肺炎支原體肺炎患兒肺泡灌洗液中IL-6、IL-25、IL-35的水平及其臨床意義

顧麗娜，郭 赟，項紅霞，徐惠良?

（無錫市兒童醫(yī)院1. 兒感染性疾病科2.兒呼吸內(nèi)科，江蘇 無錫 214000）

肺炎支原體（mycoplasma pneumoniae，MP）是一種介于細(xì)菌與病毒之間的病原微生物。研究表明，MP 是引起社區(qū)獲得性肺炎（community-acquired pneumonia，CAP）的主要病原體之一。近年來，隨著肺炎支原體肺炎（mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP） 發(fā) 病率的逐漸上升，難治性MPP 及重癥MPP 越來越受到臨床上的重視。MPP 患者多為兒童。有研究指出，部分MPP 患兒可繼發(fā)壞死性肺炎、大量胸腔積液及閉塞性細(xì)支氣管炎。目前，臨床上對MPP 的具體發(fā)病機(jī)制尚未闡明。但有大量的研究證實，MPP 的發(fā)生與患兒存在免疫功能損傷密切相關(guān)。多種炎性細(xì)胞因子在MPP 的發(fā)生及進(jìn)展中起著重要的作用。有研究指出，MP 感染機(jī)體后會激活T 淋巴細(xì)胞，引起輔助型T 細(xì)胞1(T helper 1 cell，Th1)/ 輔 助 型T 細(xì) 胞2(T helper 2 cell，Th2) 的失衡，從而可影響多種信號傳導(dǎo)通路[1]。本文主要是探討MPP 患兒肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）中白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）、白細(xì)胞介素-25（interleukin-25，IL-25）、白細(xì)胞介素-35（interleukin-35，IL-35）的水平及其臨床意義。

1 對象與方法

1.1 研究對象

選擇2019 年1 月至2020 年12 月在無錫市兒童醫(yī)院住院治療的30 例MPP 患兒及同期因支氣管異物或畸形入院的20 例患兒作為研究對象。將其中30 例MPP 患兒作為MPP 組，將其中20 例因支氣管異物或畸形入院的患兒作為對照組。MPP 組患兒的納入標(biāo)準(zhǔn)是：1）病情符合《實用兒科學(xué)》中關(guān)于MPP 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，有呼吸道癥狀，影像學(xué)檢查提示其存在肺部炎癥浸潤；2）血清特異性免疫球蛋白M 抗體呈陽性；3）未合并細(xì)菌、病毒及真菌感染；4）未合并肺結(jié)核、支氣管哮喘或其他肺部疾??；5）近期內(nèi)未應(yīng)用過糖皮質(zhì)激素及免疫調(diào)節(jié)劑；6）未合并過敏性疾病或免疫相關(guān)性疾病。MPP 組30 例患兒中有男16 例，女14 例；其年齡為2 ～14 歲，平均年齡（3.8±1.1）歲。對照組20 例患兒中有男12 例，女8 例；其年齡為2 ～14 歲，平均年齡（4.2±2.7）歲。兩組患兒的性別構(gòu)成比及年齡相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 研究方法

1.2.1 標(biāo)本采集 對兩組患兒均進(jìn)行纖維支氣管鏡檢查和支氣管肺泡灌洗術(shù)，使用利多卡因?qū)ζ溥M(jìn)行氣道黏膜表面麻醉。置入纖維支氣管鏡，探查各支氣管段后，用溫生理鹽水反復(fù)灌洗患側(cè)肺段。收集BALF 并退鏡，保證BALF 的回收率在40% 以上。將收集到的標(biāo)本送往實驗室進(jìn)行檢測，在4℃下對其進(jìn)行離心處理（離心速度為1000 r/min，離心時間為10 min），留取上清液，儲存于-80℃的冰箱中待檢。

1.2.2 細(xì)胞因子測定 采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)檢測兩組患兒BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 的含量。IL-6 檢測試劑盒由美國R&D Systems 公司提供，IL-25檢測試劑盒和IL-35 檢測試劑盒分別由武漢博士德生物公司、杭州聯(lián)科生物公司提供，所有實驗步驟均嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組患兒BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 的水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 24.0 軟件對本研究所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料用均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗，計數(shù)資料用百分比（%）表示，采用χ2 檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

MPP 組患兒BALF 中IL-6 的水平高于對照組患兒，其BALF 中IL-35 的水平低于對照組患兒，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；其BALF 中IL-25 的水平與對照組患兒相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 兩組患兒BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 水平的比較（± s）

表1 兩組患兒BALF 中IL-6、IL-25 及IL-35 水平的比較（± s）

組別 IL-6（pg/mL） IL-25（pg/mL） IL-35（ng/mL）MPP 組（n=30） 36.96±21.54 52.06±7.25 2.18±0.64對照組（n=20） 19.19±13.89 51.77±3.92 2.77±0.84 t 值 2.220 0.133 -2.073 P 值 0.039 0.896 0.049

3 討論

MPP 是臨床上常見的一種呼吸道疾病。在所有CAP患兒中，MPP 患兒占20% ～30%[2]。MPP 的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為免疫因素在MPP 的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用。MP 攜帶的黏附分子可與宿主靶細(xì)胞結(jié)合，使肺組織吞噬細(xì)胞的功能喪失，從而可影響人體的免疫功能。MP 引起肺部炎癥時，Th1 被激活，其在分泌細(xì)胞因子的同時可造成肺組織的損傷[3]。在對MPP 患兒進(jìn)行支氣管肺泡灌洗術(shù)時收集的BALF 直接來自于患側(cè)肺段，能直接反映MP 感染后肺組織的免疫炎癥狀態(tài)。IL-6是一種具有廣泛生物學(xué)活性的細(xì)胞因子。在人體出現(xiàn)炎癥反應(yīng)時，IL-6 可誘導(dǎo)T 淋巴細(xì)胞活化，促進(jìn)炎癥因子的產(chǎn)生，同時可抑制Th1 極化，促進(jìn)Th2 分化，從而可加快B 淋巴細(xì)胞的分化增殖，并促進(jìn)其產(chǎn)生抗體。上述機(jī)制與MPP 患兒出現(xiàn)的肺外癥狀可能有一定的關(guān)系[4]。大量的研究表明，MPP 急性期患兒會出現(xiàn)血清IL-6 水平明顯增高的情況[5]。本研究的結(jié)果顯示，MPP 組患兒BALF 中IL-6 的水平高于對照組患兒，P＜0.05。這提示，IL-6 參與了MP 感染后的肺部炎癥病理過程。IL-25是由活化的Th2 產(chǎn)生的一種炎癥因子。有研究指出，IL-25可誘導(dǎo)和增強(qiáng)Th2 型免疫反應(yīng)，并可抑制Th1 及輔助型T 細(xì)胞17(T helper 17 cell，Th17) 介導(dǎo)的免疫反應(yīng)[6]。本研究的結(jié)果顯示，MPP 組患兒BALF 中IL-25 的水平與對照組患兒相比，P＞0.05。這提示，IL-25 并沒有參與到MPP 發(fā)生發(fā)展的過程中，但筆者認(rèn)為此研究結(jié)論需要更多實驗數(shù)據(jù)的支持。IL-35 是一種具有免疫抑制功能的細(xì)胞因子。其受體包括四種不同的二聚體。有研究指出，IL-35 的兩個亞基在與受體結(jié)合后可通過轉(zhuǎn)錄因子傳遞信號，激活酪氨酸激酶- 信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子信號通路，參與免疫調(diào)節(jié)。本研究的結(jié)果顯示，與對照組患兒相比，MPP 組患兒BALF 中IL-35 的水平較低，P＜0.05。這提示，IL-35 作為一種抑制性細(xì)胞因子，在MP 感染后的肺部炎癥病理過程中發(fā)揮著免疫調(diào)節(jié)作用，但其具體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制仍需要進(jìn)一步的研究。有研究指出，MP 在進(jìn)入人體并與相關(guān)受體結(jié)合后，可促進(jìn)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子與趨化因子，介導(dǎo)廣泛的免疫反應(yīng)，從而可導(dǎo)致T 細(xì)胞亞群的紊亂，使Th1/Th2 失衡。當(dāng)Th2 型細(xì)胞免疫占主要優(yōu)勢時，Th1 型免疫反應(yīng)會受到抑制，進(jìn)而可使人體無法發(fā)揮正常的免疫功能，出現(xiàn)免疫抑制。細(xì)胞因子作為免疫細(xì)胞之間傳遞信息的重要物質(zhì)，它的失衡會在MPP 的發(fā)生和發(fā)展中起到重要的作用。在本次研究中，MPP 組患兒BALF 中IL-6 和IL-35的水平與對照組患兒相比存在明顯差異，這提示IL-6 及IL-35 均與MPP 的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

綜上所述，免疫損傷機(jī)制及其過程中所產(chǎn)生的細(xì)胞因子變化在MPP 的發(fā)生及進(jìn)展中有著重要的作用。本次研究發(fā)現(xiàn)MPP 組患兒BALF 中IL-6、IL-35 的水平與對照組患兒相比存在顯著差異，提示這兩種細(xì)胞因子參與了MPP 的發(fā)生發(fā)展，但其具體的免疫調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。