幼年牦牛不同部位皮膚毛囊的組織學(xué)結(jié)構(gòu)及TGF-β2與HIF-1α差異性表達(dá)分析

張 虔，崔 燕,2*，余四九,2，廖 博，鄒勝南，白雪峰，Seth Yaw Afedo，趙鵬飛，龍 敏

(1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州 730070；2.甘肅省牛羊胚胎工程技術(shù)研究中心，蘭州 730070)

牦牛(Bosgrunniens)是我國青藏高原的特有牛種，長期生活于海拔3 000 m以上高寒、低氧的極度惡劣環(huán)境，擁有“高原之舟”的美譽(yù)[1]。皮膚作為保護(hù)機(jī)體免受外界干擾的第一道防線，在應(yīng)對紫外線照射、物理或化學(xué)損傷及微生物感染等外界挑戰(zhàn)時(shí)發(fā)揮著重要作用[2]。皮膚由表皮、真皮及皮下組織構(gòu)成，在真皮層中含有大量的皮膚附屬物，如毛囊、皮脂腺、汗腺等。毛囊是皮膚中控制毛發(fā)生長的微型器官，毛囊由內(nèi)向外依次由內(nèi)根鞘、外根鞘及結(jié)締組織鞘三部分構(gòu)成。它擁有獨(dú)特的生長周期，在維持體溫等方面發(fā)揮重要的作用[3]。

Findlay和Yang[4]對艾爾郡奶牛頸側(cè)部和背部毛細(xì)血管的組織學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察和測量，發(fā)現(xiàn)毛細(xì)血管的周圍圍繞著兩個(gè)或多個(gè)毛囊群，測得背部毛囊直徑[(0.086±0.030)mm]顯著高于頸側(cè)部[(0.040±0.005)mm]。胡倩倩等[5]對皖東黃牛的毛囊組織學(xué)結(jié)構(gòu)觀察發(fā)現(xiàn)，毛球主要呈球形，構(gòu)成毛球的細(xì)胞深染，毛球末端為凹陷的毛乳頭。毛囊由表皮向真皮下陷而成，在真皮層內(nèi)傾斜排布。皖東黃牛毛囊與表皮的傾斜角度約70°，毛囊底部位于乳頭層深部和網(wǎng)狀層內(nèi)。王富金等[6]對延邊黃牛的毛囊結(jié)構(gòu)觀察并進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，延邊黃牛的毛干呈淺黃色，每根毛有一個(gè)毛囊，毛囊密度為1 614.630 2 根·cm-2，且公畜的毛囊密度大于母畜的毛囊密度。牦牛的皮膚結(jié)構(gòu)特性已有大量報(bào)道，岳靜[7]、于川等[8]通過對不同年齡牦牛皮膚23個(gè)部位測量發(fā)現(xiàn)，牦牛皮膚的厚度隨年齡的增加而逐漸增厚。楊雪等[9]對牦牛皮膚毛囊周期性結(jié)構(gòu)變化規(guī)律進(jìn)行研究，運(yùn)用Sacpic染色更加具體的展現(xiàn)了生長期、退行期及休止期毛囊的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。曹迷霞[10]對成年牦牛的皮脂腺和汗腺結(jié)構(gòu)特點(diǎn)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)成年牦牛的皮膚從背部到腹部存在漸變趨勢,與其他牛類相比，牦牛汗腺和皮脂腺的密度高，但前者的分泌功能不發(fā)達(dá)而后者發(fā)達(dá)，這可能與其為了適應(yīng)高原高寒環(huán)境有關(guān)。

TGF-β2是TGF-β(transforming growth factor-β)超家族中的一員，它存在于哺乳動(dòng)物體內(nèi)[11]。據(jù)報(bào)道，TGF-β家族在細(xì)胞增殖[12]、凋亡[13]、分化[14]等方面擁有著重要的作用，且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[15]和纖維化[16]密切相關(guān)。而在毛囊的相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，TGF-β家族成員能夠使毛囊退行期延遲，從而使毛囊周期發(fā)生改變[17]。然而在不同的物種中，TGF-β家族成員中行使動(dòng)能的成員卻不盡相同。在小鼠中TGF-β1發(fā)揮著主要作用[11]，TGF-β2則是影響人類毛囊發(fā)生上皮細(xì)胞凋亡[13]。宋亮麗等[18]對TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3在牦牛毛囊周期的調(diào)控研究發(fā)現(xiàn)，TGF-β2 mRNA在毛囊生長中期、生長晚期和退行期皮膚內(nèi)的轉(zhuǎn)錄水平，顯著高于同時(shí)期皮膚內(nèi)TGF-β1、TGF-β3 mRNA，說明TGF-β2在毛囊周期轉(zhuǎn)換中發(fā)揮重要的作用。

低氧誘導(dǎo)因子(hypoxia-inducible factors，HIFs)家族中的HIF-1α是機(jī)體適應(yīng)低氧環(huán)境的關(guān)鍵調(diào)控因子[19]。1992年，Semenza和Wang[20]在Hep3B細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)HIF-1α是專一調(diào)節(jié)氧氣的HIF-1亞單位，它能夠與靶基因結(jié)合，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄，使機(jī)體產(chǎn)生一系列缺氧適應(yīng)反應(yīng)。在低氧條件下，HIF-1α通過激活許多基因的轉(zhuǎn)錄，如參與能量代謝、血管生成、凋亡等，合成相應(yīng)的蛋白質(zhì)以增加氧的釋放，使機(jī)體適應(yīng)低氧環(huán)境[21]。李勇堅(jiān)等[22]對HIF-1α與 iNOS在銀屑病皮損中的表達(dá)及其與血管生成的關(guān)系研究中發(fā)現(xiàn)，銀屑病皮損組織存在HIF-1α和iNOS蛋白的過表達(dá), 可能通過促進(jìn)銀屑病新生血管的生成, 對銀屑病的發(fā)生發(fā)展起重要作用。另有戴葉芹等[23]研究發(fā)現(xiàn)，HIF-1α在體外具有促進(jìn)人毛囊生長和增加毛囊成纖維細(xì)胞及真皮鞘細(xì)胞活性。

牦牛作為季節(jié)性發(fā)情動(dòng)物，于7～8月為發(fā)情高峰，在4～5月為繁殖旺季[24]。半歲幼年牦牛多處于高原的冬季，此時(shí)牦牛皮膚的結(jié)構(gòu)完整性是冬季正常生存的重要保障，而關(guān)于幼年牦牛皮膚的組織結(jié)構(gòu)特性鮮見報(bào)道。為探尋幼年牦牛皮膚毛囊結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及毛囊生長的分子調(diào)控機(jī)制，本試驗(yàn)首先采用HE和Sacpic染色法對幼年牦牛皮膚毛囊結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察并對毛囊數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，篩選出多毛皮膚和少毛皮膚，其次采用免疫組化、Western blot及qRT-PCR法，對TGF-β2及HIF-1α在幼年牦牛皮膚多毛部位和少毛部位進(jìn)行定位和定量研究。以探究TGF-β2及HIF-1α對幼年牦牛毛囊生長發(fā)育的影響，并為后期探究牦牛皮膚高海拔適應(yīng)性分子調(diào)控機(jī)制提供資料。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

從青海西寧樂家灣選取10頭健康幼年牦牛(5～6月齡)。采用頸部放血的方法處死試驗(yàn)動(dòng)物后，采集牦牛頸部、背部、胸部、腹部、小腿部、腋下和陰囊皮膚，一部分組織樣放置于4%的多聚甲醛溶液中固定2周，用于毛囊計(jì)數(shù)和免疫組化；另一部分分子樣迅速放置于液氮中，運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室放置于-80 ℃ 冰箱中，用于后期qRT-PCR和Western blot試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)方法

從4%的多聚甲醛固定液中取出皮膚組織，切成0.4 cm×0.4 cm×0.5 cm大小的組織塊，采用常規(guī)石蠟切片包埋，制作4～5 μm厚的連續(xù)切片，采用HE和Sacpic染色法進(jìn)行染色，利用Olympus DP71顯微照相系統(tǒng)進(jìn)行觀察并攝片。

1.2.1 Sacpic染色法 切片脫蠟至水，自來水潤洗后天青石藍(lán)B染液染色5 min，經(jīng)自來水潤洗后，Weigert’s 蘇木精染液染色5 min，自來水潤洗后返藍(lán)水(0.5 g碳酸氫鈉、5 g硫酸鎂和500 mL蒸餾水充分混勻)返藍(lán)3 min，自來水潤洗后置于沙黃染液中5 min，分別用70%酒精和95%酒精分化，苦味酸乙醇飽和溶液3 min，再用95%酒精和70%酒精分化，自來水潤洗后靛藍(lán)胭脂紅染色1 min，自來水潤洗，最后梯度酒精脫水，二甲苯透明及中性樹膠封片。

1.2.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 取不同部位皮膚，研磨后置于冰盒上，用TriQuick Reagent法提取總RNA，按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書步驟將其反轉(zhuǎn)為cDNA后，進(jìn)行PCR及實(shí)時(shí)熒光定量PCR試驗(yàn)。反應(yīng)體系20 μL。根據(jù)GenBank中黃牛(Bostaurus)TGF-β2、HIF-1α、β-actin基因序列，采用 Primer Premier6.0軟件設(shè)計(jì)，并由華大基因合成，qRT-PCR 引物序列和基因序列號如表1所示。

表1 目的基因和內(nèi)參基因引物序列

1.2.3 Western blot 將采取的幼年牦牛背部、腋下、腹部及陰囊皮膚分別研磨后，各稱取0.1 g于離心管中，每管加入1 mL的RIPA和10 μL PMSF，勻漿1.5 h，4 ℃，12 000×g離心5 min，吸取上清液至新的離心管，用ND-1000(Nano Drop Technologies)測定蛋白濃度后并進(jìn)行調(diào)整。將蛋白與4×SDS-PAGE loading buffer 3∶1的比例混合，沸水浴10 min，將蛋白變性。用等量變性的蛋白上樣并進(jìn)行10%SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，一抗孵育(Mouse Anti-TGF-β2，ab-36495，1∶1 000稀釋；Mouse Anti-HIF-1α，ab-16066，1∶1 000稀釋；β-actin，1∶1 000稀釋)，4 ℃過夜。用PBST清洗PVDF膜后，二抗孵育(HRP標(biāo)記的鼠二抗，1∶2 500)，室溫1 h，用PBST清洗PVDF膜后，ECL化學(xué)發(fā)光液顯色并觀察結(jié)果。條帶結(jié)果用Image J軟件測定各條帶灰度值，從而得出TGF-β2及HIF-1α在幼年牦牛不同皮膚中的相對表達(dá)量。

1.2.4 免疫組織化學(xué)染色 切片脫蠟至水后，放入pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液進(jìn)行微波加熱修復(fù)，待溶液冷卻至室溫后，用PBS洗3 min×3，3%過氧化氫溶液(來自SP試劑盒)37 ℃ 15 min, 用PBS洗3 min×3，正常山羊血清(來自SP試劑盒)，室溫封閉10 min，傾去勿洗，一抗孵育(TGF-β2，ab-36495，1∶1 000稀釋；HIF-1α，ab-16066，1∶1 000稀釋)，4 ℃，過夜。復(fù)溫20 min，用PBS洗3 min×3，二抗孵育(SP試劑盒B液)，37 ℃ 15 min，用PBS洗3 min×3，三抗孵育(SP試劑盒C液)，37 ℃ 15 min，用PBS洗3 min×3，DAB顯色，在顯微鏡下觀察并控制顯色，自來水終止反應(yīng)。蘇木精復(fù)染2 min，鹽酸酒精分化，自來水返藍(lán)，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.3 數(shù)據(jù)測量及統(tǒng)計(jì)分析

毛囊計(jì)數(shù)：組織蠟塊橫切，連續(xù)切片隔3取1，各部位各取40張切片，對毛囊進(jìn)行計(jì)數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1 不同部位皮膚毛囊的組織結(jié)構(gòu)及數(shù)量

2.1.1 不同部位皮膚毛囊的結(jié)構(gòu) 幼年牦牛的毛囊主要分布在真皮層，由內(nèi)向外依次由內(nèi)根鞘、外根鞘和結(jié)締組織鞘組成，不同部位的毛囊組織學(xué)結(jié)構(gòu)基本相似，毛囊底部膨大形成毛球(圖1B)，頸部(圖1D)、背部(圖1G)、小腿部(圖1H)、腋下(圖1I)和陰囊(圖1 J)皮膚中，大多數(shù)毛干的毛髓質(zhì)及毛囊內(nèi)根鞘結(jié)構(gòu)不完整；腹部(圖1E)和胸部(圖1F)皮膚依然清晰可見毛囊三層結(jié)構(gòu)，毛囊處于退行期。Sacpic染色可見毛囊內(nèi)根鞘為紅色，外根鞘為蒼綠色，結(jié)締組織鞘為藍(lán)綠色(圖1C)。

A.腹部皮膚縱切，Sacpic染色，100×；B.背部皮膚縱切，Sacpic染色，100×；C.胸部皮膚縱切，Sacpic染色，100×；D.頸部皮膚縱切，HE染色，100×；E.腹部皮膚橫切，HE染色，100×；F.胸部皮膚縱切，HE染色，100×；G.背部皮膚縱切，HE染色，200×；H.小腿部皮膚橫切，HE染色，200×；I.腋下皮膚縱切，HE染色，100×；J.陰囊皮膚縱切，HE染色，100×；K.陰囊皮膚縱切，HE染色，200×；L.腋下皮膚縱切，HE染色，100×。EP.表皮；DE.真皮；HF.毛囊；IRS.內(nèi)根鞘；ORS.外根鞘；CTS.結(jié)締組織鞘；SWS.汗腺的分泌部；SWD.汗腺的導(dǎo)管部；SEG.皮脂腺

2.1.2 不同部位皮膚毛囊的數(shù)量 幼年牦牛毛囊的數(shù)量從腹部、背部、胸部、小腿部、頸部、腋下及陰囊依次遞減，且部位間差異顯著(P<0.05)(表2)。

表2 幼年牦牛不同部位皮膚毛囊的數(shù)量

2.2 qRT-PCR檢測TGF-β2及HIF-1α基因的表達(dá)

采用qRT-PCR對TGF-β2及HIF-1α基因的表達(dá)進(jìn)行定量研究，β-actin(圖2A)、TGF-β2(圖2B)及HIF-1α(圖2C)基因擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為174、98和82 bp，各個(gè)基因的擴(kuò)增產(chǎn)物大小與預(yù)期片段大小相符，引物特異性強(qiáng)，可用于后續(xù)qRT-PCR試驗(yàn)。實(shí)時(shí)熒光定量結(jié)果顯示，TGF-β2在陰囊皮膚和腋下皮膚的基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于背部皮膚和腹部皮膚(P<0.05)(圖2D)。HIF-1α在腹部皮膚的基因轉(zhuǎn)錄水平顯著高于其他三個(gè)部位(P<0.05)(圖2E)。

A～C.β-actin、TGF-β2及HIF-1α基因擴(kuò)增產(chǎn)物；D～E：TGF-β2及HIF-1α基因在幼年牦牛不同部位中的表達(dá)；M.DNA 相對分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；1.背部；2.腋下；3.腹部；4.陰囊；不同字母表示差異顯著(P<0.05)

2.3 Western blot檢測TGF-β2及HIF-1α蛋白的表達(dá)

2.3.1 TGF-β2在幼年牦牛多毛皮膚和少毛皮膚內(nèi)的蛋白表達(dá)檢測 Western blot結(jié)果顯示，TGF-β2在幼年牦牛多毛皮膚(背部和腹部)及少毛皮膚(腋下和陰囊)中均有表達(dá)，在陰囊、腋下、腹部及背部中的表達(dá)依次呈遞減趨勢，且各部位之間差異顯著(P<0.05)(圖3B)。

A.Western blot結(jié)果；B.TGF-β2蛋白的相對表達(dá)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

2.3.2 HIF-1α在幼年牦牛多毛皮膚和少毛皮膚內(nèi)的蛋白表達(dá)檢測 Western blot結(jié)果顯示，TGF-β2在幼年牦牛多毛皮膚(背部和腹部)及少毛皮膚(腋下和陰囊)中均有表達(dá)，腹部表達(dá)量顯著高于其他三個(gè)部位(P<0.05)(圖4B)。

A.Western blot結(jié)果；B.HIF-1α蛋白的相對表達(dá)；不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母表示差異不顯著(P>0.05)

2.4 免疫組織化學(xué)法對TGF-β2及HIF-1α表達(dá)部位進(jìn)行定位

免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，TGF-β2在背部皮膚和腋下皮膚呈強(qiáng)陽性表達(dá)，而在腹部皮膚和陰囊皮膚呈弱陽性表達(dá)。TGF-β2在皮膚的不同部位表達(dá)相似，主要表達(dá)在表皮層、毛囊外根鞘、皮脂腺及汗腺(圖5A1～D2)。HIF-1α表達(dá)部位基本相似，主要表達(dá)在表皮層、毛囊內(nèi)根鞘、毛囊外根鞘、皮脂腺及汗腺(圖5A3～D4)。

A1.背部皮膚縱切，100×；A2.背部皮膚縱切，400×；A3.背部皮膚縱切，100×；A4.背部皮膚縱切，200×；A5.背部皮膚縱切，陰性對照，400×；B1.腋下皮膚縱切，100×；B2.腋下皮膚縱切，400×；B3.腋下皮膚縱切，100×；B4.腋下皮膚縱切，200×；B5.腋下皮膚縱切，陰性對照，100×；C1.腹部皮膚縱切，200×；C2.腹部皮膚縱切，400×；C3.腹部皮膚縱切，200×；C4.腹部皮膚縱切，400×；C5.腹部皮膚縱切，陰性對照，400×；D1.陰囊皮膚縱切，100×；D2.陰囊皮膚縱切，200×；D3.陰囊皮膚縱切，100×；D4.陰囊皮膚縱切，200×；D5.陰囊皮膚縱切，陰性對照，200×。EP.表皮；HF.毛囊；SW.汗腺；SEG.皮脂腺

3 討 論

3.1 不同部位皮膚毛囊的組織結(jié)構(gòu)及數(shù)量

本研究發(fā)現(xiàn)，幼年牦牛的皮膚毛囊結(jié)構(gòu)松散，毛髓質(zhì)及內(nèi)根鞘結(jié)構(gòu)不完整，毛囊處于退行期，成年牦牛毛囊結(jié)構(gòu)完整，結(jié)締組織鞘和外根鞘較厚[10]。HE染色可以分析皮膚整體組織學(xué)結(jié)構(gòu)，但毛囊細(xì)微結(jié)構(gòu)的內(nèi)根鞘、外根鞘和結(jié)締組織鞘難以辨析，而Sacpic染色可以清晰地將牦牛毛囊組織學(xué)結(jié)構(gòu)展現(xiàn)出來。通過對半歲牦牛的各部位皮膚毛囊計(jì)數(shù)，幼年牦牛腹部的毛囊數(shù)量最多，這與成年牦牛頸部毛囊數(shù)量較多的結(jié)果不一致，這可能是由于兩個(gè)部位間皮膚厚度而引起的環(huán)境適應(yīng)性規(guī)律變化。研究發(fā)現(xiàn)幼年時(shí)牦牛的腹部皮膚比頸部皮膚薄，為了抵御嚴(yán)寒的高原環(huán)境，腹部需要有更多的毛發(fā)來減少熱量的散失,當(dāng)發(fā)育為成年牦牛時(shí)，牦牛腹部皮膚比頸部皮膚厚，隨著對環(huán)境的適應(yīng)，動(dòng)物機(jī)體對自身作出調(diào)整，毛囊數(shù)目減少[8]。本研究也發(fā)現(xiàn)了幼年牦牛的腋下及陰囊部位皮膚中毛囊較為稀疏，導(dǎo)致的原因可能有兩種，一是由于腋下部位深，向內(nèi)凹陷，相對其他部位封閉，容易積聚熱量。二是由于腋下部位是大血管和淋巴管流經(jīng)地，離皮膚近，其內(nèi)熱量易散于此處。陰囊部位毛囊稀疏可能由于體內(nèi)溫度過高，不利于精子發(fā)育，睪丸需脫出體外，導(dǎo)致陰囊部位皮薄毛少[25]。

3.2 TGF-β2及HIF-1α在幼年牦牛多毛皮膚和少毛皮膚定位和定量研究

哺乳動(dòng)物的毛發(fā)周期包括3個(gè)時(shí)期，即生長期、退行期和休止期。脫發(fā)是由于多種原因?qū)е旅疫^早進(jìn)入退行期的結(jié)果，比如雄激素[26]、抗癌藥物[27]和炎癥反應(yīng)[28]等。退行期細(xì)胞凋亡主要發(fā)生在毛乳頭周圍的毛基質(zhì)細(xì)胞和外根鞘的外層細(xì)胞[29]。TGF-β超家族能夠促進(jìn)這些細(xì)胞的凋亡，從而使得毛囊的退行期提前發(fā)生。而TGF-β2可能是TGF-β超家族成員中在牦牛的體內(nèi)主要發(fā)揮作用的因子，且該過程可能通過 TGF-βRⅡ介導(dǎo)途徑誘導(dǎo)牦牛毛囊上皮細(xì)胞發(fā)生凋亡來實(shí)現(xiàn)[17]。半歲的幼年牦牛腋下皮膚和陰囊皮膚毛囊數(shù)量少，腹部皮膚和背部皮膚毛囊數(shù)量多。通過對這4個(gè)部位的TGF-β2蛋白和基因檢測，作者發(fā)現(xiàn)TGF-β2在腋下皮膚和陰囊皮膚的表達(dá)量高，在背部和腹部的表達(dá)量低。在毛囊較少的部位表達(dá)量高，這可能表示，TGF-β2亦可以抑制毛囊生長。

牦牛長期生活在高寒低氧的環(huán)境中，低氧誘導(dǎo)因子是牦牛適應(yīng)低氧環(huán)境的重要轉(zhuǎn)錄因子。低氧誘導(dǎo)因子作為一種轉(zhuǎn)錄因子, 低氧時(shí)廣泛表達(dá)在各組織細(xì)胞中, 如腎、肝、肺、腦、心等和許多細(xì)胞系, 它和低氧反應(yīng)有關(guān)的基因中的低氧反應(yīng)元件(HRE)上的HIF-1結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合, 介導(dǎo)低氧反應(yīng)[30]。在惡性腫瘤增長的過程中，其內(nèi)部容易形成缺氧的狀態(tài)，腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境的策略有兩種，一種是提高糖酵解速率;另一種是血管的再生，增加輸氧能力。HIF-lα可以通過增強(qiáng)靶基因如促紅細(xì)胞生成素(EPO)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)及糖酵解酶等基因轉(zhuǎn)錄來刺激血管新生[31]。在用去鐵草酰胺(DFO)處理的真皮乳頭細(xì)胞中，HIF-1α的穩(wěn)定性增加，去鐵氧胺是一種促進(jìn)HIF-1α穩(wěn)定的化學(xué)羥化酶抑制劑[32]。通過促進(jìn)糖酵解來穩(wěn)定HIF-1α可以減少氧化應(yīng)激并促進(jìn)毛發(fā)生長。在對成年牦牛皮膚中HIF-lα進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上[33]，本試驗(yàn)對背部、腋下、腹部及陰囊皮膚的HIF-1α蛋白和基因的表達(dá)量檢測發(fā)現(xiàn)，HIF-1α在腹部表達(dá)量比其他三個(gè)部位高，而腹部屬于多毛皮膚，這和預(yù)期試驗(yàn)結(jié)果相一致。說明HIF-1α可能具有促進(jìn)毛囊生長的作用。

4 結(jié) 論

幼年牦牛各部位皮膚組織學(xué)結(jié)構(gòu)基本相似，毛囊處于退行期。腹部毛囊數(shù)量最多，背部次之，陰囊最少。TGF-β2和HIF-1α在不同部位皮膚中的表達(dá)水平存在顯著差異，TGF-β2在少毛皮膚中相對表達(dá)量較高，而HIF-1α在多毛皮膚中相對表達(dá)量較高，推測TGF-β2和HIF-1α在毛囊生長中發(fā)揮重要作用。