不同提取方式對毛發(fā)中甲基苯丙胺檢測影響的研究

張澤鵬

（重慶市法醫(yī)學(xué)會司法鑒定所，重慶 400010）

甲基苯丙胺是新型毒品的一種，是我國濫用最廣泛的毒品之一。由于先進(jìn)的檢測技術(shù)在我國的應(yīng)用沒有得到普及，我國公安機(jī)關(guān)對吸食甲基苯丙胺人員的生物樣品檢測方法主要采用免疫層析膠體金標(biāo)技術(shù)，此技術(shù)的最低檢出濃度為1000ng/mL，而且由于此技術(shù)的原理，很容易受到藥物干擾而造成假陽性或假陰性，不能滿足禁毒工作對靈敏度和準(zhǔn)確度的要求。

一般公安機(jī)關(guān)在處理吸毒案件中，血液和尿液是最為常見的兩種生物檢材，血液和尿液的檢測結(jié)果也可以作為判斷是否吸食毒品的直接證據(jù)，但是影響毒品在人體內(nèi)含量的因素有很多，例如毒品的攝入劑量、毒品的入體途徑和代謝過程中的個體差異等等。而且毒品在人體內(nèi)經(jīng)過代謝，含量會逐漸降低直至完全消失，這對公安機(jī)關(guān)打擊吸毒人員、收集吸毒證據(jù)十分不利。而毛發(fā)作為近期才被廣泛使用的生物檢材，可以反映吸毒人員某段較長時間攝入毒品的情況，這點(diǎn)是血液和尿液不具備的。

2018年10月31日中華人民共和國公安部發(fā)布了公禁毒〔2018〕938號《關(guān)于印發(fā)〈涉毒人員毛發(fā)樣本檢測規(guī)范〉的通知》[1]，規(guī)定了毛發(fā)中甲基苯丙胺的檢測閾值為0．2ng/mg，當(dāng)涉毒人員發(fā)根端3厘米以內(nèi)的頭發(fā)中毒品檢出含量高于閾值時認(rèn)定為陽性，且可以認(rèn)定被檢人在提取頭發(fā)之日前6個月內(nèi)攝入過毒品。頭發(fā)中的毒品檢驗(yàn)可以反映較長時間濫用情況是因?yàn)槎酒吩隗w內(nèi)會進(jìn)行代謝，當(dāng)吸毒人員吸食了毒品以后，毒品成分會在體內(nèi)留存一段時間，這段時間生長出來的頭發(fā)中就會含有毒品成分，在頭發(fā)生長過程中毛干形成時，這些毒品就會固定在毛干中隨之生長，固定在毛干中之后毒品就僅有微弱的擴(kuò)散作用，毒品成分會十分緩慢地向上下兩端的毛發(fā)擴(kuò)散。人的頭發(fā)一個月生長0．8-1．2厘米，分段檢驗(yàn)毛發(fā)可以大致判斷出被檢人在什么時間攝入過毒品，這也是毛發(fā)中毒品檢驗(yàn)最大的優(yōu)勢所在。

目前行業(yè)內(nèi)毛發(fā)中甲基苯丙胺提取常用酸水解、堿水解、甲醇超聲提取三種方法[2]，本文主要分析此三種方法對毛發(fā)中甲基苯丙胺的檢測結(jié)果的影響，從而為今后的工作提供參考。

一、前處理方法

（一）酸水解

SF/Z JD0107004-2016《生物檢材中苯丙胺類興奮劑、哌替啶和氯胺酮的測定》中 10．1．3．3．11項(xiàng)中的“毛發(fā)的酸水解”方法。

（二）堿水解

F/Z JD0107004-2016《生物檢材中苯丙胺類興奮劑、哌替啶和氯胺酮的測定》中 10．1．3．3．11項(xiàng)中的“毛發(fā)的堿水解”方法。[3]

（三）甲醇超聲提取

SF/Z JD0107025——2018《毛發(fā)中15種毒品及其代謝物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢驗(yàn)方法》中6．1 項(xiàng)樣品前處理方法。[4]

二、原理

化學(xué)物質(zhì)有“相似相溶原理”，即結(jié)構(gòu)或者極性相似的兩種化學(xué)物質(zhì)可以互溶，甲基苯丙胺易溶于有機(jī)溶劑、難溶于水的特點(diǎn)，分別使用酸消化、堿消化和物理研磨三種方法將目標(biāo)物甲基苯丙胺從毛發(fā)內(nèi)部釋放出來，并在堿性條件下用有機(jī)溶劑乙醚或甲醇將甲基苯丙胺從毛發(fā)中提取出來，并將提取液濃縮后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀的多反映檢測（MRM）模式檢測。通過對留樣的甲基苯丙胺呈陽性的毛發(fā)進(jìn)行酸水解、堿水解和甲醇超聲三種不同提取方式的對照分析，綜合研究不同提取方式對毛發(fā)中甲基苯丙胺檢測的影響。

三、主要儀器

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（SHIMADZU LCMS-8050）；色譜柱（Waters C18柱，100mm×2．1mm，1．8μm）；組織研磨儀（力辰LC-TG-24）；超聲波清洗機(jī)（SYU-7-200T）。

（一）樣品前處理

取甲基苯丙胺為陽性的留樣毛發(fā)適量，裝在15mL的離心管中，依次用水和丙酮震蕩清洗兩次，晾干后剪成1mm段，供檢。

1．酸水解：各稱取20mg的留樣毛發(fā)，分為三組，分別加入1mL0．1mol/L鹽酸溶液浸潤，45℃水浴溶解12-15小時，取出后加入10%的氫氧化鈉溶液調(diào)至PH＞11。毛發(fā)水解液用3mL乙醚提取，渦旋混合、離心分層，轉(zhuǎn)移乙醚層至另一離心管中，約60℃水浴中揮干。殘留物用100μL的甲醇溶解，上機(jī)分析。

2．堿水解：各稱取20mg的留樣毛發(fā)，分為三組，分別加入1mL10%的氫氧化鈉溶液80℃水浴水解5-10min，取出。毛發(fā)水解液用3mL乙醚提取，渦旋混合、離心分層，轉(zhuǎn)移乙醚層至另一離心管中，約60℃水浴中揮干。殘留物用100μL的甲醇溶解，上機(jī)分析。

3．甲醇超聲提?。喝∵m量的留樣毛發(fā)，置冷凍研磨儀中粉碎，呈粉末狀。各稱取20mg留樣毛發(fā)粉末，分為三組，各加入1mL甲醇，冰浴超聲30min，離心取上清液于60℃水浴空氣流下吹干。殘留物用100μL甲醇復(fù)溶，上機(jī)分析。

（二）檢測方法

使用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀（SHIMADZU LCMS-8050），采用多反監(jiān)測模式（MRM）對毛發(fā)提取液進(jìn)行檢驗(yàn)；色譜柱使用Waters C18柱（100mm×2．1mm，1．8μm）；柱溫：室溫；碰撞氣：氬氣（Ar），純度＞99．999%，流動相A：乙腈，流動相B：20mmol/mL乙酸銨和0．1%甲酸緩沖液；流速：400μL/min，進(jìn)樣量2μL；離子源：電噴霧電離-正電子模式（ESI+）；碰撞氣、氣簾氣、霧化氣、輔助加熱氣均為高純氮?dú)猓蝗ゴ仉妷?、碰撞能量等電壓值均?yōu)化到最優(yōu)靈敏度。

甲基苯丙胺的母離子/子離子對為150．1和119．1、150．1和91．1，通過多反監(jiān)測模式（MRM）檢驗(yàn)甲基苯丙胺的這兩個母離子/子離子對，來獲取檢驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果。

（三）提取效率的比較

本文提取效率比較的基本原理采用外標(biāo)法的原理進(jìn)行比較，使用三個檢測數(shù)據(jù)中150．1/91．1母離子/子離子峰面積的平均值作為對比參數(shù)，來比較三種提取方式對毛發(fā)中甲基苯丙胺檢測的提取效率，其中甲醇超聲提取法150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：97642557；堿水解的150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：43075336；酸水解的150．1/91．1母離子/子離子平均峰面積為：10283065。從以上數(shù)據(jù)中可以看出，甲醇超聲提取法檢測的甲基苯丙胺的特征離子對色譜峰的峰面積大約是堿水解提取法的2．3倍、大約是酸水解提取法的9．5倍。

四、結(jié)論

甲基苯丙胺是堿性化合物，在堿性條件下可以溶于有機(jī)溶劑，而在酸性條件下，甲基苯丙胺會形成鹽，而溶于水中，毛發(fā)酸水解后將水解液再調(diào)堿性用乙醚提取，多了一個提取環(huán)節(jié)，降低了甲基苯丙胺的回收率，所以使用堿水解的方式用乙醚提取效率要高于酸水解。而甲醇超聲提取方法是最直接的提取法，將毛發(fā)研磨成粉末后將毛干中的甲基苯丙胺釋放出來直接使用甲醇超聲提取，所以提取效率最高。由以上可以得出結(jié)論，甲醇超聲提取在這三種提取方式中提取效率最高，堿水解提取法效率僅次于甲醇超聲提取法，而酸水解的提取效率最低。