基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的腎炎康復(fù)片治療糖尿病腎病的潛在作用機(jī)制研究*

李寶華，陳剛毅

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣東 廣州 510405；2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣東 廣州 510405）

糖尿病腎?。╠iabetic nephropahty，DN）是導(dǎo)致慢性腎臟病（chronic kidney disease，CKD）的主要病因之一[1]。目前西醫(yī)對(duì)DN仍缺乏特異性治療，治療手段主要包括一般治療及控制血糖、血壓、血脂等[2]，但具有一定的局限性。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為DN屬于“消渴”“虛勞”等范疇。一般認(rèn)為，本病屬本虛標(biāo)實(shí)，治法需兼顧標(biāo)本[3]。腎炎康復(fù)片是名老中醫(yī)趙恩儉教授的經(jīng)驗(yàn)方，由西洋參、人參、熟地黃、鹽杜仲、山藥、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹參、澤瀉、白茅根、桔梗等13味中藥組成，具有益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)腎健脾、清解余毒之效。研究表明，腎炎康復(fù)片在治療DN中可有效降低尿蛋白、改善腎功能[4]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究證實(shí)，腎炎康復(fù)片可改變血液流變學(xué)、抑制炎癥反應(yīng)[5]、減少細(xì)胞外基質(zhì)積聚、修復(fù)受損足細(xì)胞、抑制腎小球系膜細(xì)胞增殖[6]等作用。

但目前腎炎康復(fù)片對(duì)DN的作用機(jī)制尚未完全明確。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)是基于系統(tǒng)生物學(xué)的理論，通過對(duì)生物系統(tǒng)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)分析，選取特定信號(hào)節(jié)點(diǎn)進(jìn)行多靶點(diǎn)藥物分子設(shè)計(jì)的學(xué)科[7]。借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的方法分析中成藥對(duì)疾病的干預(yù)和影響，可用于初步篩選中藥有效成分、作用靶點(diǎn)及作用機(jī)制，減輕后續(xù)實(shí)驗(yàn)的工作量及風(fēng)險(xiǎn)。本研究擬基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，通過數(shù)據(jù)檢索、挖掘和篩選，構(gòu)建“中藥復(fù)方-化學(xué)成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，以闡釋腎炎康復(fù)片治療DN的主要化學(xué)成分及可能的分子機(jī)制，為后續(xù)的實(shí)驗(yàn)和臨床研究提供新思路。

1 材料與方法

1.1 腎炎康復(fù)片所含主要化學(xué)成分的查詢和篩選 通過中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP，Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform，http://tcmspw.com/tcmsp.php），輸入腎炎康復(fù)片所含的中藥名稱，即西洋參、人參、熟地黃、杜仲、山藥、白花蛇舌草、黑豆、土茯苓、益母草、丹參、澤瀉、白茅根、桔梗，檢索得到各味中藥所含的化學(xué)成分。主要化學(xué)成分的篩選主要根據(jù)機(jī)體對(duì)藥物的吸收、分布、代謝及排泄過程進(jìn)行評(píng)價(jià)，以口服生物利用度（oral bioavailability，OB）≥30%和類藥性（drug likeness，DL）≥0.18作為主要化學(xué)成分的篩選標(biāo)準(zhǔn)，以判斷其對(duì)人體的影響和風(fēng)險(xiǎn)[8-9]。另結(jié)合中國(guó)知網(wǎng)、萬方、PubMed等文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)于未從平臺(tái)中檢索出，但具有明確藥理作用的活性化學(xué)成分也納入候選主要化學(xué)成分，并進(jìn)行后續(xù)研究。

1.2 腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分潛在作用靶點(diǎn)收集 通過TCMSP平臺(tái)檢索腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分的潛在靶點(diǎn)，并使用Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.uniprot.org/，更新于2018年5月25日）對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行注釋，限定物種為“Homo sapiens(Human)”，剔除非人源靶點(diǎn)，獲得靶點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)基因名。使用Cytoscape 3.7.2構(gòu)建“主要化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)圖。

1.3 DN疾病靶點(diǎn)的獲取 通過GeneCards（https://www.genecards.org/）、在線人類孟德爾遺傳數(shù)據(jù)庫(kù)（online mendelian inheritance in man，OMIM，https://omim.org/）、疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫(kù)（therapeutic target database，TTD，http://db.idrblab.net/ttd/）和Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)（https://www.drugbank.ca/），檢索關(guān)鍵詞“Diabete Kidney Disease”“Diabete Nephropathy”“nephropathy，diabetic”以獲取與DN相關(guān)的靶點(diǎn)，并整理建立DN相關(guān)的靶點(diǎn)數(shù)據(jù)集。

1.4 腎炎康復(fù)片作用靶點(diǎn)與DN靶點(diǎn)集的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分的潛在作用靶點(diǎn)與DN相關(guān)的靶點(diǎn)取交集，并使用R語言VennDiagram version 1.6.20軟件繪制韋恩圖。將交集的靶點(diǎn)導(dǎo)入注釋、可視化和集成發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)（the database for annotation,visualization and integrated discovery，DAVID，https://david.ncifcrf.gov/），限定物種為“Homo sapiens”，獲得靶基因名的官方名稱。使用Cytoscape 3.7.2構(gòu)建“中藥復(fù)方-主要化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)圖，顯示中藥復(fù)方主要化學(xué)成分與DN疾病靶點(diǎn)的關(guān)系。

1.5 蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選分析 將腎炎康復(fù)片與DN的共有靶點(diǎn)上傳至STRING平臺(tái)（https://string-db.org/），限定物種為“Homo sapiens”，初步建立藥物靶蛋白-疾病靶蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)。設(shè)定篩選條件為最低限度的互動(dòng)分?jǐn)?shù)≥0.900[10]，獲得藥物靶蛋白-疾病靶蛋白相互作用的信息及網(wǎng)絡(luò)圖。采用Cytoscape 3.7.2軟件插件cytoNCA對(duì)蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)浞治?，分析?nèi)容包括度中心性（degree centrality，DC）、中介中心性（betweenness centrality，BC）、緊密中心性（closeness centrality，CC）和特征向量中心性（eigenvector centrality，EC）等，以篩選出網(wǎng)絡(luò)中的關(guān)鍵靶點(diǎn)。這些靶點(diǎn)與其他更多靶點(diǎn)擁有相互作用關(guān)系，且作用效率更高。設(shè)定篩選標(biāo)準(zhǔn)為節(jié)點(diǎn)的DC值高于全部節(jié)點(diǎn)DC值中位數(shù)2倍，且BC、CC、EC值均大于所有節(jié)點(diǎn)的中位數(shù)，篩選出的節(jié)點(diǎn)即為關(guān)鍵靶點(diǎn)[11-12]。將獲得的靶點(diǎn)再次通過STRING平臺(tái)構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)圖，設(shè)定篩選條件為最低限度的互動(dòng)分?jǐn)?shù)≥0.400[13]。并通過Cytoscape 3.7.2軟件挖掘關(guān)鍵靶點(diǎn)與其對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分及中藥藥物的關(guān)系。

1.6 GO功能富集分析及KEGG通路富集分析 通過Cytoscape 3.7.2軟件插件GlueGO v2.5.5對(duì)腎炎康復(fù)片治療DN的潛在關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行基因功能富集分析和通路富集分析。功能富集分析通過基因本體論（gene ontology，GO）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行，分別從分子生物學(xué)功能（molecular function，MF）、生物學(xué)過程（biological process，BP）和細(xì)胞學(xué)組分（cellular components，CC）3個(gè)功能大類進(jìn)行富集分析，從而對(duì)一個(gè)基因的功能進(jìn)行多方面的描述和分析。通路富集分析通過京都基因與基因組百科全書（kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行，從而獲得基因作用通路的相關(guān)信息，研究腎炎康復(fù)片治療DN可能的作用機(jī)制。富集分析所獲得的P值均使用Bonferroni方法進(jìn)行校正，以P<0.05為篩選條件，并根據(jù)P值從小到大進(jìn)行排序，選取功能富集分析前20個(gè)生物過程及通路富集分析前20條通路，上傳至進(jìn)步源自共享云平臺(tái)（Omic－Share，https://www.omicshare.com/tools/）進(jìn)行數(shù)據(jù)可視化處理。

2 結(jié) 果

2.1 腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分及其潛在靶點(diǎn)的收集和篩選 從TCMSP平臺(tái)上檢索出腎炎康復(fù)片13味中藥的化學(xué)成分，其中西洋參11種、人參22種、熟地黃2種、杜仲28種、山藥16種、白花蛇舌草7種、黑豆13種、土茯苓15種、益母草8種、丹參65種、澤瀉10種、白茅根33種、桔梗7種，剔除重復(fù)成分，并補(bǔ)充文獻(xiàn)已報(bào)道具有明確藥理作用的活性成分后，統(tǒng)計(jì)得腎炎康復(fù)片化學(xué)成分共有211種。根據(jù)OB≥30%、DL≥0.18篩選后得出主要化學(xué)成分共183種（見表1，由于篩選結(jié)果過多，因此僅列出OB值前15項(xiàng)及各味中藥中OB值最大項(xiàng)，共20項(xiàng)）。研究較多的如丹參的主要活性成分丹酚酸、丹參酮，以及人參的主要活性成分人參皂苷等亦在此列。將183種主要化學(xué)成分輸入TCMSP平臺(tái)，檢索出潛在藥物潛在靶點(diǎn)共320個(gè)。通過Uniprot數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行篩選和注釋，剔除非人源靶點(diǎn)后共獲得267個(gè)藥物潛在靶點(diǎn)及其標(biāo)準(zhǔn)基因名。通過Cytoscape 3.7.2獲得“中藥-化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)”的網(wǎng)絡(luò)圖，共獲得430個(gè)節(jié)點(diǎn)、3 464條邊。從圖中可見，不同中藥之間可擁有共同的化學(xué)成分，而不同化學(xué)成分也可對(duì)應(yīng)同一作用靶點(diǎn)，說明腎炎康復(fù)片是通過不同中藥之間、多種成分及多種靶標(biāo)之間協(xié)同發(fā)揮作用。（見圖1）

圖1 腎炎康復(fù)片“中藥-化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)”相互作用網(wǎng)絡(luò)圖

表1 腎炎康復(fù)片部分主要化學(xué)成分的基本信息

2.2 DN疾病靶點(diǎn)的獲取和整理 通過GeneCards、OMIM、TTD和Drugbank數(shù)據(jù)庫(kù)獲得與DN相關(guān)的靶點(diǎn)基因，分別收集到10 661、1 257、20、44個(gè)疾病靶點(diǎn)。剔除重復(fù)后獲得DN相關(guān)的靶點(diǎn)基因共11 584個(gè)，包括血管緊張肽轉(zhuǎn)換酶（Angiotensinconverting enzyme，ACE）、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A9（UDP-glucuronosyltransferase 1-9，UGT1A9）、血管緊張素Ⅱ受體1（Type-1 angiotensinⅡreceptor，AGTR1）等。

2.3 腎炎康復(fù)片作用靶點(diǎn)與DN靶點(diǎn)集的網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建 將腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分的267個(gè)靶點(diǎn)與DN疾病相關(guān)的11 584個(gè)靶點(diǎn)取交集，得到腎炎康復(fù)片作用在DN的潛在靶點(diǎn)258個(gè)。通過VennDiagram v1.6.20軟件獲得韋恩圖。（見圖2）將258個(gè)潛在作用靶點(diǎn)基因?qū)隓AVID數(shù)據(jù)庫(kù)獲得其官方名稱后，通過Cytoscape 3.7.2獲得腎炎康復(fù)片與DN的“中藥復(fù)方-主要化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)-疾病”的網(wǎng)絡(luò)圖，共獲得407個(gè)節(jié)點(diǎn)，1 893條邊。（見圖3）

圖2 腎炎康復(fù)片與DN靶點(diǎn)韋恩圖

圖3 腎炎康復(fù)片與DN的“中藥復(fù)方-化學(xué)成分-作用靶點(diǎn)-疾病”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建與關(guān)鍵靶點(diǎn)篩選分析 將腎炎康復(fù)片作用在DN的潛在258個(gè)靶點(diǎn)上傳至STRING平臺(tái)后得出腎炎康復(fù)片靶蛋白-DN疾病靶蛋白相互作用信息及PPI網(wǎng)絡(luò)圖。（見圖4A）通過cytoNCA計(jì)算網(wǎng)絡(luò)各節(jié)點(diǎn)的DC、BC、CC和EC值，得出網(wǎng)絡(luò)所有節(jié)點(diǎn)的DC值中位數(shù)為7，BC值中位數(shù)為94.242 287，CC值中位數(shù)為0.072 18，EC值中位數(shù)為0.025 797 702 5。根據(jù)“1.6”的篩選方法，得出43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，包括信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3（Signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）、絲裂原活化蛋白激酶3（Mitogen-activated proteinkinase 3，MAPK3）、轉(zhuǎn)錄因子AP-1（Transcription factor AP-1，JUN）等。（見表2）通過STRING平臺(tái)獲得43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)圖。（見圖4B）通過Cytoscape 3.7.2繪制此43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)與腎炎康復(fù)片的化學(xué)成分和中藥之間的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖，共獲得172個(gè)節(jié)點(diǎn)，466條邊。（見圖5）其中可見細(xì)胞核受體共激活劑2（Nuclear receptor coactivator 2，NCOA2）、維甲酸X受體α（Retinoic acid receptor RXR-alpha，RXRA）、細(xì)胞核受體共激活劑1（Nuclear receptor coactivator 1，NCOA1）等對(duì)應(yīng)的化學(xué)成分較多；而丹參、杜仲、人參、山藥、黑豆等與這43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)擁有較多聯(lián)系。

圖4 腎炎康復(fù)片-DN潛在靶點(diǎn)（A）和關(guān)鍵靶點(diǎn)（B）PPI網(wǎng)絡(luò)圖

圖5 腎炎康復(fù)片與DN的“中藥-相關(guān)化學(xué)成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”關(guān)系網(wǎng)絡(luò)圖

表2 腎炎康復(fù)片治療DN的關(guān)鍵靶點(diǎn)及其基本信息

2.5 GO生物功能富集分析和KEGG通路富集分析 通過GlueGO v2.5.5對(duì)腎炎康復(fù)片治療DN的43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO生物功能富集分析和KEGG通路富集分析。通過GO富集分析共獲得332個(gè)生物過程，其中涉及BP有306個(gè)、涉及MF有58個(gè)、涉及CC有3個(gè)，包括對(duì)脂多糖的應(yīng)答（response to lipopolysaccharide）、RNA聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合（RNA polymeraseⅡ-specific DNA-binding transcription factor binding）、對(duì)機(jī)械刺激的應(yīng)答（response to mechanical stimulus）等生物過程。（見圖6）通過KEGG富集分析共獲得122個(gè)通路，主要涉及AGE-RAGE信號(hào)通路（AGE-RAGE signaling pathway in di－abetic complications）、IL-17信號(hào)通路（IL-17 signaling pathway）、Toll樣受體信號(hào)通路（Toll-like receptor signaling pathway）等，表明腎炎康復(fù)片可通過多個(gè)生物過程和多個(gè)通路的協(xié)調(diào)和相互作用以治療DN。同時(shí)從富集分析中可看出這些靶點(diǎn)基因與卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒感染、人巨細(xì)胞病毒感染、乙型病毒性肝炎等疾病相關(guān)。（見圖7）

圖6 腎炎康復(fù)片治療DN的43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)GO生物功能富集分析（前20位）

圖7 腎炎康復(fù)片治療DN的43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)KEGG通路富集分析（前20位）

3 討 論

DN是糖尿病常見的微血管并發(fā)癥之一，已成為全球主要的健康問題。目前DN的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，西醫(yī)對(duì)DN仍缺乏特異性治療。有研究表明，DN的發(fā)病與糖尿病環(huán)境導(dǎo)致晚期糖基化終產(chǎn)物的產(chǎn)生并參與循環(huán)、生長(zhǎng)因子的產(chǎn)生、血流動(dòng)力學(xué)和激素水平的變化有關(guān)，進(jìn)而引起活性氧物質(zhì)和炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和釋放，造成腎臟發(fā)生病理變化。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、自噬、外泌體的活動(dòng)[14-17]等與DN發(fā)病也有關(guān)。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，隨著DN病情發(fā)展，其病機(jī)及證型有所變化，其中以氣陰兩虛最為常見，同時(shí)兼雜血瘀、濕熱、水濕、痰濁等，病位主要在腎、脾[18]，因此治法多以益氣養(yǎng)陰、補(bǔ)益脾腎為主，同時(shí)注重祛瘀化痰、利水泄?jié)?。腎炎康復(fù)片的組方正好體現(xiàn)出這一治則。方中熟地黃益腎補(bǔ)精，養(yǎng)血滋陰，為君藥；杜仲補(bǔ)益肝腎，黑豆補(bǔ)腎益陰利濕，人參、西洋參、山藥健脾益氣養(yǎng)陰，白花蛇舌草、土茯苓清熱解毒，共為臣藥；丹參、益母草活血化瘀，白茅根清熱利水，澤瀉利水滲濕，為佐藥；桔梗宣肺利氣，為使藥。諸藥合用，補(bǔ)益而不燥膩，清利而不傷損，扶正兼顧袪邪，攻補(bǔ)并舉。

研究顯示腎炎康復(fù)片聯(lián)合西醫(yī)常規(guī)療法在DN治療中優(yōu)于單純西醫(yī)療法[4,6]。腎炎康復(fù)片具有減少血液中IL-6、TNF-α等因子水平，減輕腎臟炎癥狀態(tài)[19]；改善DN環(huán)境下的高黏、高凝的血液流變學(xué)狀態(tài)，增加腎組織血液灌注；調(diào)節(jié)腎臟組織細(xì)胞增殖和凋亡[20]等作用，對(duì)DN治療有多通路、多靶點(diǎn)、多功效的特點(diǎn)。但目前其具體的作用成分及靶點(diǎn)尚未明確。

本研究通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與腎炎康復(fù)片13味藥相關(guān)的化學(xué)成分共有211種，篩選后得出183種的主要化學(xué)成分，包括薯蕷皂苷元、葉酸、前益母草乙素、多種結(jié)構(gòu)的丹參酮、丹酚酸、人參皂苷等。薯蕷皂苷元來自山藥和土茯苓，可改善腎臟炎癥狀態(tài)、減輕氧化應(yīng)激水平等作用以減輕腎臟纖維化[21]。葉酸來自黑豆，其可通過促進(jìn)同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）代謝，抑制由于Hcy的增加引起的腎小球內(nèi)氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)及腎臟微循環(huán)障礙，對(duì)DN起治療作用[22]。丹參的活性成分丹酚酸，可減輕腎臟組織炎癥和增生反應(yīng)，延緩腎臟纖維化進(jìn)程；丹參酮可促進(jìn)葡萄糖的攝取，減輕大鼠腎小管細(xì)胞壞死及凋亡，并能抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的腎損傷[23]。

通過將腎炎康復(fù)片主要化學(xué)成分的作用靶點(diǎn)與DN的相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行匹配，獲得258個(gè)共同靶點(diǎn)。進(jìn)一步進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治黾癙PI網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建獲得43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)，說明腎炎康復(fù)片中的有效成分可能是通過STAT、MAPK、IL、NFKBIA等藥物-疾病共有靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)起作用。STAT參與的JAK/STAT通路與MAPK、NF-κB通路皆參與腎臟炎癥反應(yīng)，通過激活I(lǐng)L-6、IL-8、單核細(xì)胞趨化蛋白-1（monocyte chemotactic protein 1，MCP-1）等多種炎性因子，引起腎臟內(nèi)巨噬細(xì)胞聚集，觸發(fā)免疫應(yīng)答過程，造成腎臟損傷[24-25]。研究表明，腎炎康復(fù)片中的薯蕷皂苷元、葉酸等有效成分可通過抑制MAPK和NF-κB通路對(duì)腎臟起保護(hù)作用[21-22]。而與關(guān)鍵靶點(diǎn)關(guān)聯(lián)較多的中藥丹參，其有效成分如丹酚酸、丹參酮等亦可通過抑制MAPK次級(jí)的ERK1/2蛋白的表達(dá)，抑制腎小球細(xì)胞外基質(zhì)的重構(gòu)[23]。

對(duì)43個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO生物功能富集分析發(fā)現(xiàn)，腎炎康復(fù)片治療DN所涉及的生物過程包括細(xì)胞應(yīng)答（如對(duì)脂多糖、活性氧物質(zhì)的應(yīng)答）、細(xì)胞分裂分化（如白細(xì)胞的分裂分化）、蛋白質(zhì)合成和轉(zhuǎn)運(yùn)等方面，與臨床研究中腎炎康復(fù)片減輕DN中腎臟炎癥反應(yīng)和氧化應(yīng)激水平、修復(fù)腎臟損傷細(xì)胞等功效相對(duì)應(yīng)。KEGG通路富集分析顯示，AGE-RAGE信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、Toll樣受體信號(hào)通路等可能是腎炎康復(fù)片發(fā)揮作用的主要通路。AGE-RAGE通路可通過激活MAPK、NF-κB、JAK/STAT等通路，激活腎臟的氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)，引起腎臟損傷[26]。Toll樣受體（Toll-like receptors，TLR）參與機(jī)體免疫反應(yīng)，其中TRL4可通過激活NF-κB通路，介導(dǎo)腎臟炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激和細(xì)胞破壞[27]。由此推測(cè)腎炎康復(fù)片可能通過下調(diào)高血糖、脂多糖、AGE等介導(dǎo)的上述通路活動(dòng)對(duì)DN起治療作用。

本研究借助網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，基于多成分、多靶點(diǎn)、多通路理論挖掘并分析腎炎康復(fù)片治療DN的潛在作用機(jī)制，為日后關(guān)于腎炎康復(fù)片治療DN更深入的基礎(chǔ)和臨床研究及中藥新藥研制提供一定的理論依據(jù)。但由于數(shù)據(jù)庫(kù)信息可能存在不全面、不及時(shí)更新等情況，篩選主要化學(xué)成分時(shí)僅根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)，忽略了成分的含量、成分間化學(xué)反應(yīng)、成藥制備工藝對(duì)化學(xué)成分的影響等。因此本研究?jī)H為從理論上借助數(shù)據(jù)庫(kù)及他人研究成果分析預(yù)測(cè)探討腎炎康復(fù)片治療DN的機(jī)制，尚需更多的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究以驗(yàn)證本研究結(jié)果的合理性和相關(guān)性。