS mRNA表達(dá)水平比較

與空白組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠腸組織中NLRP3、eNOS mRNA表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）;與模型組比較，大承氣湯各劑量組均能不同程度下調(diào)NLRP3、eNOS mRNA表達(dá)水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01或P<0.05）。見表5。

3.6? 各組大鼠腸組織ASC、Caspase-1 mRNA表達(dá)水平比較

與空白組和假手術(shù)組比較，模型組大鼠腸組織中ASC和Caspase-1 mRNA表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）;與模型組比較，大承氣湯中、高劑量組大鼠腸組織中ASC、Caspase-1 mRNA表達(dá)下調(diào)（P<0.05），大承氣湯各劑量組均能不同程度下調(diào)Caspase-1 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。見表6。

4 討論

腸梗阻屬于中醫(yī)學(xué)“腸結(jié)”“關(guān)格”“腹痛”“積聚”的范疇，飲食不節(jié)，勞累過度，寒邪凝滯，熱邪郁閉，濕邪中阻，或手術(shù)后瘀血留滯，燥屎內(nèi)結(jié)或蟲團(tuán)集聚等原因，導(dǎo)致腸道氣機(jī)痞塞，上下不通，不通則痛;氣滯于中，清氣不得上升，濁氣不得下降，則發(fā)生腹脹;腸道痞阻，胃氣上逆而作嘔吐，甚至吐出糞便;氣機(jī)閉塞，大腸傳導(dǎo)失司而致便秘。從本病的痛、脹、嘔、閉四大臨床特征分析，以“閉”為主要矛盾，故當(dāng)以“攻下通便”為基本治則，通過瀉下、蕩滌、攻逐等作用，使停留在胃腸的宿食、燥屎、冷積、瘀血、結(jié)痰、停水、蟲積等有形積滯從大便而出，便通氣暢，則痛、脹、嘔三癥自然緩解[13]。

中醫(yī)學(xué)中的“下法”是通過瀉下、蕩滌、攻逐等作用，使停留在胃腸的宿食、燥屎、冷積、瘀血、結(jié)痰、停水、蟲積等有形積滯從大便而出的治法。由于積滯有寒熱，正氣有盛衰，邪氣有兼夾，故下法有寒下、溫下、潤(rùn)下、逐水、攻補(bǔ)兼施之別。大承氣湯是寒下法的代表方劑，軟堅(jiān)潤(rùn)燥、苦寒泄下與開痞散結(jié)、行氣除滿并重，通里與攻下并行。其由兩個(gè)君臣結(jié)構(gòu)組成，即：大黃苦寒泄熱、攻積通便、蕩滌腸胃邪熱積滯，為君藥;芒硝咸苦而寒，瀉熱通便、潤(rùn)燥軟堅(jiān)，協(xié)大黃峻下熱結(jié)，為臣藥。積滯內(nèi)阻，致腑氣不通，內(nèi)結(jié)之實(shí)熱積滯，難以速下，重用厚樸亦為君藥，行氣消脹除滿，臣以枳實(shí)下氣開痞散結(jié)，助厚樸行氣而除痞滿?？马嵅凇秱畞硖K集·傷寒附翼·陽(yáng)明方總論》中論述：“厚樸倍大黃，是氣藥為君，名大承氣……大承氣用水一斗，先煮枳樸，煮取五升，內(nèi)大黃煮取三升。內(nèi)硝者，以藥之為性，生者銳而先行，熟者氣鈍而和緩。仲景欲使芒硝先化燥屎，大黃繼通地道，而后枳樸除其痞滿，緩于制劑者，正以急于攻下也”[14]，闡釋了大承氣湯的作用機(jī)制，是以“生而銳”的芒硝為“先鋒官”，先化開燥屎，再由行氣藥和瀉熱通腑藥共同作用，達(dá)到通里攻下的目的。臨床研究[15-17]顯示，大承氣湯及其加減方治療腸梗阻可有效改善腸梗阻患者胃腸功能障礙，降低患者炎癥指標(biāo)水平，修復(fù)腸道屏障功能。孫文杰等[18]采用可視化知識(shí)圖譜整體分析近10年大承氣湯的研究概況及趨勢(shì)，結(jié)果顯示腸梗阻是該方最為相關(guān)的疾病。

本研究采用絲線結(jié)扎法制備不完全性腸梗阻大鼠模型，予不同劑量大承氣湯進(jìn)行干預(yù)，探討該方對(duì)模型大鼠回盲部腸道形態(tài)以及炎性物質(zhì)釋放的影響。對(duì)回盲部腸道形態(tài)的研究結(jié)果顯示：正常的腸黏膜組織由從內(nèi)而外依次由黏膜層、黏膜肌層、黏膜下層、肌層和外膜四部分構(gòu)成。造模后，上皮細(xì)胞可見細(xì)胞間質(zhì)水腫，界限不清，細(xì)胞腫脹、壞死、脫落。治療各組的損傷情況各異，對(duì)于腸黏膜損傷均有修復(fù)作用，但修復(fù)作用并不完全隨著藥物劑量的增加而增強(qiáng)。一方面要考慮其修復(fù)作用可能與大黃能提高黏膜的血流灌注起到保護(hù)大鼠腸黏膜有關(guān);另一方面可能與芒硝對(duì)腸黏膜的刺激有關(guān)，其劑量越大對(duì)腸黏膜的刺激性越強(qiáng)[19]。

腸黏膜損傷指數(shù)是由Chiu CJ等[9]在1970年的實(shí)驗(yàn)研究中提出，此后的動(dòng)物試驗(yàn)研究中關(guān)于腸黏膜損害的嚴(yán)重程度判定多基于此，是判定黏膜損傷指數(shù)程度最簡(jiǎn)便、最快速的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)中，模型組的黏膜損傷、隱窩破壞、黏膜水腫、間質(zhì)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)各項(xiàng)指標(biāo)評(píng)分均高出正常組和假手術(shù)組，說明造模方法對(duì)于模型大鼠的回盲部結(jié)腸組織造成了炎性損傷，提示造模成功。大承氣湯各劑量組均能不同程度改善炎性病理?yè)p傷，高劑量組的黏膜損傷積分較之中劑量和低劑量略高，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與芒硝對(duì)于腸黏膜的刺激性有關(guān)。

炎癥小體是一類具有控制炎癥反應(yīng)、宿主防御作用的多聚蛋白復(fù)合物，細(xì)胞傳感器、適配器——凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白（ASC）、前體半胱天冬酶1（pro-Caspase-1）是其基本構(gòu)成[20]。NLRP1、NLRP3、NLRC4、

NLRP6、NLRP9b、NLRP12、黑色素瘤缺失2（AIM2）及pyrin等均可裝配成炎癥小體復(fù)合體[21]。其中NLRP3是NOD樣受體（NLRs）家族中優(yōu)先級(jí)最高的成員，研究[22]表明，NLRP3炎癥小體與腸道炎癥免疫環(huán)境密切相關(guān)。在LPS、其他毒素或環(huán)境壓力等外源性刺激下，NLRP3炎癥小體的傳感器NLRP3蛋白接受到啟動(dòng)信號(hào)，通過連接蛋白ASC將pro-Caspase-1招募到炎癥小體復(fù)合體，Caspase-1前體通過自身催化裂解，產(chǎn)生活性亞基p10和p20，被激活的Caspase-1對(duì)pro-IL-1β、pro-IL-18進(jìn)行剪切裂解，使其成為具有生物活性的IL-1β、IL-18[23]。IL-1β具有調(diào)控發(fā)熱、疼痛閾值、血管舒張基因表達(dá)的作用，并促進(jìn)免疫細(xì)胞向感染組織不斷滲透;IL-18則是介導(dǎo)適應(yīng)性免疫的促炎細(xì)胞因子[24]。同時(shí)，作為半胱氨酸蛋白酶之一的Caspase-1尚可裂解Gasdermin D蛋白（GSDMD），介導(dǎo)特殊的程序性死亡，即細(xì)胞焦亡，GSDMD介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡可促進(jìn)細(xì)胞因子的釋放和DAMPs的產(chǎn)生，為免疫系統(tǒng)應(yīng)對(duì)感染做準(zhǔn)備[25]。因此，由NLRP3炎癥小體激活的Caspase-1通過釋放成熟的細(xì)胞因子和清除感染或損傷的細(xì)胞，為宿主細(xì)胞提供了雙重防御機(jī)制。研究[26]表明，結(jié)腸黏膜組織中NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA和蛋白表達(dá)及IL-1β、IL-18等致炎因子含量明顯增高，提示NLRP3炎癥小體異常過度激活是結(jié)腸炎性反應(yīng)發(fā)展的主要原因。

本實(shí)驗(yàn)對(duì)各組大鼠血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS水平及回盲部組織中IL-1ra、IL-1β、IL-1R、eNOS、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA水平進(jìn)行了觀察比較，研究結(jié)果顯示：模型組大鼠血清IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-18、eNOS較空白組和假手術(shù)組明顯升高，大承氣湯高、中、低劑量均能不同程度地下調(diào)其分泌水平，且與劑量呈負(fù)相關(guān)。模型大鼠腸組織IL-1rα、IL-1β、IL-1R、eNOS、NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表達(dá)與空白組和假手術(shù)組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大承氣湯高、中、低劑量均能不同程度下調(diào)各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)水平，且與劑量呈負(fù)相關(guān)，劑量越大越能控制下降其表達(dá)水平，但大承氣湯劑量與Caspase-1 mRNA表達(dá)水平相關(guān)性不明顯。本研究從病理形態(tài)和炎性因子上闡明了大承氣湯對(duì)不完全性腸梗阻的部分作用機(jī)制，表明大承氣湯可有效改善不完全性腸梗阻模型大鼠腸組織病理?yè)p傷，減輕炎癥反應(yīng)，調(diào)節(jié)NLRP3、ASC、Caspase-1的失衡。

參考文獻(xiàn)

[1] 周永坤，許振國(guó)，朱? 勇.腸梗阻診斷治療[M].北京：人民軍醫(yī)出版社，2014：8.

[2] 呂云福.腸梗阻的常見病因分類與治療策略[J].中華普外科手術(shù)學(xué)雜志（電子版），2011，5（3）：251-255.

[3] 李? 冀.方劑學(xué)速記[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2017.

[4] 馮世綸，張長(zhǎng)恩.經(jīng)方傳真：胡希恕經(jīng)方理論與實(shí)踐[M].3版.北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社，2018.

[5] 楊? 勇，趙? 薇.大承氣湯治療不完全性腸梗阻28例療效觀察[J].云南中醫(yī)中藥雜志，2015，36（2）：40-41.

[6] 張福興，江一平.大承氣湯加味治療腸梗阻48例[J].江西中醫(yī)藥，2013，44（5）：30-31.

[7] 趙漢鵬，馬騰飛，沈益君，等.中藥封包聯(lián)合復(fù)方大承氣湯治療不完全性腸梗阻的臨床研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2016，22（4）：83-85.

[8] 李禹呈，楊? 拯，袁夢(mèng)郎，等.新方法建立大鼠不完全性腸梗阻模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].四川動(dòng)物，2013，32（2）：276-279，156.

[9] CHIU C J. Intestinal mucosal lesion in low-flow states[J]. Archives of Surgery， 1970， 101（4）： 478.

[10] 陳? 奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006.

[11] ARAKI Y， ANDOH A， TAKIZAWA J， et al. Clostridium butyricum， a probiotic derivative， suppresses dextran sulfate sodium-induced experimental colitis in rats[J]. International Journal of Molecular Medicine， 2004， 13（4）： 577-580.

[12] G？譈LPINAR M A， ZBEYLI D， ARBAK S， et al. Acute stress ameliorates colitis via central corticotropin-releasing factor and serotonin （5-HT）-3 receptors[J]. Turkish Journal of Medical Sciences， 2005， 35（1）： 13-19.

[13] 李? 軍.老年腸梗阻臨床診治分析[J].中外醫(yī)療，2018，37（4）：41-42，46.

[14] 柯? 琴.《傷寒來蘇集·傷寒附翼·陽(yáng)明方總論》[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1959.

[15] 李道衛(wèi).大承氣湯灌腸法治療粘連性腸梗阻48例臨床觀察[J].光明中醫(yī)，2020，35（1）：43-45.

[16] 戴景濤，顏小明，卓? 瑪.大承氣湯灌腸治療腸結(jié)核所致腸梗阻臨床療效分析[J].青海醫(yī)藥雜志，2020，50（4）：70-71.

[17] 鄭香琴，馮惠春，鄭曉真，等.濃煎大承氣湯在老年癌性不全腸梗阻中的應(yīng)用[J].新中醫(yī)，2021，53（9）：102-106.

[18] 孫文杰，陳亞峰，高? 磊，等.近10年“大承氣湯”相關(guān)研究知識(shí)圖譜分析[J].上海中醫(yī)藥雜志，2019，53（9）：22-26.

[19] 沈凌鴻，鄭貴軍，王君梅，等.大黃加芒硝對(duì)危重病患者胃腸功能障礙的療效觀察[J].天津中醫(yī)藥，2013，30（3）：145-147.

[20] HAFNER-BRATKOVI?I， SUJAN P， LAINEK D， et al. NLRP3 lacking the leucine-rich repeat domain can be fully activated via the canonical inflammasome pathway[J]. Nature Communications， 2018， 9： 5182.

[21] SHARMA D， KANNEGANTI T D. The cell biology of inflammasomes： Mechanisms of inflammasome activation and regulation[J]. The Journal of Cell Biology， 2016， 213（6）： 617-629.

[22] KELLEY N， JELTEMA D， DUAN Y H， et al. The NLRP3 inflammasome： An overview of mechanisms of activation and regulation[J]. International Journal of Molecular Sciences， 2019， 20（13）： 3328.

[23] SAGOO P， GARCIA Z， BREART B， et al. In vivo imaging of inflammasome activation reveals a subcapsular macrophage burst response that mobilizes innate and adaptive immunity[J]. Nature Medicine， 2016， 22（1）： 64-71.

[24] DINARELLO C A. Immunological and inflammatory functions of the interleukin-1 family[J]. Annual Review of Immunology， 2009， 27： 519-550.

[25] BULEK K， ZHAO J J， LIAO Y， et al. Epithelial-derived gasdermin D mediates nonlytic IL-1β release during experimental colitis[J]. The Journal of Clinical Investigation， 2020， 130（8）： 4218-4234.

[26] 任改艷，黃劍林.NLRP3炎癥小體與炎癥性腸病的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志，2019，35（13）：1662-1665.

（本文編輯? 蘇? 維）