美洲紅點鮭和花羔紅點鮭種間單列雜交育種技術

王秀蘭 肖志國 高春山 陳偉強 張大彪 郎奎宇 陳嬋娟 李冠穎

摘 要：為培育出冷水魚新品種，開展了以美洲紅點鮭（Salvelinus fontinalis）為母本、花羔紅點鮭（S. malma）為父本的種間單列雜交試驗，試驗結果顯示，種間雜交的受精率為97.9%;發(fā)眼積溫190～214.8 ℃·d，發(fā)眼率95.6%;出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，孵化率90%，出苗26.8萬尾;畸形率2‰，存活率95.8%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。在室內利用玻璃鋼水槽對稚魚進行培育，養(yǎng)殖成活率98%，利用水泥池在室內和室外進行幼魚培育，養(yǎng)殖成活率96.1%。雜交子代不僅具有部分花羔紅點鮭的生物性狀，而且生長速度是花羔紅點鮭的2.3倍，抗病力比花羔紅點鮭高70%。

關鍵詞：美洲紅點鮭（Salvelinus fontinalis）;花羔紅點鮭（Salvelinus malma）;雜交育種

花羔紅點鮭（Salvelinus malma）為中小型冷水性稀有魚類，在我國僅分布于綏芬河、圖們江和鴨綠江上游支流里[1]，珍稀名貴，市場售價高，供不應求，但生長速度較慢;美洲紅點鮭（S. fontinalis）是冷水魚產業(yè)廣泛養(yǎng)殖的魚類，生長速度快，但繁殖期易患癤瘡病和水霉病，死亡率高[2]，市場售價低，滯銷。雜交育種周期短，效果明顯，一般在子代即可表現出雜種優(yōu)勢[3]，鮭科魚類的屬間和屬內雜交已有報道[4-8]， 本研究以市場為導向，旨在通過以美洲紅點鮭為母本、花羔紅點鮭為父本的種間雜交，培育出具有部分花羔紅點鮭形態(tài)特征，受市場歡迎，比花羔紅點鮭抗病力強、生長速度快的新的養(yǎng)殖品種。

1 材料與方法

1.1 試驗地點

2020年1月10日至2021年1月19日，試驗在長白山保護開發(fā)區(qū)福順祥冷水魚有限公司進行，水源為山泉水，水質清澈， pH值6.7～7.5，溶解氧8～10 mg/L。

1.2 親本來源

美洲紅點鮭雌魚來自漁場自繁體系，年齡3+齡;花羔紅點鮭雄魚采自鴨綠江上游長白江段，經漁場培育至3+齡。

1.3 親本放養(yǎng)

培育池為30 m2的水泥池，規(guī)格為長10 m×寬3 m×深0.8 m，水深0.5～0.6 m;進出水口設置攔魚網柵，出水口閘板控制水位。2020年1月10日進行親魚放養(yǎng)，且雌、雄分養(yǎng)，具體放養(yǎng)情況見表1。

1.4 親本培育

根據美洲紅點鮭比花羔紅點鮭性成熟季節(jié)早的規(guī)律，將花羔紅點鮭雄魚和美洲紅點鮭雌魚分別放養(yǎng)在漁場的上游和下游的魚池進行培育，每天11∶00點進行水溫監(jiān)測，記錄水溫數據，花羔紅點鮭培育水溫1～10 ℃，美洲紅點鮭的培育水溫1～13 ℃。飼料采用鮭鱒魚配合飼料，每天上、下午各投喂一次，按魚體重的0.5%～1.5%投喂。及時清刷進、出水口攔魚柵和魚池。池水每2～3 h交換一次，溶解氧不低于6 mg/L。每天觀察魚的攝食和活動情況，觀察有無疾病發(fā)生。

1.5 雜交育種

1.5.1 親本性成熟的判斷 在親本培育過程中，隨著繁殖期的到來，親本會隨著性腺的成熟出現食欲顯著減退，個別成熟個體會發(fā)生水霉病，據此初步判斷親本的成熟情況。

1.5.2 親本的成熟度檢查 性成熟的美洲紅點鮭雌魚，用手輕壓腹部會有橙色或橘紅色的卵粒流出。性成熟的花羔紅點鮭雄魚，用手輕壓泄殖腔會有乳白色的精液流出。

1.5.3 雜交親本挑選 2020年10月12日上午，對美洲紅點鮭的雌魚和花羔紅點鮭的雄魚進行成熟度檢查，并挑選美洲紅點鮭雌魚92尾、花羔紅點鮭雄魚31尾。

1.5.4 等滲液配制 等滲液須現用現配，配制方法：用塑料桶取10 L蒸餾水，稱取2.4 g氯化鉀、2.6 g無水氯化鈣、90.4 g氯化鈉，充分溶解于蒸餾水中。

1.5.5 采卵、采精及人工授精 10月12日下午進行雜交試驗，繁殖水溫7.3 ℃，雌雄比3：1。采卵、采精及人工授精均在避光、防水的條件下進行。先將采卵盆擦干，盛入0.5 L等滲液，采用擠腹采卵法將6尾或9尾雌魚卵擠入，攪拌10～15 s，充分溶解擠破卵的卵黃蛋白，迅即擠入2尾或3尾雄魚的精液，再充分攪拌10～15 s，靜置5～10 min，使卵受精。

1.5.6 受精卵孵化 10月12日至11月24日進行受精卵孵化。將受精卵用清水反復清洗8～10次，洗去剩余的精液和污物，計數后盛入3個孵化桶，盛卵密度9 452粒/L;孵化水流量控制在1～2 L/min，孵化水溫5.1～5.8 ℃，溶解氧不低于6 mg/L;受精卵每天用溴硝丙二醇流水消毒30～40 min，消毒濃度為0.35～0.4 mg/L，至受精卵全部發(fā)眼。

1.5.7 發(fā)眼卵孵化 2020年11月25日至2021年1月19日進行發(fā)眼卵孵化。受精卵發(fā)眼后，挑除死卵和未發(fā)眼的卵，采用3組玻璃鋼平列槽孵化。盛卵密度約10萬粒/m2，孵化水溫4.7～5.1 ℃，孵化水流量4～5 L/min，溶解氧不低于6 mg/L。每天及時挑出死卵、死苗，并旋水4～5次，保證水流暢通，至完全出苗。

1.5.8 育種 2021年3月8日至5月22日，在室內利用4個玻璃鋼水槽進行稚魚培育，魚苗規(guī)格0.057 g/尾，放養(yǎng)密度5萬尾/m2，培育水溫5.5 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天上、下午各投喂豐年蝦無節(jié)幼體1次、配合飼料3次、冰鮮海蚤1次。5月23日至7月25日，在室內利用2個16 m2的圓形水泥池進行前期幼魚培育，放養(yǎng)密度7 813尾/m2，每天上、下午各投喂海蚤1次、配合飼料3次。7月26日至8月29日，在室外利用2個20 m2的水泥池進行幼魚后期培育，放養(yǎng)密度5 975尾/m2，培育水溫8～12 ℃，溶解氧不低于6 mg/L，每天投喂配合飼料4次。

2 試驗結果

本試驗種間雜交的雌雄比3∶1，共獲得受精卵31.9萬粒，受精率97.9%。孵化積溫100～110 ℃·d時測得的受精率為97.9%;發(fā)眼積溫190～214.8 ℃·d，發(fā)眼率95.6%，獲得發(fā)眼卵29.8萬粒。

出苗積溫393.3～466.1 ℃·d，出苗26.8萬尾，孵化率90%，畸形率2‰，存活率95%，獲得雜交種仔魚25.5萬尾。

培育規(guī)格0.5 g/尾的稚魚25萬尾，成活率98%;培育規(guī)格3.4 g/尾的前期幼魚23.9萬尾，成活率95.5%;培育規(guī)格6.8 g/尾的后期幼魚23.1萬尾，成活率96.7%。

3 討論

3.1 通過不同水溫的親本培育，美洲紅點鮭和花羔紅點鮭能同步成熟，實現種間雜交

美洲紅點鮭和花羔紅點鮭是隸屬鮭科，鮭亞科，紅點鮭屬的不同種類，吉林省花羔紅點鮭的繁殖季節(jié)一般為每年的9月下旬至10月中上旬，而美洲紅點鮭的繁殖季節(jié)一般為每年的10月下旬至11月上旬，將培育花羔紅點鮭雄魚、美洲紅點鮭雌魚的魚池，分別選擇在近水源處和遠水源處，在培育水溫分別為1～10 ℃、1～13 ℃下進行培育，通過降低花羔紅點鮭雄魚的性腺發(fā)育積溫，增加美洲紅點鮭雌魚的性腺發(fā)育積溫，使繁殖期不同的兩種魚類，性腺同步成熟，實現種間雜交。特別是花羔紅點鮭雄魚在低溫下培育，不僅延長了成熟期，而且低溫下其精液質量好、持續(xù)時間長，有利于種間雜交。本研究受孵化設備限制，只進行了一個批次的種間雜交，事實上，隨著美洲紅點鮭的陸續(xù)成熟，至少可進行三個批次的種間雜交，進而實現規(guī)模化繁育。

3.2 美洲紅點鮭和花羔紅點鮭種間單列雜交效果分析

將卵采入等滲液中，避免其與空氣的接觸，同時，通過攪拌，能夠充分溶解破碎卵的卵黃蛋白，防止吸附精子，提高種間雜交的受精率。從試驗結果來看，種間雜交的受精率97.9%、發(fā)眼率95.6%、孵化率90%、畸形率2‰、存活率95%，說明以美洲紅點鮭為母本、花羔紅點鮭為父本的種間雜交是可行的，種間雜交效果良好。

3.3 為冷水魚產業(yè)提供了新的養(yǎng)殖品種

吉林省冷水魚產業(yè)養(yǎng)殖魚類較少，養(yǎng)殖結構較為單一，極大地限制了冷水魚產業(yè)的發(fā)展。雜交在魚類育種工作中對增強子代生存力、豐富遺傳結構、獲得雜種優(yōu)勢有重要作用[9]，在生產中，紅點鮭種間雜交育種可獲得具有較強雜種優(yōu)勢的雜交組合[10]。目前，經過我們培育，雜交種不僅具有部分花羔紅點鮭的生物性狀，而且生長速度比花羔紅點鮭快2.3倍，養(yǎng)殖成活率高達97%，比花羔紅點鮭高70%，充分體現了雜交種的生長優(yōu)勢和抗病優(yōu)勢。

美洲紅點鮭養(yǎng)殖廣泛，易獲得，懷卵量相對較大，花羔紅點鮭為吉林省稀缺名貴種質資源，本研究立足資源優(yōu)勢，以美洲紅點鮭為母本、以花羔紅點鮭為父本，成功培育出新的養(yǎng)殖品種，有利于冷水魚產業(yè)調整養(yǎng)殖結構、滿足市場需求、提高養(yǎng)殖效益，前景十分遠大。

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（收稿日期：2021-09-09）