基于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激PERK信號(hào)通路探討芍藥湯對(duì)UC大鼠的作用機(jī)制

羅敏，杜英杰，姜燕詩(shī)，肖金銀，林仁敬，李帥軍

〔摘要〕 目的 通過檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（PERK）信號(hào)通路相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)，探討芍藥湯治療潰瘍性結(jié)腸炎（UC）的作用機(jī)制。方法 100只SD大鼠建立胃腸濕熱證模型后，隨機(jī)抽取25只作為空白組，其余大鼠用三硝基苯磺酸法在其基礎(chǔ)上建立UC大鼠模型后分為模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組，每組25只?？瞻捉M、模型組利用生理鹽水灌胃，柳氮磺吡啶組利用柳氮磺吡啶灌胃，芍藥湯組利用芍藥湯灌胃。在灌胃第7、14天，各組大鼠分別進(jìn)行大鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）評(píng)分;同時(shí)各組隨機(jī)處死數(shù)量相同的大鼠進(jìn)行大鼠的結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（CMDI）評(píng)分;用Western blot法及RT-PCR法檢測(cè)結(jié)腸組織PERK蛋白和mRNA的表達(dá)。結(jié)果 造模4 d后，各模型大鼠結(jié)腸組織可見潰瘍面，并經(jīng)病檢證實(shí)，提示造模成功。與空白組比較，各組各時(shí)間點(diǎn)DAI評(píng)分、CMDI評(píng)分均增高（P<0.05）。（1）DAI評(píng)分：灌胃7、14 d時(shí)，柳氮磺吡啶組與芍藥湯均低于模型組（P<0.05）;灌胃14 d時(shí)，芍藥湯組較柳氮磺吡啶組低（P<0.05）。（2）CMDI評(píng)分：灌胃7、14 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組均高于芍藥湯組（P<0.05）。（3）p-PERK蛋白和mRNA的表達(dá)：灌胃7 d時(shí)，與空白組相比，模型組及柳氮磺吡啶組p-PERK蛋白和mRNA表達(dá)均升高（P<0.05）;芍藥湯組p-PERK蛋白和mRNA表達(dá)較模型組低（P<0.05）;灌胃14 d時(shí)，與空白組相比，模型組及柳氮磺吡啶組p-PERK蛋白和mRNA表達(dá)均升高（P<0.05）;芍藥湯組p-PERK蛋白和mRNA表達(dá)較模型組及柳氮磺吡啶組低（P<0.05）。結(jié)論 芍藥湯通過抑制胃腸濕熱型UC大鼠結(jié)腸ESR過程中PERK信號(hào)通路的激活，從而改善UC大鼠的癥狀及體征，這可能是其治療UC的作用機(jī)制。

〔關(guān)鍵詞〕 芍藥湯;潰瘍性結(jié)腸炎;胃腸濕熱型;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激;PERK信號(hào)通路;DAI評(píng)分;CMDI評(píng)分

〔中圖分類號(hào)〕R269? ? ? ? 〔文獻(xiàn)標(biāo)志碼〕A? ? ? ?〔文章編號(hào)〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2021.11.004

Mechanism of Shaoyao Decoction on UC Rats Based on Endoplasmic Reticulum

Stress PERK Signal Pathway

LUO Min， DU Yingjie， JIANG Yanshi， XIAO Jinyin， LIN Renjing， LI Shuaijun

（Proctology Department， The Second Affiliated Hospital of Hunan University of Chinese Medicine，

Changsha， Hunan 410005， China）

〔Abstract〕 Objective To investigate the mechanism of Shaoyao Decoction in the treatment of ulcerative colitis （UC） by detecting the expression of protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase （PERK） signal pathway related genes and proteins mediated by endoplasmic reticulum stress. Methods 100 SD rats were established the model of gastrointestinal dampness and heat syndrome， 25 rats from them were randomly selected as the blank group， and the rest of the rats were established with trinitrobenzene sulfolnic acid （TNBS） based on the model of gastrointestinal dampness and heat syndrome. They were divided into the model group， the sulfapyridine group and the Shaoyao Decoction group， with 25 rats in each group. The blank group and the model group were infused with saline， the sulfapyridine group was infused with sulfapyridine， and the Shaoyao Decoction group was infused with Shaoyao Decoction. On the 7th and 14th days， the rats in each group were scored with disease activity index （DAI）. At the same time， the same number of rats in each group were randomly executed for scoring with colonic mucosal damage index （CMDI）. Western blot method and RT-PCR method were used to detect the expression of PERK protein and mRNA in colon tissue. Results After 4 days of molding， the ulcer surface can be seen in the colon tissue of each model rat， and it was confirmed by the medical examination， indicating that the molding was successful. Compared with the blank group， the DAI score and CMDI score of each group had increased at each time period. （1） DAI score： on the 7th and 14th days， the sulfapyridine group and the Shaoyao Decoction group were lower than the model group （P<0.05）; on the 14th day， the Shaoyao Decoction group was lower than the sulfapyridine group （P<0.05）. （2） CMDI score： on the 7th and 14th days， the model group and the sulfapyridine group were higher than the Shaoyao Decoction group （P<0.05）. （3） Expression of p-PERK protein and mRNA： on the 7th day， the model group and the sulfapyridine group were higher than the blank group （P<0.05）; the Shaoyao Decoction group was lower than the model group （P<0.05）; on the 14th day，? the model group and the sulfapyridine group were higher than the blank group （P<0.05）; the Shaoyao Decoction group was lower than the model group and the sulfapyridine group （P<0.05）. Conclusion Shaoyao Decoction can improve the symptoms and signs of UC rats by inhibiting the activation of PERK signal pathway in the process of endoplasmic reticulum stress of colon in rats with UC of gastrointestinal dampness and heat syndrome， which may be the mechanism of its treatment of UC.

〔Keywords〕 Shaoyao Decoction; ulcerative colitis; gastrointestinal dampness and heat syndrome; endoplasmic reticulum stress; PERK signal pathway; DAI score; CMDI score

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis， UC）是一種以結(jié)腸黏膜、黏膜下層病變?yōu)橹?，出現(xiàn)腹痛、腹瀉、黏液膿血便、里急后重等臨床表現(xiàn)的一種非特異炎癥性腸病[1-2]。其發(fā)病機(jī)制尚不明確，目前認(rèn)為可能是遺傳易感性、免疫損傷和環(huán)境因素等聯(lián)合引起[3]。UC在國(guó)外的發(fā)病率高達(dá)8～14/10萬以上，在國(guó)內(nèi)的發(fā)病率達(dá)2.05/10萬以上，患病率逐年增加[4]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（endoplasmic reticulum stress， ERS）是UC發(fā)病的重要因素，ERS出現(xiàn)時(shí)，機(jī)體為降解積累的未折疊肽鏈或錯(cuò)誤折疊蛋白，多條通路被激活[5]。其中蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase， PERK）通路為主要通路，PERK通路被激活后引起核因子κB（nuclear factor kappa B， NF-κB）炎性通路激活，刺激促炎因子的分泌、炎性細(xì)胞的聚集，引發(fā)UC[6]。芍藥湯是中醫(yī)臨床上治療胃腸濕熱型UC的常用方之一。本實(shí)驗(yàn)從UC大鼠的結(jié)腸ERS的PERK信號(hào)通路出發(fā)，對(duì)芍藥湯治療胃腸濕熱型UC大鼠的作用機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1? 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD大鼠100只，雄性，體質(zhì)量（200±20） g。購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：1107271911002957，飼養(yǎng)于湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。實(shí)驗(yàn)過程通過了湖南中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)（編號(hào)：LLBH-201910080002）。

1.2? 主要藥品

1.2.1? 中藥? 芍藥湯具體藥物如下：芍藥30 g，當(dāng)歸15 g，黃連15 g，黃芩15 g，檳榔6 g，木香6 g，炙甘草6 g，大黃9 g，肉桂5 g，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院中藥顆粒藥房（華潤(rùn)三九）提供，使用時(shí)生理鹽水沖兌，使含生藥量質(zhì)量濃度為1.3 g/mL。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的用藥劑量按照動(dòng)物與人體間的等效劑量換算[7]（大鼠劑量=人體劑量×換算系數(shù)=107 g/50 kg×6.17=13.20 g/kg）。

1.2.2? 西藥? 柳氮磺吡啶片（規(guī)格0.25 g/片，批號(hào)：31020557，上海信誼天平藥業(yè)有限公司）。研粉后過100目篩，使用時(shí)生理鹽水沖兌，使藥物濃度為0.03 g/mL[成人臨床劑量0.04～0.06 g/（kg·d），大鼠等效劑量0.25～0.37 g/kg，本實(shí)驗(yàn)大鼠等效劑量取0.3 g/kg]。

1.3? 主要試劑

P-PERK 抗體（美國(guó)Bioss公司，批號(hào)：ab229812）;β-actin抗體（批號(hào)：56462）;IgG抗體（批號(hào)：SAB43714）均購(gòu)自美國(guó)Bioswamp公司;2，4，6-三硝基苯磺酸（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：SLBD631V）;BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（Solarbio公司，批號(hào)：20191228）;Trizol（上海博耀生物科技有限公司，批號(hào)：94206）;水合氯醛（天津市大茂化學(xué)試劑公司，批號(hào)：20191214）。

1.4? 主要儀器

實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（德國(guó)艾本德公司，型號(hào)：realplex2）;PCR擴(kuò)增儀（型號(hào)：T100 thermal cycler）、化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)（型號(hào)：XRS+Imager）均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司;臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（德國(guó)HERMLE公司，型號(hào)：Z32HK）;核酸水平電泳儀（北京百晶生物技術(shù)有限公司，型號(hào)：BG-SUHWIDI）;核酸蛋白濃度測(cè)定儀（英國(guó)BioDrop公司，型號(hào)：BD1106）。

1.5? 造模與分組

適應(yīng)性喂養(yǎng)4 d后，將大鼠編號(hào)后隨機(jī)分為空白組、模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組，每組25只。參照文獻(xiàn)[8-9]制做大鼠胃腸濕熱型模型。10 d后行UC大鼠造模，造模前禁食24 h，按照3 mL/kg用10%水合氯醛進(jìn)行腹腔注射麻醉，待大鼠完全麻醉后，空白組用生理鹽水灌腸，其余大鼠采用三硝基苯磺酸灌腸法制作UC大鼠模型[10]。造模4 d后，各組隨機(jī)抽取1只處死并解剖，觀察腸管組織。距肛緣6～10 cm處肉眼可見潰瘍面，病理檢查發(fā)現(xiàn)炎性改變及典型潰瘍面時(shí)，即造模成功[10]。

1.6? 給藥方法

造模成功第2天芍藥湯組按照含生藥量1.3 g/mL的芍藥湯劑灌胃2 mL，每天1次;柳氮磺吡啶組按照藥物濃度0.03 g/mL的柳氮磺吡啶溶液灌胃2 mL，每天1次;模型組、空白組予等體積的生理鹽水灌胃，每天1次。

1.7? 標(biāo)本采集與處理

分別于第一次灌胃前、灌胃7、14 d時(shí)，抓取大鼠后按揉腹部誘導(dǎo)排便或用糞匙刮取肛門部殘留糞便，觀察是否有肉眼可見血便，后置于糞便瓶中。分別于灌胃7、14 d時(shí)在空白組、模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組中隨機(jī)取10只大鼠，脫頸椎法處死大鼠，取血后迅速剖腹，取出距肛門以上8 cm處結(jié)腸段，沿腸系膜緣剪開腸腔，用冷PBS緩沖液沖洗腸內(nèi)容物，肉眼觀察各組大鼠腸組織大體形態(tài)并進(jìn)行評(píng)分，于病變最明顯處剖取標(biāo)本，所取標(biāo)本均分為2份，分別用生理鹽水沖洗兩遍后，迅速放置于液氮中冷凍，用于Western bolt檢測(cè)及RT-PCR檢測(cè)。

1.8? 觀察指標(biāo)

1.8.1? 大鼠疾病活動(dòng)指數(shù)（disease activity index， DAI）評(píng)分? 分別于第1次灌胃前、灌胃7、14 d時(shí)觀察各組大鼠大便、體質(zhì)量、活動(dòng)度及精神狀態(tài)，進(jìn)行DAI評(píng)分，DAI =（體質(zhì)量下降分?jǐn)?shù)+大便性狀分?jǐn)?shù)+便血分?jǐn)?shù)）/3。積分為0～4分。0分：大便性狀正常，無隱血，體質(zhì)量無下降;1分：大便性狀正常，大便無隱血，體質(zhì)量下降1%～5%;2分：大便松散，大便隱血陽性，體質(zhì)量下降5%～10%;3分：大便松散，大便隱血陽性，體質(zhì)量下降10%～15%;4分：稀便，肉眼血便，體質(zhì)量下降>15%[11]。

1.8.2? 大鼠的結(jié)腸黏膜損傷指數(shù)（colonic mucosal

damage index， CMDI）評(píng)分? 剖取結(jié)腸，將腸系膜及粘連組織徹底清理，并沿腸系膜縱軸剪開腸管，用生理鹽水將其充分沖洗干凈，平鋪于濾紙上，肉眼觀察，進(jìn)行CMDI評(píng)分。積分為0～5分，0分：無損傷;1分：充血但沒有潰瘍;2分：充血而且腸壁變厚，但沒有潰瘍;3分：有一處小潰瘍，直徑約0～1 cm;4分：潰瘍較大，直徑1～2 cm，但腸管與外周臟器無粘連;5分：潰瘍直徑1～2 cm，腸管增厚，與周圍臟器粘連嚴(yán)重[12]。

1.8.3? 大鼠結(jié)腸組織p-PERK蛋白表達(dá)水平? 采用Western blot法檢測(cè)大鼠結(jié)腸組織p-PERK蛋白表達(dá)水平。將組織剪成細(xì)小的碎片，按照比例加入裂解液，勻漿器勻漿直至完全裂解。裂解完成后，取適量樣品在溫度4 ℃下，離心機(jī)持續(xù)離心15 min，其后取上層清亮液，進(jìn)行蛋白質(zhì)定量檢測(cè)，隨后將其貯存于冰箱中，貯存溫度為-80 ℃。上述提取的蛋白經(jīng)10% SDS-PAGE電泳分離后轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，5%脫脂奶粉室溫封閉2 h或4 ℃過夜，p-PERK抗體隨后添入封閉液中，稀釋后在4 ℃模型組利用生理鹽水灌胃的條件下孵育12 h，再與HRP標(biāo)記的二抗進(jìn)行反應(yīng)。最終進(jìn)行ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，將膜置于全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀中檢測(cè)，通過Image J軟件讀取相關(guān)條帶灰度值。

1.8.4? 大鼠結(jié)腸組織中p-PERK mRNA表達(dá)水平? Trizol法提取RNA后，采用RT-PCR法對(duì)p-PERK mRNA進(jìn)行檢測(cè)，PERK-反向ATGACGAGGGACACTGCT？鄄TTGAAC;PERK-正向CTCTGGGCTCTTCTTTGCTGGATG，擴(kuò)增長(zhǎng)度為135 bp;內(nèi)參β-actin-反向CCAGG？鄄

TCATCACCATCGG;β-actin-正向TGTCC？鄄AGGTCGCACTTCA，擴(kuò)增長(zhǎng)度為131 bp;采用2-△△Ct值進(jìn)行相對(duì)定量，表示該基因的相對(duì)表達(dá)水平，△Ct=基因Ct-內(nèi)參Ct，△△Ct=實(shí)驗(yàn)組△Ct-對(duì)照組△Ct。

1.9? 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0軟件統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以“x±s”表示，若符合正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)，兩樣本均數(shù)間的比較采用t檢驗(yàn)，多個(gè)樣本間的比較采用單因素方差分析;對(duì)于不符合正態(tài)性檢驗(yàn)和方差齊性檢驗(yàn)的，兩樣本均數(shù)間的比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，多個(gè)樣本間的比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

造模4 d后，造模組大鼠距離肛緣6～10 cm可見潰瘍面，病理檢查證實(shí)為炎性改變或典型潰瘍面，空白組大鼠該部分結(jié)腸黏膜未見上述改變。造模及給藥7 d內(nèi)空白組死亡1只，模型組死亡3只，柳氮磺吡啶組死亡4只，芍藥湯組死亡3只，給藥7 d后模型組死亡1只。解剖發(fā)現(xiàn)腹腔有糞便，結(jié)腸腫脹，糞便堆積，與周圍組織粘連，部分腸管穿孔，疑為腸梗阻導(dǎo)致的腸穿孔致死。最終各組大鼠數(shù)目分別為空白組23只、模型組20只、柳氮磺吡啶組20只、芍藥湯組21只。

2.1? 各組大鼠DAI評(píng)分比較

在灌胃7 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組DAI評(píng)分均較空白組明顯增高（P<0.05），柳氮磺吡啶組與芍藥湯組DAI評(píng)分差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但均低于模型組（P<0.05）;在灌胃14 d時(shí)模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組DAI評(píng)分均較空白組明顯增高（P<0.05），模型組DAI評(píng)分高于柳氮磺吡啶組及芍藥湯組（P<0.05），柳氮磺吡啶組DAI評(píng)分高于芍藥湯組（P<0.05）。模型組DAI評(píng)分在灌胃14 d時(shí)明顯高于灌胃7 d時(shí)（P<0.05），柳氮磺吡啶組DAI評(píng)分在灌胃14 d時(shí)與灌胃7 d時(shí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），芍藥湯組DAI評(píng)分在灌胃14 d時(shí)明顯低于灌胃7 d時(shí)（P<0.05）。見表1。

2.2? 各組大鼠CMDI評(píng)分比較

在灌胃7 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組CMDI評(píng)分均較空白組明顯增高（P<0.05），模型組CMDI評(píng)分與柳氮磺吡啶組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但均高于芍藥湯組（P<0.05）;在灌胃14 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組CMDI評(píng)分均較空白組明顯增高（P<0.05），模型組CMDI評(píng)分與柳氮磺吡啶組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但均高于芍藥湯組（P<0.05）。各組CMDI評(píng)分在灌胃7 d時(shí)與灌胃14 d時(shí)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3? 各組大鼠結(jié)腸組織中p-PERK蛋白表達(dá)水平比較

灌胃7 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組p-PERK蛋白表達(dá)水平較空白組升高（P<0.05），空白組和芍藥湯組、柳氮磺吡啶組之間、模型組和柳氮磺吡啶組之間p-PERK蛋白表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），芍藥湯組p-PERK蛋白表達(dá)水平較模型組低（P<0.05）。灌胃14 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組p-PERK蛋白表達(dá)水平均較空白組高（P<0.05），芍藥湯組與空白組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但較模型組與柳氮磺吡啶組低（P<0.05），模型組和柳氮磺吡啶組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各組灌胃7 d時(shí)與灌胃14 d時(shí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3、圖1。

2.4? 各組大鼠結(jié)腸組織中p-PERK mRNA表達(dá)水平比較

灌胃7 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組、芍藥湯組p-PERK mRNA表達(dá)水平均較空白組升高（P<0.05），模型組p-PERK mRNA表達(dá)水平較柳氮磺吡啶組、芍藥湯組均高（P<0.05），柳氮磺吡啶組p-PERK mRNA表達(dá)水平較芍藥湯組高（P<0.05）;灌胃14 d時(shí)，模型組、柳氮磺吡啶組p-PERK mRNA表達(dá)水平較空白組均高（P<0.05），空白組和芍藥湯組p-PERK mRNA表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），模型組與柳氮磺吡啶組p-PERK mRNA表達(dá)水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），但模型組與柳氮磺吡啶組均較芍藥湯組高（P<0.05）?？瞻捉M和模型組p-PERK mRNA表達(dá)水平在灌胃7 d時(shí)與灌胃14 d時(shí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），柳氮磺吡啶組和芍藥湯組p-PERK mRNA表達(dá)水平在灌胃7 d時(shí)較灌胃14 d時(shí)高（P<0.05）。見表4。

3 討論

ERS是由于錯(cuò)誤折疊蛋白或未折疊蛋白過多聚集等被激活后，機(jī)體通過多種信號(hào)通路及其相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子進(jìn)行的一系列復(fù)雜的反應(yīng)[13-14]。適度的ERS可維持細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，但過度持續(xù)的ERS可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)正常蛋白的分解，引起細(xì)胞的破壞，導(dǎo)致腸黏膜屏障功能受損，進(jìn)而引發(fā)UC的發(fā)生[15-16]。而ERS主要通過3種信號(hào)通路來介導(dǎo)炎性因子的分泌，其中PERK通路與UC發(fā)病關(guān)系最為密切[17]。ERS發(fā)生時(shí)，PERK通路被激活，催化底物真核翻譯起始因子2a（eukaryotic translation initiation factor 2a， eIF2a）發(fā)生磷酸化，eIF2a磷酸化后，一方面抑制蛋白質(zhì)的翻譯和合成，降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中錯(cuò)誤折疊蛋白的積累，減輕內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力;另一方面磷酸化的eIF2a可促進(jìn)轉(zhuǎn)錄活化因子4中mRNA的選擇性翻譯，進(jìn)而上調(diào)CHOP，可誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡和自噬，另外，還可通過細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)引起NF-？資B的激活，然后刺激促炎因子的分泌，促進(jìn)炎性細(xì)胞的聚集[6]。大量炎性細(xì)胞和炎性細(xì)胞因子作用于局部腸道黏膜，誘發(fā)UC[3]。由此可見，ERS過程中PERK信號(hào)通路通過調(diào)控炎性因子的表達(dá)在UC的發(fā)生、發(fā)展中起著重要的作用。

本研究中，在灌胃7、14 d時(shí)，芍藥湯組大鼠的DAI評(píng)分及CMDI評(píng)分均較模型組低（P<0.05），灌胃14 d時(shí)，柳氮磺吡啶組的DAI評(píng)分及CMDI評(píng)分高于芍藥湯組（P<0.05），說明相比于柳氮磺吡啶，芍藥湯對(duì)UC治療效果更好。模型組大鼠的p-PERK蛋白及mRNA的表達(dá)水平較空白組上升（P<0.05），說明持續(xù)存在的應(yīng)激可誘導(dǎo)PERK高表達(dá)。與模型組相比，灌胃7、14 d時(shí)，芍藥湯組的p-PERK蛋白及mRNA表達(dá)均降低（P<0.05），灌胃14 d時(shí)，芍藥湯組的p-PERK蛋白及mRNA表達(dá)較柳氮磺吡啶組低（P<0.05），表明芍藥湯抑制p-PERK表達(dá)的作用較明顯，由此可推測(cè)芍藥湯可能通過抑制PERK信號(hào)通路來調(diào)控ERS，可減少細(xì)胞破壞，達(dá)到治療UC的目的。

UC在傳統(tǒng)中醫(yī)書籍并無特定名，其與“腸澼”“泄瀉”“痢疾”等類似[18]。對(duì)于UC的發(fā)病基礎(chǔ)，中醫(yī)認(rèn)為是素體脾胃虛弱，或外感邪氣、或飲食不節(jié)、或情志內(nèi)傷誘發(fā)UC。UC病位在大腸，且與肺、肝、脾、腎有關(guān)，其基本病理因素為濕、熱、瘀、毒、虛。UC的病機(jī)多為本虛標(biāo)實(shí)之證，其活動(dòng)期多被認(rèn)為是濕熱蘊(yùn)結(jié)腸道，氣血經(jīng)絡(luò)不調(diào);緩解期多被認(rèn)為脾腎兩虛的正虛邪戀[19-20]。對(duì)于胃腸濕熱型UC的治療多選用具有清熱燥濕、調(diào)氣和血之效的芍藥湯，方中以黃芩、黃連苦寒清熱燥濕解毒為君，以木香、檳榔行氣導(dǎo)滯，芍藥和血調(diào)營(yíng)、柔肝緩急，當(dāng)歸行血活瘀，4藥相合調(diào)和氣血為臣，佐以大黃瀉下通腑、破積除滯以通因通用的治療法則，共奏“行血?jiǎng)t便膿自愈，調(diào)氣則后重自除”之功，在通的同時(shí)以肉桂防苦寒傷中、甘草調(diào)和氣血。諸藥合參，使?jié)駸犰钪械溃瑲庋{(diào)暢通達(dá)，從而使得下痢、便膿、腹痛諸癥由此得愈。

本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，芍藥湯對(duì)UC大鼠癥狀有明顯改善，對(duì)UC大鼠結(jié)腸PERK信號(hào)通路有較為明顯的抑制作用。故本研究認(rèn)為芍藥湯治療胃腸濕熱型UC可能是通過抑制大鼠結(jié)腸組織中PERK信號(hào)通路來調(diào)控ERS而實(shí)現(xiàn)的。

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（本文編輯? 匡靜之 周? 旦）