LTBP蛋白功能探討

王文娟 馬海芬*

潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β結(jié)合蛋白（LTBP）家族是細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的重要組成成分，其主要功能與調(diào)節(jié)原纖蛋白、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）相關(guān)，不同種類的LTBP蛋白功能不完全相同，其中LTBP2蛋白功能側(cè)重于原纖蛋白的調(diào)節(jié)，而LTBP4則集中于TGF-β 1的調(diào)節(jié)，因此所造成的疾病也有較大不同。本文主要介紹LTBP家族的分類、結(jié)構(gòu)、功能，并分別介紹LTBP2與LTBP4缺陷所誘發(fā)疾病的不同，現(xiàn)綜述如下。

1 LTBP蛋白的分類、結(jié)構(gòu)與功能

ECM是由大分子構(gòu)成的錯(cuò)綜復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)，為細(xì)胞的生存及活動(dòng)提供適宜的場(chǎng)所，并通過信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)影響細(xì)胞的形狀、代謝、功能、遷移、增殖和分化。TGF-β作為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子超家族一員，有多種功能，促進(jìn)ECM如膠原蛋白、纖粘連蛋白的表達(dá)和抑制ECM的降解，對(duì)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生、增殖和分化過程起重要作用，有利于胚胎發(fā)育和細(xì)胞修復(fù)。LTBP家族是ECM的重要組成成分，蛋白分子量介于120~220 kDa［1］。LTBP蛋白均具有鈣結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子（EGF）結(jié)構(gòu)域、8胱氨酸重復(fù)單位（8-Cys）結(jié)構(gòu)域，對(duì)于8-Cys結(jié)構(gòu)域而言，目前具有同樣結(jié)構(gòu)域的蛋白僅為原纖蛋白，相對(duì)于原纖蛋白，LTBP蛋白的長(zhǎng)度更短且具有較多未知序列，可能與蛋白的延展性密切相關(guān)［2］。LTBP的功能主要包括：（1）與原纖蛋白的結(jié)合從而調(diào)控ECM；（2）通過與TGF-β的結(jié)合影響TGF-β的激活。在與原纖蛋白的結(jié)合中，目前已知的LTBP蛋白包括LTBP1-4四種，四種蛋白的C-段序列均被證實(shí)能夠與原纖蛋白-1的N端序列相互作用，與此同時(shí)在各種組織中LTBP蛋白均與原纖蛋白-1共定位，在原纖蛋白1缺失的小鼠中，LTBP蛋白的定位受到影響，除此之外LTBP也能夠與其它的細(xì)胞外基質(zhì)組分如纖維連接蛋白（fibronectin）、Fibulin等結(jié)合［3］，因此LTBP的部分功能被認(rèn)為是纖維蛋白與細(xì)胞外基質(zhì)其余組分的連接蛋白［4］，而部分的研究也集中于LTBP與老化、增生、彈性纖維的聯(lián)系。在老化的研究中，LANGTON等使用QPCR與免疫熒光檢測(cè)LTBP3在老化皮膚中的表達(dá)，結(jié)果表明在老化的口腔、皮膚中，LTBP3顯著下降，可能與LTBP3蛋白下降導(dǎo)致的原纖蛋白1與表皮橋接減少、上皮變薄相關(guān)［5］。CHAN則于2011年發(fā)現(xiàn)LTBP2在食管鱗狀上皮細(xì)胞系和腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)，啟動(dòng)子高甲基化涉及LTBP-2的失活，并證實(shí)LTBP2具有降低癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力［6］。LTBP家族與TGF-β之間的關(guān)聯(lián)備受關(guān)注，TGF-β目前分為三種，作為一種分泌蛋白，廣泛參與細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、分化等生物學(xué)過程［7］，通常狀況下TGF-β與LAP、LTBP蛋白結(jié)合，并以無活性狀態(tài)存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，因此LTBP的功能改變能夠顯著影響TGF-β的激活［8］，而不同類型的LTBP對(duì)TGF-β功能的影響截然不同，如在LTBP3缺陷的小鼠中，小鼠體重顯著變輕且顏面缺損，且在出生后數(shù)月，胸腺、脾臟發(fā)育均滯后，這些表型的改變與TGF-β缺陷小鼠骨癥狀極其相似，提示LTBP3功能主要為調(diào)節(jié)TGF-β在骨發(fā)育中的功能［9］，與LTBP3類似，LTBP1、4均與維持TGF-β的功能密切相關(guān)，LTBP2則與TGF-β無顯著相關(guān)［10］。在LTBP4缺陷的細(xì)胞中，TGF-β異常降低，且能夠誘導(dǎo)肺氣腫、心肌病與結(jié)直腸癌［11］，這與LTBP4主要與TGF-β 1形成復(fù)合物，從而調(diào)節(jié)TGF-β 1的功能相關(guān)。LTBP2在LTBP家族中的研究較多，且是功能最重要的蛋白，LTBP-2定位于染色體14q24，在肺實(shí)質(zhì)中大量表達(dá)［12］。已有研究證實(shí)LTBP2缺失的小鼠在胚胎著床期（E3.5-E6.5）就會(huì)死去［13］，過表達(dá)其它LTBP蛋白并不能拯救這一胚胎致死效應(yīng)，即使在切除第一個(gè)外顯子以最小程度改變基因組的小鼠中，小鼠仍然出現(xiàn)睫狀小帶微纖維破碎與晶狀體脫位現(xiàn)象［14］。進(jìn)一步研究證實(shí)LTBP2在彈性組織如主動(dòng)脈、肺實(shí)質(zhì)中高表達(dá)，且LTBP2并不能與TGF-β相結(jié)合，因此LTBP2的功能主要與原纖蛋白1相關(guān)［15］。

2 LTBP2的功能

LTBP2功能的發(fā)揮主要依賴于原纖蛋白的共定位，LTBP2的C末端區(qū)域能夠與原纖蛋白1的N端特異性作用，在耳軟骨細(xì)胞中，LTBP2能夠通過與fibulin-5的相互作用進(jìn)一步調(diào)節(jié)耳軟骨細(xì)胞的彈性發(fā)生［16］，在牙周膜中，LTBP2通過與fibulin-5的相互作用調(diào)節(jié)微纖維束的成熟［17］，由于LTBP2與彈性發(fā)生的密切關(guān)聯(lián)，在LTBP2的相關(guān)疾病中，多數(shù)與微纖維相關(guān)，如在LTBP2缺失突變能夠誘導(dǎo)原發(fā)性先天性青光眼，患者可伴有巨結(jié)膜、微球畸形和晶狀體脫位等癥狀［18］，在錯(cuò)義突變（V1177>M）患者中則出現(xiàn)短指-球狀晶體異位綜合征（Weill-Marchesani綜合征）及其相關(guān)癥狀［19］，除在眼球發(fā)育中的重要作用，LTBP2也可作為急性呼吸困難患者的全因死亡率的預(yù)測(cè)因子，同時(shí)能夠預(yù)測(cè)心力衰竭的轉(zhuǎn)歸［20］，其單核苷酸多態(tài)性也與骨密度的變化、骨折風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)［21］。目前關(guān)于LTBP2的研究更多的集中于眼球發(fā)育的研究中，在惡性腫瘤中的作用也有相應(yīng)報(bào)道。WANG等［22］研究結(jié)果提示，胰腺導(dǎo)管腺癌組織中LTBP2蛋白水平遠(yuǎn)高于癌旁組織，LTBP2的過度表達(dá)與腫瘤分化差和較晚的TNM分期有關(guān)，LTBP2的高表達(dá)預(yù)示PDAC患者的總體和無疾病存活率較差。在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌［23］、卵巢癌［24］和宮頸癌［25］中同樣觀察到LTBP2的表達(dá)增加，且與不利的結(jié)果和腫瘤進(jìn)展相關(guān)。但是，CHAN等［26］在食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）研究中卻發(fā)現(xiàn)相反的結(jié)局，其研究表明LTBP2在ESCC細(xì)胞系中的表達(dá)是高水平下調(diào)的并有助于癌細(xì)胞發(fā)展。啟動(dòng)子高甲基化、等位基因丟失是導(dǎo)致ESCC中LTBP2失活的兩種重要機(jī)制。LTBP2顯著降低ESCC癌細(xì)胞集落形成能力和非貼附性生長(zhǎng)能力，其結(jié)果支持LTBP2的腫瘤抑制作用。這些相互矛盾的數(shù)據(jù)表明LTBP-2在不同癌癥中的功能不同，LTBP-2的功能影響與特定細(xì)胞類型，組織起源和基質(zhì)環(huán)境有關(guān)。

3 LTBP4的功能

LTBP4的結(jié)構(gòu)域與其它LTBP蛋白類似，且在心臟、骨骼肌、胰臟、胎盤、子宮、肺中高表達(dá)，目前可被分為L(zhǎng)TBP-4S、LTBP-4L1與LTBP-4L2三種［27］。目前對(duì)于LTBP4的功能研究相對(duì)較少，主要集中于LTBP4缺失誘發(fā)的TGF-β 1信號(hào)降低、彈性纖維形成受限所誘發(fā)的慢性阻塞性肺疾?。–OPD）。如LTBP4S基因敲除小鼠中，小鼠肺終末氣囊分隔減少，在分離的LTBP4S缺失小鼠成纖維細(xì)胞中，缺失的LTBP4能夠?qū)е耇GF-β活性降低，同時(shí)BMP-4（骨形態(tài)發(fā)生蛋白-4）通路激活，而BMP-4的激活則直接導(dǎo)致小鼠的肺氣腫［28］。LTBP4的純合缺失也能夠誘發(fā)Urban-Rifkin-Davis綜合征，患者伴有肺、胃腸、泌尿生殖系統(tǒng)、骨骼肌肉和皮膚發(fā)育受損［29］。LTBP4在惡性腫瘤中的研究甚少，有研究顯示LTBP4在舌鱗癌組織中低表達(dá)，構(gòu)建過表達(dá)的細(xì)胞系可抑制舌鱗狀細(xì)胞癌侵襲能力，并與侵襲性偽足的形成相關(guān)［30］。LTBP4與TGF-β 1功能密切關(guān)聯(lián)，針對(duì)LTBP4的功能進(jìn)行相關(guān)研究具有較好的前景。

4 小結(jié)

LTBP主要為一組存在于細(xì)胞外基質(zhì)的蛋白，其主要功能與原纖蛋白、TGF-β的調(diào)節(jié)相關(guān)，鑒于TGF-β的調(diào)節(jié)、微纖維組織和彈性纖維組裝過程中的復(fù)雜性，對(duì)于LTBP家族的具體功能的闡述依然任重道遠(yuǎn)。