三疣梭子蟹“乳化病”病理學(xué)研究

宮春光 劉曉麗 田洋 王鳳敏 李春嶺 殷蕊 孫桂清

摘 要：為從病理學(xué)角度闡明三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）“乳化病”的致病機(jī)理，選取中度和重度感染“乳化病”的三疣梭子蟹進(jìn)行了病理研究。結(jié)果顯示：河北省黃驊地區(qū)池塘養(yǎng)殖三疣梭子蟹“乳化病”的致病病原為血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.）;患病三疣梭子蟹的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均會(huì)受到不同程度的破壞。中等程度感染的病蟹多數(shù)組織器官尚存比較完整的組織結(jié)構(gòu);而重度感染的病蟹組織器官被嚴(yán)重破壞，其中肝胰腺和螯足肌肉已經(jīng)失去原有組織結(jié)構(gòu)，性腺也幾乎完全消失。

關(guān)鍵詞：三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）;“乳化病”;病理;血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.）

三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）是河北省的傳統(tǒng)養(yǎng)殖品種，具有較高的知名度和產(chǎn)業(yè)優(yōu)勢。但近幾年“乳化病”的爆發(fā)給產(chǎn)業(yè)帶來了巨大影響，導(dǎo)致養(yǎng)殖戶虧損嚴(yán)重、養(yǎng)殖面積銳減。筆者對(duì)該病進(jìn)行了病理研究，以期從病理學(xué)角度闡明該病的致病機(jī)理，為尋找該病的有效防控方法提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

病蟹采樣時(shí)間為2020年10月1日，采樣地點(diǎn)為黃驊市南排河鎮(zhèn)北方第一漁村。發(fā)病池塘的養(yǎng)殖模式為三疣梭子蟹與日本對(duì)蝦混養(yǎng)，其中，三疣梭子蟹的雄蟹已經(jīng)在9月份出塘售賣，塘中存蟹為育肥雌蟹，發(fā)病個(gè)體也均為雌蟹。發(fā)病池塘水色呈褐綠色，藻色偏淡，透明度在40～50 cm，水溫15 ℃。養(yǎng)殖業(yè)者介紹，該池塘在近幾天發(fā)病明顯（蟹的活力下降、死亡明顯增加），而隔壁池塘（也是該養(yǎng)殖戶的池塘）的蟹在前幾天已經(jīng)全部死亡。這兩口池塘在出塘雄蟹時(shí)均未見發(fā)病，同池養(yǎng)殖的日本對(duì)蝦也未見發(fā)病。

取中等程度發(fā)病和重度發(fā)病的病蟹放入泡沫箱中，加少量冰塊降溫，運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行病原、病理研究。

1.2 制作血涂片

用 75%酒精對(duì)梭子蟹步足基部擦拭消毒， 用1 mL無菌注射器于其關(guān)節(jié)膜處抽取約200 μL血淋巴，滴于載玻片上，混合等量的中性紅溶液（中性紅：PBS=0.02% w/v），在顯微鏡下進(jìn)行觀察并拍照。

1.3 制作病理切片

取病蟹的鰓、肝胰腺、心臟、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等7種組織，Bouin氏液固定24 h，自來水沖洗12 h，經(jīng)70%、80%、85%、90%、95%、100%酒精逐級(jí)脫水后，二甲苯+酒精、二甲苯透明，浸蠟，石蠟切片，H.E染色，顯微觀察、拍照。

2 結(jié)果與討論

2.1 結(jié)果

2.1.1 病蟹的外觀癥狀 病蟹甲長為6.7～7.3 cm，甲寬為14.3～15.6 cm，體重為97～106 g;與同等規(guī)格健康蟹相比，病蟹體重明顯偏輕（輕約20%左右）。具體外觀癥狀見圖1（封二）?；疾€(gè)體活力差，爬行緩慢、螯足無力，體色暗淡，體表有藻類、有機(jī)物等附著物（蟹的自凈能力下降）。解剖觀察，發(fā)病嚴(yán)重的蟹體內(nèi)充滿乳白色（微黃）濃稠液體，肝胰腺明顯偏小且顏色偏白，性腺嚴(yán)重萎縮或乳化（有的病蟹幾乎找不到性腺）;病蟹的螯足和步足空癟，肌纖維間有水樣物;心臟被乳白色液體包裹，心肌彈性差;鰓呈灰褐色。

2.1.2 血涂片觀察 血淋巴涂片檢查顯示，在病蟹血淋巴中有大量病原—血卵渦鞭蟲（Hematodinium sp.），該寄生蟲在血淋巴中主要以多核滋養(yǎng)體和團(tuán)聚體的形態(tài)存在，見圖2（封二）。

2.1.3 組織病理變化

2.1.3.1 鰓 病蟹鰓的切片顯示，鰓絲腔內(nèi)充斥著大量血卵渦鞭蟲蟲體，其中，以多核滋養(yǎng)體為主，部分鰓絲腔內(nèi)出現(xiàn)蛛網(wǎng)狀滋養(yǎng)體;中度感染的病蟹鰓絲基本完整，但部分鰓小隔消失;重度感染的鰓絲管腔膨脹變形，鰓絲末端的鰓小片膨脹變形，鰓小隔完全缺失。見圖3（封二）。

2.1.3.2 肝胰腺 中度感染時(shí)，病蟹肝胰臟中有大量血卵渦鞭蟲進(jìn)入肝小管間隙，肝小管間隙明顯增大，結(jié)締組織幾乎完全缺失，但肝胰臟整體結(jié)構(gòu)尚在;重度感染時(shí)，肝胰臟組織結(jié)構(gòu)完全被破壞，絕大部分肝小管消失，僅存少量肝小管輪廓。見圖4（封三）。

2.1.3.3 心臟 中度感染的病蟹，心臟基本組織結(jié)構(gòu)完整，部分心肌纖維溶解斷裂，肌束間隙增大，肌絲纖維互相分離;重度感染的病蟹心臟，大量心肌纖維彎曲、斷裂、溶解壞死，肌絲纖維相互分離，喪失原本的條帶結(jié)構(gòu)，肌纖維間結(jié)締組織完全破損缺失，心臟內(nèi)充滿蟲體。見圖5（封三）。

2.1.3.4 體肌肉 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹體肌肉，部分組織結(jié)構(gòu)完整，部分肌絲斷裂溶解，肌絲纖維排列疏松，相鄰肌絲纖維互相分離，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹體肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，喪失正常緊密的條帶狀結(jié)構(gòu)，壞死部分充滿血卵渦鞭蟲體。見圖6（封三）。

2.1.3.5 螯足 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹螯足肌肉，組織結(jié)構(gòu)基本完整，部分肌絲斷裂溶解，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹螯足肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，幾乎失去原有組織結(jié)構(gòu)。見圖7（封三）。

2.1.3.6 第一步足 中度感染的病蟹第一步足肌肉，部分組織結(jié)構(gòu)完整，部分肌絲斷裂溶解，間隙中侵入大量的血卵渦鞭蟲;重度感染的病蟹第一步足肌肉，大量肌肉組織變性壞死，肌絲排列紊亂且相互分離，大部分肌絲纖維彎曲、斷裂、溶解，留下大片空白處，幾乎失去原有組織結(jié)構(gòu)。見圖8（封三）。

2.1.3.7 性腺 中度感染血卵渦鞭蟲的病蟹性腺非常小，萎縮明顯，病理切片觀察，性腺已經(jīng)完全失去其原有組織結(jié)構(gòu)，僅存少量卵母細(xì)胞輪廓，性腺內(nèi)部充滿血卵渦鞭蟲蟲體;重度感染的病蟹已經(jīng)完全找不到性腺，性腺已經(jīng)完全乳化或萎縮。見圖9（封三）。

2.2 討論

本次采樣的病蟹外觀癥狀與許文軍等[1-2]、王印庚等[3]所描述的癥狀相似，該病也有 “肌肉白濁癥”“牛奶病”和“牙膏病”等稱謂，各種命名均是依據(jù)其主要癥狀（肌肉和肝胰腺等組織被乳化呈白色或淡黃色液體）而來。

血卵渦鞭蟲被認(rèn)為是一類感染海水甲殼類的寄生性甲藻（parasitic dinoflagellates）[4]。本研究在病蟹血淋巴、乳化液體、鰓、肝胰臟、心臟、體肌肉、螯足肌肉、第一步足肌肉等組織器官內(nèi)發(fā)現(xiàn)了大量血卵渦鞭蟲，觀察到了該寄生蟲的多核滋養(yǎng)體、單核滋養(yǎng)體、絲狀滋養(yǎng)體、類變形蟲滋養(yǎng)體、團(tuán)聚體、蛛網(wǎng)狀滋養(yǎng)體和孢子前細(xì)胞等各個(gè)發(fā)育時(shí)期的蟲體，這一結(jié)果與王金鳳等[5]的研究一致。血卵渦鞭蟲在宿主體內(nèi)的系統(tǒng)性感染增殖導(dǎo)致宿主的主要器官和組織均發(fā)生不同程度的病變，本研究采樣的血淋巴、心臟、肝胰腺、鰓、體肌肉、螯足、第一步足和性腺等重要的組織器官均受到不同程度的破壞。各組織器官被破壞的程度與血卵渦鞭蟲感染程度呈正相關(guān)，中等程度感染的病蟹多數(shù)組織器官尚存比較完整的組織結(jié)構(gòu)，而重度感染（乳化嚴(yán)重）的病蟹體內(nèi)充滿大量乳白色液體，其各組織器官受損也最為明顯，部分組織器官（肝胰腺和螯足肌肉）已經(jīng)失去原有組織結(jié)構(gòu)，性腺也完全消失。

從各組織器官被破壞程度看，肝胰腺、螯足肌肉和體肌肉的損傷最為明顯，其次是第一步足肌肉和心臟，鰓的損傷相對(duì)最小。性腺組織有些特殊，重度感染的病蟹完全失去了性腺（或性腺未發(fā)育），中等程度感染的病蟹僅存疑似性腺，切片顯示完全失去性腺原有結(jié)構(gòu)，僅存卵母細(xì)胞輪廓。其原因有可能是血卵渦鞭蟲的感染能夠抑制三疣梭子蟹的性腺發(fā)育。本次采樣沒有雄蟹，沒有觀察到雄蟹感染后性腺的情況，血卵渦鞭蟲對(duì)三疣梭子蟹性腺的影響是溶解破壞還是抑制生長還有待于進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)：

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許文軍，徐漢祥，施惠，等.三疣梭子蟹Portunus trituberculatus（Miers） 血卵渦鞭蟲病診斷與綜合防治措施[J].現(xiàn)代漁業(yè)信息，2006，21（11）：27-28.

[2] 許文軍，施慧，徐漢祥，等.養(yǎng)殖梭子蟹血卵渦鞭蟲感染的初步研究[J].水生生物學(xué)報(bào)，2007，31（5）：27-32.

[3] 王印庚，楊洋，張正，等.津冀地區(qū)養(yǎng)殖三疣梭子蟹大量死亡的病原和病理分析[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2017，24（3）：596-605.

[4] 李才文，許文軍.海水甲殼類寄生性病原血卵渦鞭蟲（Hematodinium spp.）研究進(jìn)展[J].海洋與湖沼，2014，45（1）：1-10.

[5] 王金鳳，李才文，李蒙，等.血卵渦鞭蟲感染三疣梭子蟹的病原形態(tài)學(xué)及組織病理學(xué)變化[J].海洋與湖沼，2015，46（4）：748-757.

（收稿日期：2021-08-05）