一種純中藥皮膚抑菌劑制作工藝條件的研究

劉美慧，鄧恵靜，蘇小兵，劉欣穎，楊忞暉

(遼寧科技學(xué)院 生物醫(yī)藥與化學(xué)工程學(xué)院，遼寧 本溪117004)

目前市場(chǎng)上常用皮膚抑菌劑的主要成分大多是化學(xué)合成物質(zhì),有的雖然抑菌作用較強(qiáng)，但具有一定的毒性，對(duì)人體易產(chǎn)生耐藥性，對(duì)環(huán)境也有一定的污染性〔1〕，而中草藥具有安全性高、來(lái)源廣泛、療效持久、無(wú)耐藥性、攜帶方便等優(yōu)勢(shì)，故研發(fā)純中藥皮膚抑菌劑具有廣闊的市場(chǎng)前景。本研究根據(jù)中藥理論篩選八種中藥，研究其不同配比在不同的溶劑、溫度、浸泡方式、浸泡時(shí)間等工藝條件下，對(duì)幾種菌體的抑菌效果，為進(jìn)一步制作純中藥皮膚抑菌劑提供科學(xué)的工藝條件參數(shù)。

1 材料及主要試驗(yàn)設(shè)備

1.1 試驗(yàn)材料

藥劑：黃柏、苦參、藿香等八種中草藥，均購(gòu)于本溪成大方圓醫(yī)藥店。

實(shí)驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌、大腸埃希氏菌、枯草芽孢桿菌、青霉菌等菌種由遼寧科技學(xué)院無(wú)菌實(shí)驗(yàn)室提供。

培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、察氏培養(yǎng)基

1.2 試驗(yàn)設(shè)備

超凈工作臺(tái)、高壓滅菌鍋、恒溫培養(yǎng)箱、XO-150超聲波細(xì)胞破碎機(jī)。

2 試驗(yàn)方法

2.1 藥劑制備

將八種中藥破碎成粉末，以無(wú)菌水、75%濃度乙醇、5%、7.5%、10%醋酸分別作為溶劑，按A組(2∶2∶2∶1∶1∶1∶0.5∶0.5)、B組(1∶2.5∶2.5∶1.5∶1∶0.5∶0.5∶0.5)、C組(2.5∶1.5∶1.5∶0.5∶1.5∶1.5∶0.5∶0.5)三個(gè)比例混合及各單味藥劑，制成含生藥量0.005 g/ml、0.01 g/ml、0.02 g/ml,放置在20 ℃、28 ℃、36 ℃下，經(jīng)2天、5天、8天傳統(tǒng)浸泡。超聲波萃取是將一定量中藥放入最適濃度溶劑進(jìn)行超聲破碎，設(shè)定功率為150 W ,頻率為20 kHz,工作時(shí)間5分，獲得各種處理的藥劑提取液。

2.2 供試菌液的制備

取新鮮菌株斜面培養(yǎng)物，將菌株接種到液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細(xì)菌在37 ℃、霉菌在28 ℃條件下，搖床振蕩約18小時(shí)，用無(wú)菌生理鹽水稀釋成濃度為1×106～1×107cfu/ml的菌懸液〔2〕。

2.3 濾紙片制備

用打孔器將化學(xué)分析濾紙制成6 mm的圓片置于培養(yǎng)皿中，干熱滅菌 2天(160 ℃)，冷卻后，在無(wú)菌狀態(tài)下將1 mL提取的藥液加入培養(yǎng)皿中，讓其充分滲透后將濾紙片放入已滅菌的平皿中待用。

2.4 濾紙片抑菌試驗(yàn)

將培養(yǎng)基制成平板，用移液槍將0.1 mL供試菌液加到平皿上均勻涂布。用無(wú)菌鑷子夾取浸透藥液的濾紙片貼在含菌平板上，每平皿放4片，其中3片為藥劑，1片為只用溶劑的空白對(duì)照組。每種藥液做3次重復(fù)。細(xì)菌放在37 ℃培養(yǎng)箱、霉菌放在28 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)〔3〕。記錄每皿抑菌圈的直徑的平均值作為結(jié)果分析。數(shù)據(jù)采用SPSS軟件處理分析，圖采用EXCEL軟件制作。

3 結(jié)果與分析

3.1 浸泡方式及溶劑對(duì)抑菌性的影響

以金黃色葡萄球菌為涂布菌種，以無(wú)菌水、75%乙醇、5%、7.5%、10%醋酸分別作為溶劑、制成含生藥0.02 g/ml的單味藥浸泡液和八種藥物按A比例混合浸泡液。結(jié)果顯示，以單味藥劑單獨(dú)浸泡與八味藥混合后浸泡的抑菌性有顯著差異，P<0.001。每個(gè)單味藥用無(wú)菌水浸泡，均無(wú)抑菌性，而將八味藥混合后用無(wú)菌水浸泡則有抑菌性，說(shuō)明中藥配伍有利于藥效發(fā)揮，各藥相互間具有協(xié)同性。不同比例乙醇和醋酸浸泡各單味藥劑都有抑菌性，但八味藥劑混合藥效大于各單味藥效。溶劑中抑菌性：醋酸>乙醇>無(wú)菌水。醋酸為溶劑，抑菌效果好，其中10%醋酸抑菌效果最佳(如圖1)。

圖1 浸泡方式及不同溶劑對(duì)抑菌性影響

3.2 不同配比及浸泡溫度對(duì)抑菌性的影響

以金黃色葡萄球菌懸液涂布、10%醋酸為溶劑進(jìn)行浸泡，制成含生藥0.02 g/ml，試驗(yàn)不同配比(A、B、C)及浸泡溫度(20 ℃、28 ℃、36 ℃)對(duì)抑菌性的影響。結(jié)果為A配比抑菌性最佳，隨著浸泡溫度的提高，抑菌性也提高。故在一定范圍內(nèi)，適當(dāng)加溫，有利于藥用成分的浸出(如圖2)。

圖2 不同配比及浸泡溫度對(duì)抑菌性的影響

3.3 浸泡時(shí)間對(duì)不同菌種抑菌性的影響

以A配比，36 ℃，10%醋酸浸泡2天、5天、8天,對(duì)三種細(xì)菌和一種霉菌的抑菌性試驗(yàn)。結(jié)果為浸泡2天對(duì)大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌等細(xì)菌抑菌性較強(qiáng)，隨著浸泡時(shí)間延長(zhǎng)，對(duì)霉菌抑菌性增強(qiáng)，而對(duì)細(xì)菌抑菌性反而下降。該藥劑對(duì)霉菌的抑菌效果強(qiáng)于對(duì)細(xì)菌的抑制作用。綜合總的抑菌效果以2天抑菌效果較佳。浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)是否影響藥物穩(wěn)定性而使細(xì)菌抑菌性下降，還有待研究(如圖3)。

圖3 浸泡時(shí)間對(duì)三種菌抑菌性影響

3.4 傳統(tǒng)浸泡法與超聲波萃取對(duì)抑菌性的影響

以A配比，10%醋酸為溶劑，36 ℃，傳統(tǒng)浸泡2天，采用三種處理：①單味藥浸泡后再按比例混合，②按比例混合再浸泡，③按比例混合后再用超聲波萃取等方法獲得藥劑提取液，含生藥0.02 g/ml，以三種細(xì)菌、青霉菌涂布平板，比較超聲波萃取與傳統(tǒng)浸泡提取液對(duì)上述菌體抑菌效果。抑菌性結(jié)果顯示，單味藥單獨(dú)浸泡再混合<按比例混合再浸泡，中藥配方混合在一起浸泡有利于藥性的更好發(fā)揮，這個(gè)結(jié)論是否具有通用性或普適性還有待進(jìn)一步深入探究。而最佳傳統(tǒng)浸泡條件與超聲波萃取兩者差異不大。但超聲波萃取時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單、得率高等優(yōu)點(diǎn)，故在中藥提取中已被廣泛應(yīng)用。該藥劑對(duì)霉菌的抑菌比對(duì)細(xì)菌抑菌效果好。

圖4 提取方式對(duì)不同菌抑菌性的影響

3.5 生藥濃度對(duì)抑菌性影響

生藥濃度大小不僅影響藥效，還涉及制藥成本。為探究配制生藥濃度對(duì)抑菌性影響，以A配比、10%醋酸為溶劑、36 ℃、傳統(tǒng)浸泡2天，配制含生藥量0.005 g/ml、0.01 g/ml、0.02 g/ml三個(gè)濃度藥劑，以金黃色葡萄球菌、青霉菌懸液涂布平板。結(jié)果顯示抑菌性為：0.005 g/ml<0.01 g/ml<0.02 g/ml。在一定范圍內(nèi)，生藥濃度越大，抑菌效果越好，但制劑成本會(huì)增加，0.02 g/ml即可滿足制劑需要。

圖5 生藥濃度對(duì)抑菌性影響

4 結(jié)論

通過(guò)選用不同溶劑、控制藥液配比、浸泡時(shí)間、溫度及提取方式的抑菌實(shí)驗(yàn)，得到制作純中藥皮膚抑菌劑工藝條件參數(shù)：

A組(黃柏、苦參、藿香等八味藥按22∶22∶22∶12∶12∶

12∶0.52∶0.5)各單味藥配比后，生藥量0.02 g/ml，在10%醋酸、36 ℃?zhèn)鹘y(tǒng)浸泡2天條件下，抑菌效果最好，超聲波萃取法比傳統(tǒng)浸泡法用時(shí)短，方便快捷，值得推廣。本藥劑對(duì)霉菌的抑菌效果強(qiáng)于細(xì)菌，對(duì)皮膚抑菌效果良好。