酒赤芍炮制工藝優(yōu)化及其體外抗凝血作用考察

武艷雪　陳天麗　侯曉琳　閆妍　方晶　王孟聰　翁麗麗

中圖分類號 R285 文獻標志碼 A 文章編號 1001-0408（2021）21-2613-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.21.09

摘 要 目的：優(yōu)化酒赤芍炮制工藝，并考察其體外抗凝血效果。方法：以氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸和水溶性浸出物的含量為考察指標，通過層次分析法（AHP）、指標相關(guān)性的指標權(quán)重確定方法（CRITIC）以及兩者的混合加權(quán)法確定各指標的權(quán)重系數(shù)并計算綜合評分，然后采用Box-Behnken響應面法優(yōu)化酒赤芍的悶潤時間、炒制時間和炒制溫度等參數(shù)，再采用體外抗凝血實驗對按最優(yōu)炮制工藝所制備的酒赤芍進行初步藥效學考察。結(jié)果：采用AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、芍藥苷、苯甲酸、水溶性浸出物的權(quán)重系數(shù)分別為0.233 9、0.131 7、0.183 3、0.078 9、0.372 3。酒赤芍的最優(yōu)炮制工藝為悶潤時間35 min、炒制時間20 min、炒制溫度120 ℃。體外抗凝血實驗結(jié)果顯示，生赤芍和酒赤芍均能顯著延長小鼠血漿的凝血酶時間、凝血酶原時間、活化部分凝血活酶時間，且酒赤芍的作用顯著優(yōu)于生赤芍（P<0.05）。結(jié)論：優(yōu)化所得酒赤芍的炮制工藝穩(wěn)定、可行;按此工藝所制酒赤芍的體外抗凝血作用較生品更好。

關(guān)鍵詞 赤芍;酒赤芍;抗凝血作用;工藝優(yōu)化;Box-Behnken響應面法

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To optimize the processing technology of Paeonia lactiflora stir-baked with wine， and to investigate its in vitro anticoagulant effect. METHODS： The weight coefficient of each index was determined and the comprehensive score was calculated with analytic hierarchy process （AHP）， Criteria Importance Though Intercrieria Correlation （CRITIC） and AHP-CRITIC weighting method， using the contents of oxypaeoniflorin， albiflorin， paeoniflorin， benzoic acid and water-soluble extract as index. Box-Behnken response surface methodology was used to optimize the parameters of P. lactiflora stir-baked with wine， such as moistening time， frying time and frying temperature. Then in vitro anticoagulant experiment was used to investigate the pharmacodynamics of P. lactiflora stir-baked with wine prepared according to the optimal processing technology. RESULTS： The weight coefficients of albiflorin， oxypaeoniflorin， paeoniflorin， benzoic acid and water-soluble extract determined by AHP-CRITIC weighting method were 0.233 9， 0.131 7， 0.183 3， 0.078 9， 0.372 3， respectively; the optimal processing technology of P. lactiflora stir-baked with wine included moistening time of 35 min， frying time of 20 min and frying temperature of 120 ℃. The results of in vitro anticoagulant test showed that P. lactiflora and P. lactiflora stir-baked with wine could significantly prolong the time of thrombin time， prothrombin time， activated partial thrombin time of plasma; the effects of P. lactiflora stir-baked with wine were significantly better than those of P. lactiflora （P<0.05）. CONCLUSIONS： The optimized processing technology of P. lactiflora stir-baked with wine is stable and feasible. The in vitro anticoagulant effect of P. lactiflora stir-baked with wine prepared by this tehcnology is better than that of raw products.

KEYWORDS? ?Paeonia lactiflora; Paeonia lactiflora stir-baked with wine; Anticoagulation; Technology optimization; Box-Behnken response surface methodology

赤芍為毛茛科植物芍藥Paeonia lactiflora Pall. 或川赤芍Paeonia veitchii Lynch.的干燥根，味苦，微寒，歸肝經(jīng)[1]。赤芍的主要活性成分為芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酸等，具有抗腫瘤、抗凝、抗血栓、降血脂、抗動脈粥樣硬化等藥理作用[2]。赤芍的炮制方法有清炒、麩炒、酒制、醋制等，現(xiàn)代臨床較為常用的有赤芍生品和酒制品[3]。酒制后可增強赤芍活血化瘀的功效[4]。雖然2020年版《中國藥典》（一部）和多地的炮制規(guī)范均對酒赤芍有所記載[1，5]，但并未對其炮制工藝參數(shù)進行量化。目前有關(guān)酒赤芍炮制工藝的研究還較少，已有的與赤芍相關(guān)的炮制工藝研究中考察指標也較為單一，大多局限于芍藥苷的含量，且缺乏相關(guān)藥效學實驗驗證，不能全面反映該飲片的質(zhì)量內(nèi)涵[6]。鑒于此，本研究擬以氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸和水溶性浸出物含量的綜合評分為考察指標，基于層次分析法（AHP）、指標相關(guān)性的指標權(quán)重確定方法（CRITIC）以及兩者的混合加權(quán)法計算出各指標的權(quán)重系數(shù)，然后結(jié)合Box-Behnken響應面法優(yōu)化酒赤芍的炮制工藝，并通過體外抗凝血實驗初步考察按最優(yōu)炮制工藝所制備的酒赤芍的藥效，為赤芍飲片的炮制和臨床應用提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器包括Prominence-ILC-2030型高效液相色譜（HPLC）儀（日本Shimadzu公司）、MTN-Ⅱ型半自動凝血分析儀（長春市曼特諾醫(yī)療器械有限公司）、JA2603B型千分之一電子天平（上海天美天平儀器有限公司）、FA1004B型萬分之一電子天平（上海佑科儀器儀表有限公司）、DHG-9053A型電熱鼓風干燥箱（上海一恒科學儀器有限公司）、FST-Ⅲ-20s型普力菲爾超純水機（上海富詩特儀器設備有限公司）、KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、MS-5型炒藥機（常州市金壇邁斯機械有限公司）、HT-866迷你型紅外測溫儀（廣州市宏誠集業(yè)電子科技有限公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

赤芍飲片（批號HML20190722-03）購自吉林國安藥業(yè)有限公司，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學藥學院中藥鑒定教研室翁麗麗教授鑒定為毛茛科植物芍藥P. lactiflora Pall.的干燥根。氧化芍藥苷對照品（批號P12N9S74762，純度≥98%）、芍藥內(nèi)酯苷對照品（批號Y21A9H59553，純度≥91.4%）、芍藥苷對照品（批號L07M9Q60533，純度≥98%）、苯甲酸對照品（批號Z18S7H21155，純度≥98%）均購自上海源葉生物技術(shù)有限公司;活化部分凝血活酶時間（APTT）檢測試劑盒（批號B202005B）、凝血酶時間（TT）檢測試劑盒（批號D202005A）、凝血酶原時間（PT）檢測試劑盒（批號A202008A）均購自賽奧生物科技（青島）有限公司;磷酸、甲醇為色譜純，其余試劑為分析純，水為超純水。

1.3 動物

本研究所用動物為SPF級健康ICR小鼠，共18只，雄性，4～6周齡，體質(zhì)量18～22 g，購自長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責任公司，實驗動物生產(chǎn)許可證號為SCXK（吉）2020-0002。小鼠飼養(yǎng)于溫度為（24±2） ℃、12 h光照/12 h黑暗的動物房內(nèi)，予以常規(guī)飼料飼養(yǎng)，自由飲水、進食。小鼠適應性飼養(yǎng)1周后用于實驗。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 混合對照品溶液 精密稱取氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸對照品各適量，置于同一量瓶中，加甲醇溶解并制成上述成分質(zhì)量濃度分別為0.108 6、0.194 0、0.134 8、0.124 7 mg/mL的混合對照品溶液，備用。

2.1.2 供試品溶液 取酒赤芍樣品粗粉（過二號篩，下同）0.5 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，放冷;再次稱定質(zhì)量，用80%甲醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，過0.22 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3 陰性對照溶液 以80%甲醇作為陰性對照溶液。

2.2 酒赤芍的制備方法

取赤芍飲片200 g，加黃酒28 g，拌勻，悶潤一定時間，然后置于炒藥機內(nèi)，在一定溫度下炒制一定時間，取出，放涼，即得。

2.3 酒赤芍中4種指標成分含量測定方法的建立

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以Agilent Eclipse XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以甲醇（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動相進行梯度洗脫（0～20 min，6%A→18%A;20～35 min，18%A→20%A;35～70 min，20%A;70～75 min，20%A→95%A;75～85 min，95%A;85～90 min，95%A→5%A;90～100 min，5%A）;流速為1.0 mL/min;柱溫為28 ℃;檢測波長為230 nm;進樣量為10 μL。取“2.1”項下各溶液（其中酒赤芍樣品是按“2.5”項下響應面實驗中8號方案制備，下同），分別按此色譜條件進樣測定，記錄色譜圖（圖1）。結(jié)果顯示，各待測成分均達到基線分離，各待測成分色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均大于10 000，且陰性對照溶液對測定無干擾，表明本方法的適用性較好。

2.3.2 線性關(guān)系考察 取氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸對照品各適量，分別按“2.1.1”項下方法制成氧化芍藥苷質(zhì)量濃度分別為0.014 5、0.029 0、0.057 9、0.108 6、0.362 0、0.736 0、1.104 0 mg/mL，芍藥內(nèi)酯苷質(zhì)量濃度分別為0.025 9、0.051 7、0.103 5、0.194 0、0.323 3、0.646 7、1.293 3 mg/mL，芍藥苷質(zhì)量濃度分別為0.018 0、0.035 9、0.071 9、0.134 8、0.337 0、0.674 0、1.138 7 mg/mL，苯甲酸質(zhì)量濃度分別為0.016 6、0.033 3、0.066 5、0.124 7、0.247 0、0.332 5、0.623 5 mg/mL的系列線性工作液。取上述系列線性工作液適量，分別按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（x，mg/mL）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸。結(jié)果顯示，各待測成分在其質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與對應峰面積的線性關(guān)系均良好（r均大于0.999 0），詳見表1。

2.3.3 精密度試驗 精密吸取“2.1.1”項下混合對照品溶液適量，按“2.3.1”項下色譜條件連續(xù)進樣6次，記錄峰面積。結(jié)果，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸峰面積的RSD分別為0.58%、1.79%、1.89%、1.69%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取酒赤芍粗粉，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，于室溫下密閉放置0、2、4、8、12、24、48 h時按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸峰面積的RSD分別為1.67%、0.89%、0.66%、1.30%（n=7），表明該供試品溶液在室溫下密閉放置48 h內(nèi)的穩(wěn)定性較好。

2.3.5 重復性試驗 取酒赤芍粗粉0.5 g，共6份，分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，然后按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積，采用外標法計算各成分的含量。結(jié)果顯示，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸的平均含量分別為0.193%、1.622%、4.184%、0.520%，RSD分別為1.90%、0.85%、0.24%、1.01%（n=6），表明本方法的重復性較好。

2.3.6 加樣回收試驗 取已知含量的酒赤芍粗粉9份，每份約0.25 g，精密稱定，分別按已知成分含量的50%、100%、150%加入相應對照品溶液，每個濃度水平各平行3份;然后分別按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液后，再按“2.3.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算各成分的加樣回收率。結(jié)果顯示，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸的平均加樣回收率分別為100.21%、99.81%、100.79%、100.77%，RSD分別為1.34%、0.21%、1.42%、1.69%（n=9），表明本方法的準確度較好。加樣回收試驗結(jié)果見表2。

2.4 水溶性浸出物含量測定

取酒赤芍粗粉適量，按照2020年版《中國藥典》（四部）通則“2201熱浸法”測定酒赤芍中水溶性浸出物的含量[7]。

2.5 酒赤芍炮制工藝的優(yōu)化

查閱文獻[8-10]可知，炒制溫度、炒制時間、悶潤時間對酒赤芍飲片的質(zhì)量有顯著影響。因此，本研究結(jié)合前期預實驗結(jié)果，以悶潤時間（A）、炒制時間（B）、炒制溫度（C）為考察因素，以氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸和水溶性浸出物含量的綜合評分為評價指標，優(yōu)化酒赤芍的炮制工藝。綜合評分的計算公式如下：綜合評分=（氧化芍藥苷含量/氧化芍藥苷含量最大值×氧化芍藥苷權(quán)重系數(shù)+芍藥內(nèi)酯苷含量/芍藥內(nèi)酯苷含量最大值×芍藥內(nèi)酯苷權(quán)重系數(shù)+芍藥苷含量/芍藥苷含量最大值×芍藥苷權(quán)重系數(shù)+苯甲酸含量/苯甲酸含量最大值×苯甲酸權(quán)重系數(shù)+水溶性浸出物含量/水溶性浸出物含量最大值×水溶性浸出物權(quán)重系數(shù)）×100。酒赤芍炮制工藝優(yōu)化Box-Behnken響應面設計的因素與水平見表3，實驗安排與結(jié)果見表4。

2.6 各成分含量指標權(quán)重系數(shù)的確定

2.6.1 AHP法確定權(quán)重系數(shù) 中藥具有整體性的特點，其藥效一般是許多化學成分的綜合作用[11]。因此，本研究根據(jù)各成分的含量及其藥理作用[3]，將上述指標分成3個層次并確定優(yōu)先順序為水溶性浸出物>芍藥苷>氧化芍藥苷≈苯甲酸≈芍藥內(nèi)酯苷。據(jù)此順序，采用yaahp v7.5軟件構(gòu)建各指標成對比較的優(yōu)先判斷矩陣（表5），并對矩陣進行歸一化處理，計算出水溶性浸出物、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酸的權(quán)重系數(shù)分別為0.381 6、0.261 4、0.170 0、0.109 0、0.078 0，一致性比率（CR）=0.028 1<0.10，表明該指標成對比較的優(yōu)先判斷矩陣具有滿意的一致性，求得的權(quán)重系數(shù)有效[12]。

2.6.2 CRITIC法確定權(quán)重系數(shù) 將表4中各成分的含量進行無量綱化處理以消除單位量綱。無量綱數(shù)據(jù)的計算公式為：無量綱數(shù)據(jù)=（某指標檢測值-該指標最小值）/（該指標最大值-該指標最小值）。然后將無量綱數(shù)據(jù)代入以下公式計算各指標的權(quán)重系數(shù)（Wj）：Cj=? ?σj[∑][i=1][n]（1-rij），Wj=Cj /[∑][j=1][m]Cj。式中，Cj表示第j個（j=1，2，3，……，n）指標所包含的信息量，σj為無量綱化處理后列向量的標準差，rij表示指標i（i=1，2，3，……，n）和指標j之間的相關(guān)系數(shù)，Wj表示第j個指標的權(quán)重系數(shù)[13-14]。結(jié)果顯示，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸、水溶性浸出物的權(quán)重系數(shù)分別為0.229 1、0.261 0、0.133 0、0.192 0、0.185 0。

2.6.3 AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定權(quán)重系數(shù) 由于AHP-CRITIC混合加權(quán)法得到的權(quán)重系數(shù)在理論上更加全面、合理且符合實際，故筆者將上述2種方法結(jié)合后計算各指標的復合權(quán)重系數(shù)（ωAHP-CRITICij）：ωAHP-CRITICij=ωAHPij×ωCRITICij/∑（ωAHPij×ωCRITICij）。式中，ωAHPij表示通過AHP法計算得到的權(quán)重系數(shù)，ωCRITICij表示通過CRITIC法計算得到的權(quán)重系數(shù)，i、j分別表示指標i和指標j（加權(quán)法算的是一種指標相對于另一種指標的權(quán)重，故記為i和j）。結(jié)果顯示，氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸、水溶性浸出物的權(quán)重系數(shù)分別為0.131 7、0.233 9、0.183 3、0.078 9、0.372 3。

2.6.4 3種權(quán)重分析法計算的綜合評分結(jié)果比較 分別采用上述3種權(quán)重分析法所得的權(quán)重系數(shù)對響應面實驗結(jié)果進行評分，結(jié)果見表6。采用SPSS 21.0軟件對基于3種權(quán)重分析法所得的綜合評分結(jié)果進行相關(guān)系數(shù)分析。結(jié)果顯示，基于AHP法與AHP-CRITIC混合加權(quán)法、CRITIC法與AHP-CRITIC混合加權(quán)法、AHP法與CRITIC法所得綜合評分的相關(guān)系數(shù)分別為0.726、0.887、0.909，三者間的相關(guān)性均顯著（P<0.01），說明3種方法得到的綜合評分結(jié)果具有一致性。采用SPSS 21.0軟件對3種方法所得權(quán)重系數(shù)的相關(guān)性進行分析。結(jié)果顯示，CRITIC法與AHP法所得權(quán)重系數(shù)之間的相關(guān)系數(shù)為0.046，相關(guān)性不顯著（P>0.05），說明二者所反映的信息不具有疊加性。因AHP-CRITIC混合加權(quán)法是從主、客觀兩個方面進行考慮，所載含的信息更為科學、合理，故本研究最終選擇AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定的權(quán)重系數(shù)計算各指標的綜合評分：綜合評分=（芍藥苷含量/芍藥苷含量最大值×0.183 3+水溶性浸出物含量/水溶性浸出物含量最大值×0.372 3+芍藥內(nèi)酯苷含量/芍藥內(nèi)酯苷含量最大值×0.233 9+氧化芍藥苷含量/氧化芍藥苷含量最大值×0.131 7+苯甲酸含量/苯甲酸含量最大值×0.078 9）×100。

2.7 模型擬合及驗證實驗

2.7.1 模型擬合 以綜合評分為因變量，以因素A、B、C為自變量，應用Design-Expert 8.0.6.1軟件進行二次多元回歸擬合模型分析，得到回歸方程為：綜合評分=4.45+0.70A-0.82B-0.085C-0.26AB+0.39AC+0.94BC-0.27A2+1.12B2-0.68C2（R2=0.921，P=0.007 3）。方差分析結(jié)果顯示，因素B、C對綜合評分具有顯著影響（P<0.05），詳見表7。由R2和P值可知，該回歸方程的擬合度較好，實驗誤差較小，能夠用來對酒赤芍炮制工藝進行分析和預測。

為進一步考察各因素交互作用的影響，本研究采用Design-Expert 8.0.6.1軟件繪制了響應面圖和等高線圖，詳見圖2。由圖2可知，A與B的交互作用較強。以該軟件求解上述二元回歸方程，得到酒赤芍的最優(yōu)炮制工藝為悶潤時間35 min、炒制時間20 min、炒制溫度120 min;模型預測值為98.75。

2.7.2 最優(yōu)炮制工藝的驗證 取赤芍生品飲片，按“2.7.1”項下最優(yōu)炮制工藝進行3次驗證實驗。結(jié)果顯示，3次驗證實驗中各指標綜合評分的平均值為95.98（RSD為2.12%，n=3），與模型預測值（98.75）的偏差為2.81%，說明該飲片酒制工藝的準確性與穩(wěn)定性均良好。

2.8 酒赤芍的體外抗凝血活性考察

2.8.1 樣品溶液的制備 取赤芍生品粗粉以及按最優(yōu)炮制工藝制備的酒赤芍粗粉各約1 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入生理鹽水50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率250 W，頻率40 kHz）處理30 min，放冷;再次稱定質(zhì)量，用生理鹽水補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。將續(xù)濾液蒸干，再次加入適量生理鹽水溶解，然后再以3 000 r/min離心10 min，取上清液，得質(zhì)量濃度均為0.104 9 g/mL的樣品溶液（以生藥量計），備用。

2.8.2 分組與給藥 將18只小鼠按隨機數(shù)字表法隨機分為空白組、生赤芍組和酒赤芍組，每組6只。將小鼠摘眼球取血，將采集的血液置于含有3.2%檸檬酸鈉的抗凝采血管中，將各組6只小鼠的血液分別混勻后，以3 000 r/min離心10 min，收集血漿。將血漿置于-20 ℃冰箱中，備用。

2.8.3 血漿凝血三項的檢測與分析 按照相應試劑盒說明書方法操作，采用半自動凝血分析儀分別檢測各組小鼠血漿的PT、TT、APTT。其中，檢測PT、APTT時生赤芍組均加入50 μL血漿和25 μL生赤芍樣品溶液，酒赤芍組均加入50 μL血漿和25 μL酒赤芍樣品溶液，空白組均加入50 μL血漿和25 μL生理鹽水;檢測TT時生赤芍組加入100 μL血漿和50 μL生赤芍樣品溶液，酒赤芍組加入100 μL血漿和50 μL酒赤芍樣品溶液，空白組加入100 μL血漿和50 μL生理鹽水。實驗重復3次。采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗。檢驗水準α=0.05。結(jié)果顯示，與空白組比較，生赤芍組和酒赤芍組的PT、TT、APTT均顯著延長（P<0.05），且酒赤芍組的PT、TT、APTT較生赤芍組均顯著延長（P<0.05）。各組小鼠血漿的凝血三項指標檢測結(jié)果見表8。

3 討論

中藥具有整體性的特點，其藥效一般是許多化學成分的綜合作用。有報道指出，以浸出物含量與特定活性成分含量組成的復合指標，可更好地控制飲片質(zhì)量[2，15]。筆者在前期研究中發(fā)現(xiàn)，不管是采用冷浸法還是熱浸法對酒赤芍中浸出物進行提取，均以水溶性浸出物的含量較高。因此，本研究最終確定以赤芍中含量較高的幾種成分（氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸）和水溶性浸出物含量的綜合評分為評價指標[3]，采用Box- Behnken響應面法優(yōu)化酒赤芍的炮制工藝。

筆者前期通過單因素實驗考察了不同黃酒加入量（20、24、28、30、32、36、40 g）對酒赤芍飲片質(zhì)量的影響，并確定了最佳的加酒量為28 g。此外，筆者還通過查閱文獻、對藥廠進行調(diào)研及進行預實驗等方式，確定了本研究中的炒制溫度、炒制時間、悶潤時間的水平。本研究采用AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定各成分指標的權(quán)重系數(shù)，既能夠?qū)⒊粗茰囟?、炒制時間、悶潤時間的重要性量化，又能夠通過CRITIC法體現(xiàn)出樣本的客觀數(shù)據(jù)信息，消除人為設定量化指標的主觀性 [8，12-14]。體外抗凝血實驗結(jié)果顯示，生赤芍和按最優(yōu)炮制工藝制備的酒赤芍均能顯著延長小鼠血漿的TT、PT、APTT，且酒赤芍的作用較生赤芍更優(yōu)。

綜上所述，本研究運用AHP-CRITIC混合加權(quán)法和Box-Behnken響應面法相結(jié)合的方式優(yōu)化了酒赤芍的炮制工藝，所制酒赤芍的體外抗凝血效果較生品更好。在以往的赤芍炮制工藝相關(guān)研究中，更多的是關(guān)注藥材指標性成分——芍藥苷的含量。而本研究以赤芍中氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酸等4種成分作為考察指標，并通過AHP-CRITIC混合加權(quán)法賦予各指標不同權(quán)重系數(shù)，是中藥現(xiàn)代化研究的一種探索。

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（收稿日期：2021-05-17 修回日期：2021-09-27）

（編輯：林 靜）