牙周炎患者齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR 水平變化及意義

謝華萍，張雪舟

（1.廣東祈福醫(yī)院 口腔科，廣東 廣州 510000；2.南方科技大學(xué)醫(yī)院 口腔科，廣東 深圳 518000）

0 引言

牙周炎是臨床常見的發(fā)生于牙周組織的慢性炎癥，一般由牙菌斑中的細(xì)菌侵犯所致，主要表現(xiàn)為牙齒松動、牙齦紅腫等[1]。牙周炎多發(fā)于35 歲以上的成人中，由于早期癥狀不明顯而常被忽視，但等到癥狀嚴(yán)重時牙齒多被破壞吸收，無法保全，所以早診斷早治療十分關(guān)鍵。尋找診斷牙周炎的特異性指標(biāo)是當(dāng)前臨床研究的重點。研究顯示，牙周組織細(xì)胞可以分泌MMPs（基質(zhì)金屬蛋白酶），其中MMP-8 作為MMPs 中的一類膠原酶，與牙周炎的形成與發(fā)展密切相關(guān)[2]。而CD147（細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子）可以激活鄰近成纖細(xì)胞使其產(chǎn)生MMPs，同樣與牙周炎的發(fā)展存在相關(guān)性。此外M-CSFR 作為M-CSF（巨噬細(xì)胞集落刺激因子）的受體，也參與了牙周炎的形成。但目前臨床缺少關(guān)于牙周炎患者CD147、MMP-8 及M-CSFR水平變化的研究?；诖?，本次選擇了60 例牙周炎患者和40 例健康志愿者進(jìn)行了對照研究，現(xiàn)總結(jié)如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次選取廣東祈福醫(yī)院2020 年1 月至2020 年10月收治的60 例牙周炎患者作為研究組，選擇同一時期的40 例健康志愿者作為對照組。研究組男33 例，女27 例。年齡30～73 歲，平均（49.78±11.46）歲；對照組男性24 例，女性16 例。年齡31～74 歲，平均（49.58±11.62）歲。該研究已經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審核批準(zhǔn)，兩組的一般資料沒有顯著差異（P>0.05），可進(jìn)行研究。

1.2 入選標(biāo)準(zhǔn)

（1）納入標(biāo)準(zhǔn)：①牙周炎患者均符合牙周病新分類診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：2 顆或2 顆以上不相鄰牙的鄰面臨床附著喪失或有2 顆及以上牙齒的頰側(cè)或舌側(cè)臨床附著喪失≥3mm 且合并有牙周袋≥3mm。符合其中一條即可；②牙周炎患者均6 個月內(nèi)未行過牙周治療；③健康志愿者均無牙周病及病史，且3 個月內(nèi)未行過牙周治療；④納入研究者均不抽煙，不存在嚴(yán)重器質(zhì)性疾病，且6 個月內(nèi)沒有用過抗生素或免疫制劑；⑤納入研究者均知曉研究內(nèi)容且自愿簽字同意。

（2）排除標(biāo)準(zhǔn)：①處于妊娠期或哺乳期女性；②存在嚴(yán)重器質(zhì)性疾病或系統(tǒng)性疾??；③近期接受過牙周治療，或使用過抗生素、免疫制劑；④非自愿參與研究或中途退出研究。

1.3 方法

（1）研究分組：選擇我院收治的60 例牙周炎患者作為研究組，選擇同一時期的40 例健康志愿者作為對照組。其中60 例牙周炎患者按照牙周病國際分類標(biāo)準(zhǔn)（2018 版）[4]將其分為輕中度組和重度組，每組各30 例。牙周炎分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期：鄰面最嚴(yán)重位點附著喪失：1～2mm，影像學(xué)骨喪失：牙根冠方1/3（<15%），最大PD（牙周探診深度）≤4mm，以水平型骨吸收為主；Ⅱ期：鄰面最嚴(yán)重位點附著喪失：3～4mm，影像學(xué)骨喪失：牙根冠方1/3（15%～33%），最大PD ≤5mm，以水平型骨吸收為主；Ⅲ期：鄰面最嚴(yán)重位點附著喪失≥5mm，影像學(xué)骨喪失延伸到根中1/3 或根尖1/3，因牙周炎失牙數(shù)≤4 顆，最大PD ≥6mm，垂直型骨吸收≥3mm，根分叉病變Ⅱ～Ⅲ度，中度壓槽骨破壞；Ⅳ期：鄰面最嚴(yán)重位點附著喪失≥5mm，影像學(xué)骨喪失延伸到根中1/3 或根尖1/3，因牙周炎失牙數(shù)≥5 顆，在Ⅲ期基礎(chǔ)上伴有咀嚼功能異常、咬合紊亂、重度壓槽骨破壞的等需要綜合治療的癥狀。其中Ⅰ、Ⅱ期為輕中度組，Ⅲ、Ⅳ期為重度組。

（2）齦溝液采集：①選擇頸部無填充體無齲損的牙齒的4 個鄰面位點（包括1 顆第一磨牙和1 顆單根牙的近遠(yuǎn)中鄰面位點），用無菌刮匙將牙齦上的菌斑及牙石去除，并隔濕、吹干牙面；②在牙周袋最深處放入濾紙條（2mm×8mm），保留30s 收集齦溝液；③濾紙條取出后放入裝有PBS（1mL）的試管中，在室溫下洗脫40min；④在4℃下，以1000r/min 的速度離心5min 后收集上清液，保存在-20℃中等待檢測。

（3）檢測指標(biāo)：采用免疫酶聯(lián)吸附試驗對納入研究者的齦溝液CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平進(jìn)行檢測。CD147 試劑盒購自上海臻科生物科技有限公司，MMP-8 試劑盒購自上海潤裕生物科技有限公司，M-CSFR 試劑盒購自上海雙贏生物科技有限公司。檢測操作均按照試劑盒說明進(jìn)行。

1.4 評價指標(biāo)

①比較研究組與對照組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR 水平；②比較輕中度組和重度組齦溝液中CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

使用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 22.0 對本次研究所涉及的數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析，CD147 水平等計量資料以（）表示，用t進(jìn)行檢驗，性別等計數(shù)資料以[n（%）]表示，用χ2進(jìn)行檢驗；當(dāng)數(shù)據(jù)P<0.05 表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究組與對照組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較

研究組齦溝液中CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平均高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），如表1 所示。

表1 研究組與對照組齦溝液CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較（）

表1 研究組與對照組齦溝液CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較（）

2.2 輕中度組和重度組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較

重度組齦溝液中CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平均高于輕中度組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），如表2 所示。

表2 輕度組和重度組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較（）

表2 輕度組和重度組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR水平比較（）

3 討論

牙周炎是由牙菌斑中微生物引發(fā)的牙周支持組織炎癥，牙槽骨吸收等牙周支持組織慢性感染性疾病，如不及時治療會導(dǎo)致牙齒松動甚至喪失，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。而且牙周炎所導(dǎo)致的壓槽骨吸收是不可逆轉(zhuǎn)的，所以早診斷早治療對于牙周炎患者十分重要。

齦溝液是通過結(jié)合上皮及齦溝內(nèi)壁上皮進(jìn)入齦溝的結(jié)締組織液體，其成分與血清相似。通常情況下，齦溝內(nèi)會有少許齦溝液聚積，但由于菌斑微生物及其代謝產(chǎn)物的存在，會有滲透梯度的變化。研究發(fā)現(xiàn)，齦溝液中的炎性因子聚集與牙周炎的發(fā)生及發(fā)展息息相關(guān)，當(dāng)牙齦出現(xiàn)炎癥時，齦溝和結(jié)締組織會出現(xiàn)水腫，導(dǎo)致齦溝液增加，所以，可以通過檢測齦溝液中的細(xì)胞因子評估牙周炎的病情進(jìn)展[5]。牙周組織在抵抗牙菌斑微生物時會出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，從而產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、細(xì)胞因子等炎癥介質(zhì)。MMPs 可以通過降解細(xì)胞外基質(zhì)，破壞牙周支持組織，促進(jìn)牙槽骨的吸收，加重牙周病變。研究顯示，重度牙周炎患者的血清MMP-8 水平明顯比正常人群高[6]。CD147又稱EMMPRIN（細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子），是一種跨膜糖蛋白，可以通過激活鄰近成纖細(xì)胞使其產(chǎn)生MMPs。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)，CD147 廣泛分布于炎性牙齦的上、下皮下結(jié)締組織以及基底層細(xì)胞膜中，且分布高于正常牙齦，而且，研究證實CD147 與牙周炎、種植體周圍炎等口腔疾病聯(lián)系密切[7]。而M-CSFR作為M-CSF 的受體也參與了牙周炎的形成。骨吸收是牙周炎主要的病理過程，在牙周炎快速發(fā)展的過程中產(chǎn)生的致炎因子會使破骨細(xì)胞活化從而破壞和吸收牙槽骨，加重牙周炎程度，而M-CSF 由成骨細(xì)胞產(chǎn)生，靶向破骨細(xì)胞，其可以通過促進(jìn)破骨細(xì)胞生成而參與牙周炎的炎癥過程[8]。

本次研究發(fā)現(xiàn)：研究組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR 水平均高于對照組，差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這與柴琳[9]等人的研究結(jié)果相似，其研究采用酶聯(lián)免疫法檢測了20 例牙周炎患者和20 例健康人的齦溝液CD147 水平，發(fā)現(xiàn)牙周炎患者的CD147 水平高于健康人，且CD147 水平隨牙周炎癥狀的減輕而降低。這提示牙周炎患者齦溝液的CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平高于正常人群。同時，研究還發(fā)現(xiàn)：重度組齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR 水平均高于輕中度組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。這與孫欣彤[10]等人的研究結(jié)果相似，其研究選擇了50 例慢性牙周炎患者，并按病情分為了中度組（23 例）和重度組（27 例），選擇同期的25 例健康志愿者作為對照組，經(jīng)過檢測發(fā)現(xiàn)牙周炎患者齦溝液MMP-8 水平高于對照組，且齦溝液MMP-8 水平與病情程度成正比。這提示重度牙周炎患者齦溝液中CD147、MMP-8 及M-CSFR 水平高于輕中度患者。其水平與病情程度成正比。

綜上所述，牙周炎患者齦溝液中CD147、MMP-8及M-CSFR 水平隨牙周炎的嚴(yán)重程度而上升，可作為檢測牙周炎嚴(yán)重程度的指標(biāo)，為治療提供依據(jù)。