匯仁腎寶片對(duì)脾虛模型大鼠的影響

★ 高羽 胡浩武 李勝華 周青罡 邢小燕 孫曉波（.江西匯仁藥業(yè)股份有限公司 南昌 33005；.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院藥用植物研究所 北京 0093）

匯仁腎寶片由22 味中藥精制而成，包含淫羊藿、補(bǔ)骨脂、制何首烏、蛇床子、熟地黃、當(dāng)歸、金櫻子、黃芪、紅參等，具有調(diào)和陰陽(yáng)、溫陽(yáng)補(bǔ)腎、扶正固本的功效，臨床上適用于治療腰腿酸痛、陽(yáng)痿遺精、精神不振、夜尿頻多、畏寒怕冷、婦女月經(jīng)過(guò)多、白帶清稀等癥狀。腎寶片為非處方藥，近年來(lái)隨著用藥人群日益廣泛，少部分患者偶見(jiàn)惡心、嘔吐、腹瀉等不良反應(yīng)。有研究表明有些藥物的不良反應(yīng)多發(fā)生于脾胃虛弱患者［1］。為此，本實(shí)驗(yàn)建立脾虛大鼠模型，給予腎寶片，觀察腎寶片對(duì)脾虛模型大鼠的影響，以驗(yàn)證其是否產(chǎn)生某些不良反應(yīng)，為臨床安全使用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 酶標(biāo)儀（帝肯上海公司）；電子天平（梅特勒托利多儀器上海有限公司）。

SPF 級(jí)SD 大鼠70 只，雄性，體質(zhì)量160～180 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（京）2016-0006。大鼠飼養(yǎng)環(huán)境為屏障系統(tǒng)，室溫20～26 ℃，濕度40%～70 %，換氣量15 次/h，光照12 h。

腎寶片細(xì)粉（江西匯仁藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：1703111）；利血平注射液（天津金耀藥業(yè)有限公司，批號(hào)：140241）；人白細(xì)胞介素2（IL-2）試劑盒（批號(hào)：A003000）、人白細(xì)胞介素6（IL-6）試劑盒（批號(hào)：A002998）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）試劑盒（批號(hào)A002987）均購(gòu)于北京易科拜德科技有限公司。

1.2 方法 50 只雄性SD 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d 后，隨機(jī)取10 只為空白對(duì)照組，其余動(dòng)物每日腹腔注射利血平0.5 mg/（kg·d），連續(xù)10 d，空白對(duì)照組按照同樣的方式給予生理鹽水。造模結(jié)束后，以體重減輕、肛溫降低、出現(xiàn)典型的脾虛癥狀為標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)造模成功的大鼠進(jìn)行重新隨機(jī)分組，分為4組：脾虛模型組及腎寶片高、中、低劑量（1 323、661.5、330.75 mg/kg，分別相當(dāng)于臨床劑量的2 倍、1 倍、0.5 倍）。腎寶片各劑量組灌胃給藥，空白對(duì)照組、模型組灌胃同體積飲用水。每日1 次，連續(xù)給藥7 d。

1.3 觀測(cè)指標(biāo) 體重測(cè)定：用電子天平稱(chēng)量，每周稱(chēng)量1 次。

肛溫測(cè)定：溫度計(jì)涂上凡士林后從肛門(mén)插入3.5 cm，測(cè)量3 次取均值，每天測(cè)量。

一般狀態(tài)觀察：倦怠懶動(dòng)、瞇眼、弓背、蜷縮堆聚、糞便溏泄、皮毛干燥情況。每天均進(jìn)行一般狀態(tài)情況觀察，并進(jìn)行評(píng)分、記錄、拍照。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)癥狀計(jì)為0 分，輕度癥狀計(jì)為1 分，嚴(yán)重癥狀計(jì)為2 分。

脾臟及胸腺臟器指數(shù)測(cè)定：實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，將各組動(dòng)物脫臼處死，解剖剝離脾臟及胸腺，用電子天平稱(chēng)定質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)。

血清生化指標(biāo)的測(cè)定：末次給藥后，各組大鼠禁食不禁水16 h，經(jīng)腹腔注射100 mg/L 水合氯醛（3.5 mL/kg）麻醉，腹主動(dòng)脈取血，3 500 r/min 離心15 min 分離血清。采用IL-2、IL-6、TNF-α 測(cè)試盒進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 18.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)大鼠體重的影響 采用利血平復(fù)制大鼠脾虛模型前，各組動(dòng)物體重均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。造模后所有模型動(dòng)物體重與對(duì)照組相比顯著下降（P<0.01）。給藥7 d 后，各給藥組動(dòng)物體重與模型組相比沒(méi)有明顯差異（P>0.05）。

2.2 對(duì)大鼠肛溫的影響 采用利血平復(fù)制大鼠脾虛模型前后，各組動(dòng)物肛溫均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。給藥7 d 后，各組動(dòng)物肛溫仍沒(méi)有明顯差異（P>0.05）。

2.3 對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響 采用利血平造模前，各組動(dòng)物活動(dòng)、行為正常，反應(yīng)機(jī)敏，被毛光潔，無(wú)瞇眼、弓背、蜷縮、大便無(wú)稀溏，每只受試動(dòng)物均未見(jiàn)其它異常表現(xiàn)。造模后，造模組動(dòng)物出現(xiàn)嚴(yán)重瞇眼、弓背、蜷縮、倦怠、糞便時(shí)軟時(shí)稀等癥狀。給藥7 d 后，與模型組比較，腎寶片高、中、低劑量組大鼠精神好轉(zhuǎn)、活動(dòng)增多、大便由稀變干，一般狀態(tài)評(píng)分顯著降低（P<0.01），一般狀態(tài)有所改善，見(jiàn)表1。

表1 腎寶片對(duì)脾虛大鼠一般狀態(tài)的影響（±s，n=10）分

表1 腎寶片對(duì)脾虛大鼠一般狀態(tài)的影響（±s，n=10）分

注：與對(duì)照組比較，#P<0.01；與模型組比較，*P<0.01。

組別造模前造模后給藥1 周給藥前低劑量組0±04.0±1.6#0.9±0.6#*中劑量組0±04.6±1.1#0.7±0.5#*高劑量組0±05.2±1.4#1.0±0#*對(duì)照組0±00±00±0模型組0±04.0±1.7#2.5±0.5#

2.4 對(duì)脾虛模型大鼠臟器指數(shù)的影響 與對(duì)照組比較，模型組的胸腺重量指數(shù)、脾臟重量指數(shù)無(wú)顯著差異；與模型組比較，各給藥組的胸腺重量指數(shù)、脾臟重量指數(shù)無(wú)顯著差異。

2.5 對(duì)脾虛模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響 與對(duì)照組比較，模型組血清的IL-2 明顯降低（P<0.05）；與模型組比較，腎寶片各給藥組的IL-2、IL-6、TNF-α 含量無(wú)顯著差異，但高劑量組對(duì)IL-2 有一定程度的升高。見(jiàn)表2。

表2 腎寶片對(duì)脾虛模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響（±s，n=10） pg/mL

表2 腎寶片對(duì)脾虛模型大鼠血清生化指標(biāo)的影響（±s，n=10） pg/mL

注：與對(duì)照組比較，#P<0.05。

組別IL-2IL-6TNF-α低劑量組 621.68±77.4858.65±9.8380.04±14.60中劑量組 585.02±66.8759.30±4.5476.25±3.94高劑量組 669.23±117.4161.07±11.0585.49±13.33對(duì)照組626.08±102.5962.17±7.8680.51±15.21模型組562.71±122.64#57.15±14.2480.31±19.35

3 討論

利血平所致脾虛證模型是較經(jīng)典的方法之一［2-3］，本實(shí)驗(yàn)采用腹腔注射利血平的方法復(fù)制脾虛大鼠模型。大鼠脾虛模型的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)主要是體質(zhì)量下降，消瘦；倦怠，懶動(dòng)；肛溫?zé)o明顯變化；糞便時(shí)軟、時(shí)溏；食量減少［4］。本實(shí)驗(yàn)中，利血平連續(xù)注射10 d，造模組大鼠出現(xiàn)體重下降、嚴(yán)重瞇眼、弓背、蜷縮、倦怠，糞便時(shí)軟時(shí)稀，偶有便塘等癥狀，一般狀態(tài)評(píng)分顯著降低，類(lèi)似中醫(yī)脾虛的臨床表現(xiàn)，說(shuō)明脾虛大鼠模型造模成功。

脾虛狀態(tài)下，造血系統(tǒng)功能減弱，氣血化生不足，引起免疫系統(tǒng)功能異常［5］。脾臟和胸腺指數(shù)以及細(xì)胞因子如IL-2、IL-6 與TNF-α 是反映動(dòng)物機(jī)體免疫功能的最基本的指標(biāo)［6］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與模型組比較，腎寶片高劑量組對(duì)IL-2 有一定程度的升高，提示腎寶片有使脾虛大鼠低下的免疫學(xué)指標(biāo)恢復(fù)至正常水平的趨勢(shì)。

本次實(shí)驗(yàn)中，脾虛大鼠給予腎寶片后一般狀態(tài)得到明顯改善，并未引起胃腸道的不良反應(yīng)，如嘔吐、腹瀉等，反而大便由稀變干。結(jié)合項(xiàng)目組前期進(jìn)行的腎寶片對(duì)正常大鼠長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究，在腎寶片給藥6 個(gè)月期間動(dòng)物的外觀體征、被毛狀態(tài)、行為活動(dòng)、糞便形狀及顏色等均無(wú)異常［7］。這提示腎寶片在臨床使用時(shí)少部分患者出現(xiàn)的嘔吐、腹瀉等胃腸道癥狀，應(yīng)該與藥物本身無(wú)關(guān)。究其原因，可能與患者的體質(zhì)、飲食起居或同時(shí)合用其他藥物引起藥物相互作用等有一定關(guān)系。